硫酸銅對不同規(guī)格短須裂腹魚苗的急性毒性研究

李天才 劉小帥 劉明昌 李亞松 曾如奎 楊東 鄧龍君 甘維熊

摘要：【目的】明確短須裂腹魚苗對硫酸銅的耐受性，為短須裂腹魚苗培育過程中安全高效用藥提供理論指導。【方法】在水溫（7.3±0.3）℃、溶解氧7.9 mg/L、pH 7.8、CaCO3硬度41.2±0.7 mg/L、光照強度（12 h∶12 h）100 lx、不充氧、不投喂的靜態(tài)條件下，以1齡和2齡短須裂腹魚苗為研究對象，配制不同濃度硫酸銅溶液模擬藥浴過程，根據(jù)累計死亡率（概率單位）與硫酸銅濃度對數(shù)的線性關系、半致死濃度（LC50）、95%置信區(qū)間及安全濃度（SC）等指標評估短須裂腹魚苗對硫酸銅的耐受性。【結果】1齡和2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡，其開始死亡時間與硫酸銅濃度對數(shù)均呈負相關線性關系，浸泡24和48 h的累計死亡率與硫酸銅濃度對數(shù)則呈正相關線性關系。1齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24、48 h的LC50分別為1.018和0.870 mg/L，對應的95%置信區(qū)間分別為[0.944，1.092]mg/L和[0.459，1.281]mg/L，SC為0.191 mg/L;2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24、48 h的LC50分別為4.222和1.011 mg/L，對應的95%置信區(qū)間分別為[3.775，4.670]mg/L和[0.421，1.602]mg/L，SC為0.017 mg/L。采用常用濃度（7.143 mg/L）硫酸銅溶液進行藥浴3 h，1齡和2齡短須裂腹魚苗均未出現(xiàn)中毒或死亡現(xiàn)象，且在藥浴后的3 d恢復期內也無異常。1齡和2齡短須裂腹魚苗在常用濃度硫酸銅溶液中浸泡的累計死亡率曲線均呈斜置的波浪形，存在2個凸起，但中間無平臺期;魚苗死亡頻數(shù)呈不對稱M形分布，即符合二階高斯分布?！窘Y論】硫酸銅對1齡和2齡短須裂腹魚苗的急性毒性至少可列為高毒農藥，其中2齡魚苗耐受性相對較高，但短須裂腹魚苗對硫酸銅急性毒性耐受性較低，在實際生產中建議采用高濃度短時間藥浴法。

關鍵詞： 短須裂腹魚苗;硫酸銅;急性毒性;半致死濃度;安全濃度;死亡頻數(shù)

中圖分類號： S948? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）03-0837-10

Acute toxicity of copper sulfate to the two specifications of Schizothorax wangchiachii fry

LI Tian-cai1， LIU Xiao-shuai1， LIU Ming-chang1， LI Ya-song1， ZENG Ru-kui1，

YANG Dong2， DENG Long-jun1， GAN Wei-xiong1

（1Yalong River Hydropower Development Company， Ltd.， Chengdu? 610000， China; 2Sichuan Ertan Industrial

