支氣管哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平IL-10 sIgE水平及其臨床意義

王汝瓊，李小明，林道炯，吳守業(yè)，周瓊花

(海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心，海南 ?？?570000)

支氣管哮喘作為一種常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，在臨床上通常表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性喘息以及胸悶、咳嗽或呼吸困難，不過(guò)該病病因復(fù)雜，通常認(rèn)為該病發(fā)作與免疫耐受的破壞有關(guān)[1,2]，由于免疫耐受在抗原刺激下，對(duì)抗原特異性應(yīng)答的T細(xì)胞與B細(xì)胞不能被激活，即不能執(zhí)行正常的免疫應(yīng)答，而當(dāng)該過(guò)程遭受到破壞后，則會(huì)對(duì)超敏性疾病和自身免疫性疾病產(chǎn)生排斥反應(yīng)。另外根據(jù)相關(guān)研究[3]報(bào)道顯示，在哮喘的發(fā)病過(guò)程中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)發(fā)揮比較重要作用，可通過(guò)其水平來(lái)評(píng)估哮喘的嚴(yán)重程度。Treg包括兩種類(lèi)型，一類(lèi)為天然調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞，主要以細(xì)胞與細(xì)胞接觸信號(hào)性方式發(fā)揮調(diào)節(jié)性作用；另一類(lèi)為適應(yīng)性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(iTreg)，包括I型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr1)和Th3等細(xì)胞，主要通過(guò)分泌白細(xì)胞介素(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)來(lái)下調(diào)免疫反應(yīng)[4]。目前，關(guān)于可分泌IL-10的iTreg和Tr1與哮喘的關(guān)系還少有報(bào)道。本研究探討戶塵螨過(guò)敏的支氣管哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平、IL-10和特異性IgE(sIgE)水平，取得的結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2018年2月至2020年2月我院收治的163例戶塵螨過(guò)敏的支氣管哮喘患兒作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[5]中診斷標(biāo)準(zhǔn)，即喘息反復(fù)發(fā)作且發(fā)作時(shí)肺部聞及喘鳴音者；②戶塵螨過(guò)敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)為陽(yáng)性，且戶塵螨特異性免疫球蛋白(sIg)E≥0.7kU/L者；③臨床資料完整且積極配合檢查者；④同意簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肺部患有其他疾病(如呼吸衰竭、肺栓塞等)者；②心肝腎等功能出現(xiàn)異常者；③患有精神方面疾病者。根據(jù)患兒病情情況將其依次分為輕度、中度和重度患者，分別為52例、63例和48例。另外選取接受體檢的健康同齡兒童50例作為對(duì)照組。本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)審批。

1.2方法：兩組兒童均于清晨采集外周靜脈血5mL，取其中2mL用來(lái)檢測(cè)IL-10和sIgE水平，留置的3mL用來(lái)檢測(cè)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平。其中具體檢測(cè)方法如下：①檢測(cè)IL-10和sIgE水平方法：先將取好的外周靜脈血于室溫放置1h，然后以2000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液留置于-70℃冰箱備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)IL-10水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。sIgE水平則可根據(jù)人總免疫球蛋白E定量檢測(cè)試劑盒操作指南進(jìn)行測(cè)定，其中每個(gè)樣本均要求同一檢測(cè)者進(jìn)行重復(fù)測(cè)量3次，之后取其平均值，同時(shí)采取正確的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法進(jìn)行分析以控制結(jié)果偏倚。②檢測(cè)測(cè)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平方法：將留置的3mL外周靜脈血使用肝素鈉抗凝后，然后采用淋巴細(xì)胞分離液將外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離，再將淋巴細(xì)胞濃度用含10%小牛血清的完全RPMI1640培養(yǎng)基調(diào)整為2×109L-1，再于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)每孔接種1mL，同時(shí)給予20g/L的戶塵螨浸出液刺激后，再將其放于37℃含有5%CO2的飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理，再采用型號(hào)為FACSCantoII的流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)iTreg和Trl細(xì)胞百分比，每個(gè)樣本均重復(fù)上機(jī)檢測(cè)3次。

1.3觀察指標(biāo)：①比較兩組兒童肺功能情況:其中肺功能可采用日本捷斯特HI-801便攜式肺功能儀進(jìn)行測(cè)定，主要檢測(cè)指標(biāo)包括：第1秒用力呼氣容積(FEV1)、第1秒用力呼氣量占用力肺活量比值(FEV1/FVC)和呼氣峰值流速(PEF)，由同一檢測(cè)者對(duì)患者采取3次重復(fù)測(cè)量之后，取其平均值。②比較兩組兒童調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平:其中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平主要檢測(cè)iTreg(CD4+CD25+Foxp3+IL-10+)和Trl(CD4+CD25+Foxp3-IL-10+)細(xì)胞百分比。③比較兩組兒童免疫因子水平:主要包括以下指標(biāo)：IL-10、sIgE和TGF-β。

