2018年鄭州市手足口病病原學(xué)檢測(cè)及流行病學(xué)分析

史軍，牛衛(wèi)東，許太彬，胡乃月，張航

(鄭州市疾病預(yù)防控制中心，河南 鄭州 450007)

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是由一組腸道病毒引起的傳染病，多數(shù)患者癥狀較輕，個(gè)別患者可發(fā)展為重癥甚至死亡[1-2]?？滤_奇病毒A16型(coxsackievirus A16，CoxA16)和腸道病毒71型(enterovirus 71，EV71)是最常見(jiàn)的2種引發(fā)HFMD的病毒[3-5]。

2016年上半年，EV71疫苗在我國(guó)上市，讓HFMD的防控工作邁進(jìn)了一大步[6]。2016年之前，鄭州市HFMD病原體以EV71和CoxA16為主，為探究EV71疫苗上市以來(lái)鄭州市HFMD病原譜是否出現(xiàn)變化，了解EV71疫苗上市后鄭州市HFMD的發(fā)病規(guī)律，本文對(duì)2018年鄭州市疾病預(yù)防控制中心病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的HFMD臨床病例進(jìn)行分析，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源病例信息來(lái)自市轄縣(市、區(qū))疾病預(yù)防控制中心2016—2019年上報(bào)的個(gè)案資料。病例標(biāo)本為各縣區(qū)疾病預(yù)防控制中心每月采集的5例發(fā)病7 d內(nèi)的臨床診斷輕癥病例糞便標(biāo)本，重癥病例、聚集病例全部采集，用于病原核酸檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器手足口熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)試劑盒腸道病毒通用型(enterovirus，EV)、EV71+CoxA16型購(gòu)自江蘇碩世生物科技股份有限公司。離心機(jī)為德國(guó)Eppendorf Centrifuge 5430R，生物安全柜為美國(guó)熱電Thermo 1300 SERIES A2，病毒核酸提取儀為德國(guó)Qiagen Qiaxtractor，基因擴(kuò)增儀為美國(guó)伯樂(lè)公司Bio-Rad CFX96實(shí)時(shí)熒光PCR儀。

1.3 標(biāo)本的處理與核酸提取在生物安全柜中，取黃豆大小糞便標(biāo)本加入含100 μL三氯甲烷、800 μL生理鹽水的1.5 mL離心管中，使用震蕩器處理1 min，制成糞便混懸液，然后10 000 r·min-1離心10 min(離心半徑9.5 cm)，取200 μL上清液，根據(jù)Qiagen Qiaxtractor核酸提取儀使用說(shuō)明及配套提取試劑盒進(jìn)行核酸提取。

1.4 實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增按照試劑盒說(shuō)明配制20 μL反應(yīng)體系，其中反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription PCR，RT-PCR)主反應(yīng)液7.5 μL，酶混合液5 μL，各型別病毒反應(yīng)液4 μL，去RNA酶水3.5 μL。冰浴條件下按每份20 μL將反應(yīng)體系分裝至100 μL八聯(lián)管，取核酸5 μL加入反應(yīng)體系，瞬間離心后上機(jī)擴(kuò)增。反應(yīng)條件：50 ℃，30 min；95 ℃，5 min；95 ℃，10 s，55 ℃，40 s。共45個(gè)循環(huán)。在55 ℃時(shí)進(jìn)行熒光檢測(cè)。檢測(cè)通道：FAM(EV、CoxA16)、VIC(EV71)。根據(jù)熒光PCR擴(kuò)增曲線及試劑盒說(shuō)明書對(duì)每份標(biāo)本進(jìn)行結(jié)果判定。當(dāng)EV為陽(yáng)性、EV71和CoxA16為陰性時(shí)，定義為其他腸道病毒陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Excel 2007軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果2018年實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)690例臨床診斷為HFMD的病例，檢出腸道病毒感染病例439例(63.62%)，檢出EV71陽(yáng)性30例(4.35%)，CoxA16陽(yáng)性68例(9.86%)，341例(49.42%)為其他腸道病毒感染。檢測(cè)病例中162例為重癥病例，占檢測(cè)病例的23.48%，其中146例(90.12%)檢出腸道病毒感染。檢測(cè)病例與重癥病例的病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=66.75，P<0.05)。EV71陽(yáng)性病例中，重癥率為93.33%(28/30)；CoxA16陽(yáng)性病例中，重癥率為22.06%(15/68)；其他腸道病毒陽(yáng)性病例中，重癥率為30.21%(103/341)。見(jiàn)表1。

表1 2018年鄭州市HFMD病例病原學(xué)構(gòu)成

2.2 性別分布2018年HFMD檢測(cè)病例中男396例，女294例，男女之比為1.35∶1。重癥病例中男94例，女68例，男女之比為1.38∶1。HFMD檢測(cè)病例和重癥病例的性別分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.02，P>0.05)。