Development Corporation， Ltd.， Chengdu? 610000， China）

Abstract：【Objective】To determine the resistance of Schizothorax wangchiachii fry to copper sulfate， and provide reference for safe and efficient medication in the breeding of S. wangchiachii fry. 【Method】Under the conditions of water temperature of （7.3±0.3）℃， dissolved oxygen of 7.9 mg/L， pH 7.8， CaCO3 hardness of 41.2±0.7 mg/L， light （12 h∶12 h） of 100 lx， no inflating， no feeding， one-year-old S. wangchiachii fry and ten two-year-old S. wangchiachii fry were materials. Prepared different concentrations of copper sulfate solution to simulate the drug bath process.The tolerance of the fry to copper sulfate was assessed based on the linear relationship of cumulative mortality （probability unit） and? copper sulfate? concentration logarithms， semi-lethal concentration （LC50）， 95% confidence interval and safety concentration（SC）.【Result】One-year-old S. wangchiachii fry and ten two-year-old S. wangchiachii fry were soaked in copper sulfate solution. The results showed that time of fry beginning of dying and the logarithm of the testing concentrations had a negative linear correlation， and there was positive linear correlation between the cumulative mortality rate at both 24 and 48 h and testing concentrations. LC50 of one-year-old S. wangchiachii fry soaked in copper sulfate solution for 24 and 48 h were 1.018 and 0.870 mg/L， 95% confidence intervals were [0.944，1.092]mg/L and [0.459，1.281]mg/L， SC was 0.191 mg/L. LC50 of two-year-old S. wangchiachii fry soaked in copper sulfate solution for 24 and 48 h were 4.222 and 1.011 mg/L， 95% confidence intervals were [3.775，4.670]mg/L and [0.421，1.602]mg/L， and SC was 0.017 mg/L. No poisoning or death occurred in one-year-old S. wangchiachii fry and ten two-year-old S. wangchiachii fry when soaked in common concentration（7.143 mg/L） of copper sulfate solution for 3 h， and no abnormal situation occurred 3 h post soaking. The cumulative mortality curve of one-year-old S. wangchiachii fry and ten two-year-old S. wangchiachii fry soaked in common concentration was oblique wavy with two bulges but no intermediate period. The death frequency of fry was M shape distribution， which was second-order Gaussian distribution. 【Conclusion】Acute toxicity of copper sulfate to one-year-old S. wangchiachii fry and two-year-old S. wangchiachii fry can be listed as highly pesticide， and the resistance of two-year-old S. wangchiachii fry is relatively high. But the resistance of S. wangchiachii fry to acute toxicity of copper sulfate is low. High concentration and short time medicine bath are suggested to prevent the disease of S. wangchiachii fry in actual production.

Key words： Schizothorax wangchiachii fry; copper sulfate; acute toxicity; half lethal concentration;? safe concentration; death frequency

Foundation item： National Major Research and Development Program of China（YHDCA-201795）; Independent Research and Development Project of Yalong River Hydropower Development Company， Ltd.（KY2019-23）