2 結(jié) 果

2.1比較各組兒童一般臨床資料：各組性別、年齡、病程和戶塵螨sIgE等一般資料比較發(fā)現(xiàn)無(wú)差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組一般臨床資料比較

2.2比較各組兒童肺功能情況：各組FEV1、FEV1/FVC和PEF值比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中患病組與對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)病情程度越嚴(yán)重，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC和PEF值則越小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組兒童肺功能情況比較

2.3比較各組兒童調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平:各組iTreg和Tr1細(xì)胞所占比例比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中患病組與對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)病情程度越嚴(yán)重，iTreg和Tr1細(xì)胞所占比例越小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 各組兒童調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞水平比較

2.4比較兩組兒童免疫因子水平：各組IL-10、TGF-β和sIgE水平比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中患病組與對(duì)照組比較，發(fā)現(xiàn)病情程度越嚴(yán)重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平則越高(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 兩組兒童免疫因子水平比較

3 討 論

支氣管哮喘是以慢性氣道炎癥與氣道高反應(yīng)性為主要特征的一種異質(zhì)性疾病，涉及多種細(xì)胞及和細(xì)胞組分[6]。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞作為一類(lèi)具有免疫抑制作用的細(xì)胞群，其中傳統(tǒng)鑒別調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的主要方法為對(duì)標(biāo)記的CD4+和CD25+進(jìn)行檢測(cè)，不過(guò)由于感染免疫應(yīng)答后被活化的T細(xì)胞也會(huì)表達(dá)CD25+，因而難易區(qū)分調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。目前，根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道[7]顯示，F(xiàn)oxp3是調(diào)節(jié)性T細(xì)特異性的標(biāo)志物，因此檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平可通過(guò)檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+IL-10+水平來(lái)實(shí)現(xiàn)。

由于肺功能指標(biāo)可直接反應(yīng)患兒呼吸系統(tǒng)狀態(tài)，因此對(duì)此類(lèi)患兒進(jìn)行此方面的研究也極為重要，而PEF、FEV1及FVC則為肺功能的重要檢測(cè)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，各組FEV1、FEV1/FVC和PEF值比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其患病組與對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)病情程度越嚴(yán)重，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC和PEF值則越小，說(shuō)明上述指標(biāo)不僅對(duì)于疾病的診斷有較高的反應(yīng)價(jià)值，同時(shí)對(duì)于疾病的嚴(yán)重程度的評(píng)估也具有積極的臨床意義。各組iTreg和Tr1細(xì)胞所占比例比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中患病組與對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)病情程度越嚴(yán)重，iTreg和Tr1細(xì)胞所占比例越小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在相關(guān)臨床研究[8]結(jié)果中，也證明調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞不僅對(duì)自身抗原的免疫反應(yīng)具有抑制作用，另外還可調(diào)控其它免疫細(xì)胞的活動(dòng)，在多種免疫性疾病中均呈紊亂狀態(tài)。在本研究中，則表明病情嚴(yán)重程度與調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞也具有一定的相關(guān)性，即水平越低，其病情越嚴(yán)重，在臨床上可作為判定支氣管哮喘嚴(yán)重程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

對(duì)各組兒童免疫因子水平進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)患病組與對(duì)照組比較，其病情程度越嚴(yán)重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平則越高(P<0.05)，因?yàn)閕Treg主要通過(guò)分泌IL-10和轉(zhuǎn)TGF-β1來(lái)發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)控作用，而通過(guò)檢測(cè)其哮喘患兒體內(nèi)iTreg水平發(fā)現(xiàn)，iTreg與病情呈正相關(guān)，故IL-10和TGF-β1水平則與病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。另外由于由戶塵螨所引起的哮喘為IgE介導(dǎo)的T細(xì)胞依賴的變應(yīng)性炎癥，是機(jī)體對(duì)變應(yīng)原的一種超敏反應(yīng)，其表現(xiàn)為變應(yīng)原和抗體結(jié)合后產(chǎn)生的組織反應(yīng)，參與變態(tài)反應(yīng)的抗體主要是IgE，而在患病組患兒中sIgE水平升高反映了過(guò)敏原暴露時(shí)機(jī)體產(chǎn)生的過(guò)敏反應(yīng)，因此可將sIgE作為支氣管哮喘是否處于急性發(fā)作期提供理論依據(jù)[9]，而將上述指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)則有助于患者在臨床治療過(guò)程中，為疾病轉(zhuǎn)歸提供參考依據(jù)。

綜上所述，對(duì)支氣管哮喘患兒肺功能指標(biāo)以及分泌IL-10的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和免疫因子IL-10、TGF-β和sIgE水平的檢測(cè)，在臨床上不僅有助于評(píng)估該疾病的嚴(yán)重程度，同時(shí)還有利于為疾病治療過(guò)程中的轉(zhuǎn)歸提供參考依據(jù)。