2.3 時(shí)間分布2018年HFMD檢測(cè)病例數(shù)在5月達(dá)到高峰，檢測(cè)120例，5—7月共檢測(cè)303例病例，占檢測(cè)病例的43.91%。重癥病例數(shù)在6月達(dá)到高峰，5—7月重癥病例共129例，占重癥病例的79.63%，1、2、3、9、11月無(wú)送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的重癥病例，見(jiàn)圖1。2018年HFMD檢測(cè)病例與重癥病例時(shí)間分布相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=111.04，P<0.05)。

圖1 2018年鄭州市手足口病(HFMD)送檢和重癥

2.4 職業(yè)分布2018年HFMD檢測(cè)病例中散居兒童652例，占檢測(cè)病例的94.49%；幼托兒童38例，占檢測(cè)病例的5.51%。重癥病例中散居兒童149例，占重癥病例的91.98%；幼托兒童13例，占重癥病例的8.02%。2018年HFMD檢測(cè)病例與重癥病例職業(yè)分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.48，P>0.05)。

2.5 年齡分布2018年HFMD檢測(cè)病例年齡為1個(gè)月～27歲，其中1歲病例最多，為261例，占檢測(cè)病例的37.83%，5歲以下病例數(shù)達(dá)到647例，占檢測(cè)病例的93.77%。重癥病例年齡最大的為6歲10個(gè)月，最小的為1個(gè)月，1歲組重癥病例數(shù)最多(67例)，占重癥病例的41.36%，5歲以下重癥病例數(shù)155例，占重癥病例的95.68%。檢測(cè)病例與重癥病例年齡分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.90，P<0.05)。

圖2 2018年鄭州市手足口病(HFMD)病例年齡分布

2.6 EV71陽(yáng)性HFMD病例變化趨勢(shì)根據(jù)2016—2019年疾病預(yù)防控制中心病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)，2017年EV71占比較2016年大幅下降，2018及2019年下降趨勢(shì)延續(xù)，2019年EV71已不再是鄭州地區(qū)HFMD流行毒株。2016—2019年鄭州市HFMD病例EV71陽(yáng)性構(gòu)成比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=192.64，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2016—2019年鄭州市EV71陽(yáng)性HFMD病例構(gòu)成比

3 討論

近年來(lái)，HFMD始終是各地衛(wèi)生部門重點(diǎn)關(guān)注的傳染病之一。從鄭州市2018年病原學(xué)檢測(cè)情況來(lái)看，全年檢測(cè)病例和重癥病例的病原學(xué)構(gòu)成差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2018年鄭州市檢測(cè)到的EV71陽(yáng)性HFMD病例僅占6.83%(30/439)，較前下降明顯，這可能與EV71疫苗的上市和推廣有關(guān)[7]。然而，30例EV71陽(yáng)性病例中28例為重癥病例，重癥率達(dá)到93.33%，這與之前的報(bào)道[8]一致。全年檢測(cè)病例中其他腸道病毒陽(yáng)性病例占49.42%，重癥病例中其他腸道病毒陽(yáng)性病例占63.58%，說(shuō)明與之前歷年不同，其他腸道病毒已取代EV71成為HFMD的主要病原體[9]。近年來(lái)，多地統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)其他腸道病毒感染的比例正在逐年增加[10-12]，提醒相關(guān)醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)注重開(kāi)展對(duì)其他腸道病毒的分析工作，關(guān)注EV71疫苗上市后HFMD流行毒株的變化。

2018年HFMD檢測(cè)病例與重癥病例性別分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，男性病例較多，這可能與男孩喜好活動(dòng)、密切接觸機(jī)會(huì)多有關(guān)[13]。從年齡分布來(lái)看，2018年HFMD檢測(cè)病例與重癥病例年齡分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢測(cè)病例中5歲以下兒童占93.77%，重癥病例年齡分布更加集中，最大年齡為6歲10個(gè)月，95.68%為5歲以下兒童。感染病例仍以散居兒童為主，提示5歲以下散居兒童是HFMD的重點(diǎn)防治人群，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)相關(guān)兒童和家長(zhǎng)衛(wèi)生意識(shí)的培養(yǎng)[14]。

從時(shí)間分布來(lái)看，2018年HFMD檢測(cè)病例與重癥病例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢測(cè)病例數(shù)在5月份達(dá)到高峰，重癥病例數(shù)高峰比檢測(cè)病例晚1個(gè)月，且重癥病例出現(xiàn)的時(shí)間更加集中，5—7月出現(xiàn)129例，占重癥病例的79.63%，這與以往報(bào)道[9]一致，提示5—7月應(yīng)格外注意加強(qiáng)對(duì)HFMD的防控。

綜上所述，2018年鄭州市其他腸道病毒已取代EV71成為HFMD病例的主要病原體，應(yīng)開(kāi)展對(duì)其他腸道病毒的分型分析工作，密切關(guān)注EV71疫苗上市后鄭州市HFMD流行毒株的變化，研發(fā)新型疫苗應(yīng)對(duì)新形勢(shì)。5—7月是HFMD的高發(fā)季節(jié)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)5歲以下散居兒童HFMD的防治工作，加大衛(wèi)生安全和疫苗接種宣傳力度，減少HFMD的發(fā)病。