0 引言

【研究意義】短須裂腹魚（Schizothorax wang-chiachii）俗稱緬魚或沙肚，主要分布于我國金沙江、烏江和雅礱江水系，隸屬于鯉科（Cyprinidac）裂腹魚亞科（Schizothoracinae）裂腹魚屬（Schizothorax），是長江上游特有的冷水性魚類（丁瑞華，1994;黃俊等，2019）;因其魚肉營養(yǎng)豐富、味道鮮美（王崇等，2017），而廣受消費者青睞，現(xiàn)已發(fā)展成為當?shù)刂匾慕?jīng)濟魚類之一。但近年來受酷漁濫捕、水電開發(fā)及環(huán)境污染等社會因素的影響（謝平，2017），各水系中的短須裂腹魚資源量急劇減少。為滿足市場消費需求及充分保護短須裂腹魚種質資源，工廠化養(yǎng)殖短須裂腹魚已逐漸興起并形成規(guī)模。硫酸銅作為一種常用的廣譜殺蟲劑，在漁業(yè)養(yǎng)殖中多用于防治寄生蟲病（羅福廣等，2016），但由于硫酸銅本身對魚體有非常大的毒性，使用不當極易導致魚體中毒甚至死亡。因此，科學評估短須裂腹魚苗對硫酸銅急性毒性的耐受性，可為短須裂腹魚工廠化養(yǎng)殖過程中正確使用硫酸銅提供參考依據(jù)。【前人研究進展】魚類硫酸銅急性中毒機理主要表現(xiàn)為銅離子（Cu2+）大量吸附于鰓組織上，致使鰓部產生大量黏液（黃斌和別立潔，2006;趙巧雅等，2018），導致鰓絲及鰓片脫落（Schjolden et al.，2007;趙巧雅等，2018），鰓部形成大量血竇（朱友芳等，2011），阻礙氧氣交換;經(jīng)循環(huán)運輸后肝臟、腎臟等主要器官富集大量Cu2+，導致器官組織形態(tài)和超微結構發(fā)生病變壞死，而造成機能障礙（朱友芳等，2011;李陽等，2018）?？梢?，硫酸銅的毒性強度與魚類的抗逆能力及影響Cu2+濃度和活力的環(huán)境因子密切關聯(lián)。決定魚類自身抗逆能力的因素主要包括種類、規(guī)格和狀態(tài)，相同規(guī)格下不同魚類對硫酸銅急性毒性的耐受性差異明顯（丁淑荃等，2006;蔡文超和區(qū)又君，2009;李代金等，2009;周禮敬等，2012;陳玉翠等，2016）;不同規(guī)格的同種魚類耐受性規(guī)律也因品種而異（Furuta et al.，2008;蔡文超和區(qū)又君，2009），如斑馬魚不同生活史對硫酸銅急性毒性的耐受性呈波動變化（廖偉等，2020）;弱、病、畸、傷等情形會導致魚類對硫酸銅的耐受性明顯降低，而飽食狀態(tài)對硫酸銅的耐受性也顯著低于少量投喂狀態(tài)（Hashemi et al.，2008）。此外，Boeckman和Bidwell（2006）研究發(fā)現(xiàn)，水體中的有機物會與Cu2+絡合、螯合及吸附而降低其濃度，致使硫酸銅毒性不斷衰減。蔡文超和區(qū)又君（2009）研究指出，硫酸銅對多數(shù)魚類的毒性隨水溫升高而增強。Ebrahimpour等（2010）、熊小琴等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，水體硬度也是影響硫酸銅毒性的重要因素，其毒性隨水體硬度的增加而降低，尤其是軟水中的毒性遠高于硬水和極硬水。Boyle等（2020）研究表明，水體pH在6.0左右時硫酸銅對斑馬魚幼魚的毒性最強，是由于pH降低后H+將與Cu2+競爭通過鰓的路徑而減弱其毒性（Santore et al.，2001），pH升高時OH?會與Cu2+結合而導致其濃度降低，致使其毒性降低。漁業(yè)養(yǎng)殖中硫酸銅的指導使用方法為：①全池潑灑硫酸銅終濃度至0.357～0.500 mg/L;②使用7.143 mg/L硫酸銅溶液短時間藥浴?！颈狙芯壳腥朦c】目前，有關短須裂腹魚人工繁育（甘維熊等，2015）、營養(yǎng)價值（王崇等，2017）及其行為探索（顏文斌等，2017）等領域的研究已逐漸深入，但鮮見使用硫酸銅防治短須裂腹魚苗寄生蟲病的研究報道?！緮M解決的關鍵問題】選用不同規(guī)格短須裂腹魚苗為研究對象，配制不同濃度硫酸銅溶液模擬藥浴過程，確定短須裂腹魚苗對硫酸銅的耐受性，以期為短須裂腹魚苗培育過程中安全高效用藥提供理論指導。

1 材料與方法

1. 1 試驗魚苗

2019年11月?lián)迫?018和2019年培育的短須裂腹魚苗作為研究對象，即1齡和2齡魚苗（表1），剔除弱、瘦、病、畸、傷等魚苗后分別暫養(yǎng)于流水圓形養(yǎng)殖缸（直徑50 cm，水深75 cm）中，暫養(yǎng)期間正常投飼及管理，挑選預試驗和正式試驗魚苗前停食1 d。

1. 2 試驗方法

不同規(guī)格短須裂腹魚苗對硫酸銅急性毒性的耐受性試驗在圓形養(yǎng)殖缸（水體積150 L）中進行，試驗系統(tǒng)設在錦屏官地魚類增殖站孵化室內。試驗用水為經(jīng)循環(huán)水過濾系統(tǒng)處理后的雅礱江支流磨子溝溪流，水質符合GB 11607—1989《漁業(yè)水質標準》，水溫（7.3±0.3）℃、溶解氧7.9 mg/L、pH 7.8、CaCO3硬度41.2±0.7 mg/L、光照強度（12 h∶12 h）100 lx，試驗期間不充氧、不投喂。1齡和2齡魚苗處理組的硫酸銅濃度梯度均設3個平行，每組設3個空白對照，每個平行組投放10尾魚苗。

根據(jù)預試驗結果，在魚苗全部死亡的最低濃度與全部存活的最高濃度間設6個濃度梯度（表2）。試驗前先制備15.000 g/L的硫酸銅原液，硫酸銅試劑為CuSO4·5H2O，然后將硫酸銅原液按照各組濃度梯度設計方案加入圓形養(yǎng)殖缸中，攪拌均勻。放入短須裂腹魚苗后每隔2 h檢查1次，當魚苗開始中毒則仔細觀察其中毒癥狀;記錄不同規(guī)格魚苗處理組各濃度梯度的魚苗死亡數(shù)量，并將其撈出-20 ℃保存，試驗周期48 h。短須裂腹魚苗死亡癥狀以鰓蓋停止活動、針刺無反應為準。

在圓形養(yǎng)殖缸中開展短須裂腹魚苗對硫酸銅常用濃度（7.143 mg/L）的耐受性及其恢復試驗，與硫酸銅急性毒性耐受性試驗同時開始。1齡、2齡短須裂腹魚苗處理組分別以120和125尾魚苗各自開展試驗，但均未設平行，試驗期間不充氧、不投喂。試驗開始后3 h內，每隔30 min檢查1次，觀察魚苗的中毒情況，并從2個處理組中分別隨機挑取5尾魚苗轉入清水中進行恢復試驗，連續(xù)觀察3 d，記錄魚苗的恢復情況;3 h后每隔1 h檢查1次，觀察魚苗的中毒情況及記錄死亡數(shù)量，將死亡魚苗撈出測量體重，直至2個處理組的魚苗全部死亡后結束試驗。

1. 3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)魚苗死亡情況計算硫酸銅對短須裂腹魚苗的致死率（p）;運用最小二乘法求出累計死亡率（概率單位）與硫酸銅濃度對數(shù)的線性關系（y=a+bx），然后以直接回歸法（孟紫強，2003）求出硫酸銅對短須裂腹魚苗的半致死濃度（LC50）、標準誤差（σm）及95%置信區(qū)間[LC50-σm，LC50+σm]mg/L，再根據(jù)LC50計算出安全濃度（SC）。試驗數(shù)據(jù)均采用Excel 2013進行統(tǒng)計分析及制圖，并以MATLAB 4.5進行高斯分布擬合。高斯方程擬合：一階y=a·[e-[（x-b）/c]2];二階y=a1·[e-[（x-b1）/c1]2]+a2·[e-[（x-b2）/c2]2]。

p=n/N

lgLC50 （mg/L）=（5-a）/b

σm=[k2（lgLC50-x）+1kb2]

SC（mg/L）=0.3×48 h-LC50/（24 h-LC50/48 h-LC50）2

式中，n為魚苗死亡數(shù)量，N為試驗魚苗數(shù)量，a為截距，b為回歸系數(shù)，k為每組試驗濃度梯度數(shù)，[x]為試驗濃度對數(shù)的平均值;24 h-LC50為24 h的LC50（mg/L），48 h-LC50為48 h的LC50（mg/L）。

2 結果與分析

2. 1 短須裂腹魚苗中毒癥狀

中毒初期：短須裂腹魚苗體表黏液開始增多，偶爾浮游于水體表層，但行動仍非常靈活，對刺激反應迅速，受影響則快速游回水底。中毒中期：魚苗體表可觀察到大量黏液，長期緩慢浮游于水體表層，對輕微刺激無明顯反應，劇烈刺激則快速游回水底，但稍后又游回水體表層;鰓蓋張合頻率降低，呼吸明顯變慢。中毒死亡期：魚苗已無自主游動能力，側躺或平躺于水底，偶爾向上竄動很短距離后又迅速沉回水底;對刺激無明顯反應，鰓蓋偶爾張合，呼吸斷斷續(xù)續(xù)直至死亡;死亡魚體泛白，身體略微彎曲。

2. 2 短須裂腹魚苗死亡情況

2. 2. 1 累計死亡率曲線 1齡短須裂腹魚苗在0.321 mg/L硫酸銅溶液中浸泡48 h無死亡，也未出現(xiàn)應激或中毒癥狀，與空白對照組的短須裂腹魚苗相比其活力無明顯差異;其他濃度梯度下的魚苗均出現(xiàn)死亡，且累計死亡率的升高速率按硫酸銅濃度由高到低依次排列。0.507和0.807 mg/L硫酸銅溶液的累計死亡率曲線呈梯步形上升趨勢;1.279、2.029和3.214 mg/L硫酸銅溶液的累計死亡率則呈快速上升趨勢，其累計死亡率曲線均呈Z字鏡像形（圖1），至浸泡20 h時3.214 mg/L硫酸銅溶液中的魚苗全部死亡，而1.279和2.029 mg/L硫酸銅溶液的累計死亡率分別于試驗中后期進入平臺期。

2齡短須裂腹魚苗在0.400、0.634和1.005 mg/L硫酸銅溶液中于浸泡28～34 h出現(xiàn)首尾死亡，隨后魚苗斷斷續(xù)續(xù)出現(xiàn)死亡;在1.529、2.524和4.000 mg/L硫酸銅溶液中，出現(xiàn)首尾死亡后魚苗連續(xù)死亡，累計死亡率呈快速上升趨勢，至浸泡36 h時4.000 mg/L硫酸銅溶液中的魚苗全部死亡，其魚苗累計死亡率曲線呈S形（圖2）。

2. 2. 2 開始死亡時間與硫酸銅濃度 由圖3可知，1齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡，其開始死亡時間與硫酸銅濃度對數(shù)呈負相關線性關系，線性回歸方程為：y=-14.088x+16.362（R?=0.99）。由于試驗期間0.321 mg/L硫酸銅溶液中的魚苗未出現(xiàn)死亡，開始死亡時間無法確定，因此線性回歸方程中x對應區(qū)間為[-0.295，0.507]，即硫酸銅濃度區(qū)間為[0.507，3.214]mg/L。2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡，其開始死亡時間與硫酸銅濃度對數(shù)也呈負相關線性關系，線性回歸方程為：y=-23.287x+31.210（R?=0.97），其中x對應區(qū)間為[-0.398，0.602]，即硫酸銅濃度區(qū)間為[0.400，4.000]mg/L。

2. 2. 3 累計死亡率與硫酸銅濃度 1齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24和48 h的累計死亡率與硫酸銅濃度對數(shù)均呈正相關線性關系（圖4），線性回歸方程分別為：y=5.5436x+4.9567（R?=0.96）、y=5.3988x+5.3272（R?=0.93）。由于y取值區(qū)間均為[1.91，8.09]，故x對應區(qū)間分別為[-0.549，0.636]和[-0.633，0.512]，即硫酸銅濃度區(qū)間分別為[0.282，4.320]mg/L和[0.233，3.249]mg/L。

2齡短須裂腹魚苗在濃度等于或低于1.592 mg/L硫酸銅溶液浸泡24 h均未出現(xiàn)死亡，而在高于該濃度硫酸銅溶液中浸泡24 h的累計死亡率與硫酸銅濃度對數(shù)呈正相關線性關系（圖5），線性回歸方程為：y=7.3694x+0.3898（R?=0.99），由于y取值區(qū)間為[1.91，8.09]，故x對應區(qū)間為[0.206，1.045]，即硫酸銅濃度為[1.607，11.092]mg/L;同時可認為魚苗累計死亡率與硫酸銅濃度對數(shù)在（-∞，0.206]區(qū)間呈線性關系，線性回歸方程為：y=1.91，即硫酸銅濃度區(qū)間為[0，1.607]mg/L。2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡48 h的累計死亡率與硫酸銅濃度對數(shù)呈正相關線性關系，線性回歸方程為：y=4.5415x+4.9781（R?=0.97），由于y取值區(qū)間為[1.91，8.09]，故x對應區(qū)間為[-0.675，0.685]，即硫酸銅濃度為[0.211，4.844]mg/L。

2. 3 半致死濃度（LC50）與安全濃度（SC）

由表3可知，1齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24和48 h的LC50分別為1.018和0.870 mg/L，對應的95%置信區(qū)間分別為[0.944，1.092]mg/L和[0.459，1.281]mg/L，SC為0.191 mg/L。2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24和48 h的LC50分別為4.222和1.011 mg/L，對應的95%置信區(qū)間分別為[3.775，4.670]mg/L和[0.421，1.602]mg/L，SC為0.017 mg/L。

2. 4 硫酸銅常用濃度對短須裂腹魚苗的毒性

2. 4. 1 短須裂腹魚苗中毒情況 1齡和2齡短須裂腹魚苗在7.143 mg/L硫酸銅溶液中浸泡3 h后均未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡現(xiàn)象;其間每30 min撈出的5尾魚苗在恢復期（3 d）內也未發(fā)生死亡，恢復后的魚苗健康且有活力，與空白對照組短須裂腹魚苗無明顯差異。1齡和2齡短須裂腹魚苗分別于浸泡6和11 h后出現(xiàn)首尾死亡，之后魚苗連續(xù)不斷死亡，累計死亡率快速上升，分別在浸泡10和16 h附近達50.00%，并于浸泡20和26 h全部死亡。1齡和2齡短須裂腹魚苗累計死亡率曲線均呈斜置的波浪形，存在2個凸起，但中間無平臺期（圖6）。

2. 4. 2 魚苗死亡頻數(shù)分布情況 1齡短須裂腹魚苗在7.143 mg/L硫酸銅溶液中浸泡，魚苗死亡起于浸泡6 h終于浸泡20 h，其過程跨越15 h。在魚苗累計死亡過程中，其死亡頻數(shù)有3個拐點，2個峰值分別為：浸泡10 h時死亡16尾（占17.8%）和浸泡17 h時死亡7尾（占7.8%），1個低點為浸泡13 h時死亡2尾（占2.2%）。魚苗死亡頻數(shù)呈不對稱M形分布（圖7），符合二階高斯分布，回歸方程為：y=17.15e-[（x-9.587）/1.928]2+ 6.991e-[（x-16.5）/2.507]2（R2=0.98，x∈N）。

2齡短須裂腹魚苗在7.143 mg/L硫酸銅溶液中浸泡，魚苗死亡起于浸泡11 h終于浸泡26 h，其過程跨越16 h。在魚苗累計死亡過程中，其死亡頻數(shù)有3個拐點，2個峰值分別為：浸泡15 h死亡15尾（占15.8%）和浸泡21 h死亡8尾（占8.4%），1個低點為浸泡19 h死亡3尾（占3.2%）。魚苗死亡頻數(shù)呈不對稱M形分布（圖8），符合二階高斯分布，回歸方程為：y=15.62e-[（x-15.3）/2.195]2+7.579e-[（x-21.44）/2.516]2（R2=0.95，x∈N）。

3 討論

3. 1 短須裂腹魚苗對硫酸銅毒性的耐受性

本研究結果表明，大齡短須裂腹魚苗對硫酸銅毒性耐受性更強。由短須裂腹魚苗開始死亡時間與硫酸銅濃度對數(shù)的線性回歸方程可看出，2齡短須裂腹魚苗對應的方程斜率絕對值更大，說明大齡短須裂腹魚苗對硫酸銅濃度變化更敏感。1齡和2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24和48 h，僅2齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡24 h時未達100.00%的累計死亡率;此外，1齡和2齡短須裂腹魚苗開始死亡時間與硫酸銅濃度對數(shù)均呈負相關線性關系，對應的線性回歸方程分別為y=-14.088x+16.362（R?=0.99）和y=-23.287x+31.210（R?=0.97）。由1齡和2齡短須裂腹魚苗累計死亡率（概率單位）與硫酸銅濃度對數(shù)的關系圖可知，在已標出回歸直線對應的硫酸銅濃度之外，其左側所有硫酸銅濃度區(qū)間對應的魚苗累計死亡率均為0，而右側所有硫酸銅濃度區(qū)間對應的魚苗累計死亡率均為100.00%。可見，短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡的累計死亡率（概率單位）與硫酸銅濃度對數(shù)呈分段線性關系。

在硫酸銅常用濃度下，1齡和2齡短須裂腹魚苗的死亡頻數(shù)均有2個峰值，對應累計死亡率曲線中的2個凸起;而累計死亡率曲線為斜置的波浪形可視為2個S形的拼接，分別對應二階高斯分布中每個峰的累積過程。從二階高斯方程分析可知，若試驗對象大幅減小，第1峰值和第2峰值也將劇烈降低;綜合硫酸銅常用濃度下1齡和2齡短須裂腹魚苗死亡頻數(shù)回歸方程中第2峰值較小，故推測各硫酸銅濃度梯度中1齡和2齡短須裂腹魚苗死亡頻數(shù)二階高斯分布圖形可能更符合一階高斯方程（圖9），具體表現(xiàn)為：第1峰值劇烈降低、第2峰值幾乎為1或2，而低點附近值均降至0，與Anderson和Spear（1980）的研究結果相似。在硫酸銅常用濃度對短須裂腹魚苗的毒性試驗基礎上，繼續(xù)擴大試驗對象數(shù)量，魚苗死亡頻率曲線峰的數(shù)量是否增加尚有待進一步探究。在相同規(guī)格下，硫酸銅濃度越高則短須裂腹魚苗從開始至全部死亡的時間跨度越短，因此1齡短須裂腹魚苗在硫酸銅溶液中浸泡的累計死亡率曲線由S形被壓縮成Z字鏡像形。

3. 2 硫酸銅對短須裂腹魚苗的毒性

根據(jù)魚苗累計死亡率曲線呈S形、魚苗累計死亡率（概率單位）與硫酸銅濃度對數(shù)呈線性關系及不同硫酸銅濃度下魚苗死亡頻數(shù)呈正態(tài)分布，可選用直接回歸法推算試驗期間任一時間點的LC50及其95%置信區(qū)間（孟紫強，2003;李磊等，2019）。通過與前人的相關研究進行對比，結果（表4）發(fā)現(xiàn)，硫酸銅對1齡短須裂腹魚苗的LC50遠低于丁鱥（喬德亮等，2005）、厚頜魴（李代金等，2009）、鰱（牟洪民等，2010）及中國花鱸（朱友芳等，2011）等常見淡水魚，但高于小規(guī)格的花（丁淑荃等，2006）和草魚（葉素蘭和余治平，2007）;2齡短須裂腹魚苗的LC50也遠低于丁鱥（喬德亮等，2005）、厚頜魴（李代金等，2009）及鰱（牟洪民等，2010）等常見淡水魚，說明短須裂腹魚苗對硫酸銅耐受性相對較低，在養(yǎng)殖過程中應謹慎使用硫酸銅。依據(jù)GB/T 31270.12—2014《化學農藥環(huán)境安全評價試驗準則 第12部分：魚類急性毒性試驗》關于農藥對魚類的毒性等級劃分（表5）可知，硫酸銅對小規(guī)格草魚、花及短須裂腹魚的毒性至少可列為高毒農藥。這是由于Cu2+在諸多金屬離子中其毒性較大，也是硫酸銅作為常用廣譜殺蟲劑的原因之一（徐永江等，2004;陳玉翠和陳錦云，2016;熊小琴等，2016）。

在水產養(yǎng)殖生產中，通常采用全池潑灑硫酸銅0.357～0.500 mg/L（銅鐵合劑5∶2配比濃度0.5～0.7 mg/L）進行浸泡，或拉網(wǎng)集中后以7.143 mg/L硫酸銅溶液（銅鐵合劑5∶2配比濃度10.0 mg/L）進行短時間藥浴。本研究結果表明，硫酸銅對1齡和2齡短須裂腹魚苗的SC分別為0.191和0.017 mg/L，均低于0.357 mg/L，因此采用全池潑灑硫酸銅浸泡可能會對短須裂腹魚苗產生極大風險。即使采用常用濃度區(qū)間中最低濃度（0.357 mg/L）的硫酸銅溶液浸泡1齡和2齡短須裂腹魚苗，魚苗在浸泡48 h內也極可能出現(xiàn)死亡。而采用7.143 mg/L硫酸銅溶液進行藥浴3 h，1齡和2齡短須裂腹魚苗均未出現(xiàn)中毒或死亡現(xiàn)象，且在藥浴后的3 d內也無異常，因此生產中建議采用高濃度短時間藥浴法。由于硫酸銅浸泡會顯著增加魚苗耗氧量（袁喜等，2016），因此高濃度藥浴過程中應開啟增氧設備。此外，藥浴水應與池水隔開，避免高濃度硫酸銅快速殺死藻類而導致水體中的溶解氧大量消耗（鄧紫云和陳清香，2019）。

3. 3 硫酸銅對短須裂腹魚苗毒性的影響因子

Anderson和Spear（1980）、Perschbacher（2005）研究指出硫酸銅對太陽魚和斑點叉尾鮰的毒性隨水溫的升高而增強;而Furuta等（2008）研究發(fā)現(xiàn)硫酸銅對虹鱒、牙鲆和真鯛的毒性與水溫無顯著相關性。一般仍認為硫酸銅對多數(shù)魚類的毒性隨水溫升高而增強（蔡文超和區(qū)又君，2009）。本研究在11月開展硫酸銅對短須裂腹魚苗的急性毒性試驗，其試驗用水（雅礱江支流磨子溝溪流水）的溫度幾乎降至年內最低值，可認為是硫酸銅毒性最低的季節(jié)。在春季的仔魚培育期水溫將持續(xù)升高，且進入小瓜蟲、車輪蟲和斜管蟲等寄生蟲感染高峰期，即使此期間硫酸銅毒性或將隨水溫的升高而增強，但仍建議采用高濃度短時間藥浴進行殺蟲（王秋實等，2018）。此外，本研究的試驗用水為雅礱江支流磨子溝溪流水經(jīng)循環(huán)水過濾系統(tǒng)處理后的軟水，水質清澈少雜質，但漁業(yè)養(yǎng)殖過程中水體硬度一般偏高且富含有機質，致使硫酸銅漁業(yè)養(yǎng)殖水體中毒性減弱，因此實際用藥過程中可適當提高使用濃度。

4 結論

硫酸銅對1齡和2齡短須裂腹魚苗的急性毒性至少可列為高毒農藥，其中2齡魚苗耐受性相對較高，但短須裂腹魚苗對硫酸銅急性毒性耐受性較低，在實際生產中建議采用高濃度短時間藥浴法。

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（責任編輯 蘭宗寶）