薯蕷皂苷對(duì)滑膜炎大鼠癥狀的改善作用和對(duì)TLR2-NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制

武豪杰,張明輝,洪成智

（河南大學(xué)淮河醫(yī)院骨科，河南 開(kāi)封475001）

滑膜炎是一組以膝關(guān)節(jié)為主要發(fā)病部位的炎癥綜合征，臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、腫脹和活動(dòng)受限，是關(guān)節(jié)炎的啟動(dòng)因素。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)滑膜炎的報(bào)道集中于治療方法上，研究［1-2］證明：活血類(lèi)中藥可減輕滑膜炎癥狀。薯蕷皂苷提取自穿山龍薯蕷根莖，是穿山龍總皂苷主要成分，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為穿山龍有舒筋活血和祛風(fēng)截瘧等功效，在以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療中效果確切，適用于滑膜炎治療［3］。CAO等［4］報(bào)道：慢性炎癥反應(yīng)在滑膜炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其中核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）活化可促使多種促炎基因轉(zhuǎn)錄，如腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）等，誘發(fā)炎癥反應(yīng)；Toll樣受體2（Toll-like receptors 2，TLR2）在滑膜炎病變過(guò)程中可參與NF-κB等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘發(fā)下游因子，加重炎癥反應(yīng)。目前，關(guān)于薯蕷皂苷在滑膜炎治療中作用機(jī)制的研究報(bào)道少見(jiàn)。本研究通過(guò)制備佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，觀察薯蕷皂苷對(duì)其關(guān)節(jié)滑膜組織中炎癥因子和TLR2-NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討薯蕷皂苷對(duì)滑膜炎的作用機(jī)制，為其臨床治療滑膜炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠65只，7周齡，體質(zhì)量250～270 g，購(gòu)自北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。所有大鼠在室溫（25±1）℃、空氣濕度40%～50%和晝夜交替12 h光照條件下喂養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥物、主要試劑和儀器弗氏完全佐劑（長(zhǎng)春市百奧生物儀器有限責(zé)任公司），薯蕷皂苷單體（浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥炮制中心提供，純度95%），吲哚美辛片（山西省臨汾奇林藥業(yè)有限公司提供，臨用時(shí)以生理鹽水配制為2 g·L－1濃度），大鼠TNF-α和IL-1β酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（上海極威生物科技有限公司），聚氰基丙烯酸正丁酯（butyleyanoacrylate，BCA）試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），兔抗大鼠TLR2、髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）、NF-κB、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、GAPDH單克隆抗體和辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（北京百奧萊博科技有限公司）。DB066足趾容積測(cè)量?jī)x（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司），SpectraMax M 2全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices公司），Allegra X-30多功能臺(tái)式離心機(jī)［貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)（中國(guó)）有限公司］。TS2009顯微鏡（廣州華西科創(chuàng)科技有限公司），TH-690B凝膠成像掃描儀（北京海泰天恒科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和模型制備65只SD大鼠隨機(jī)選取10只作為對(duì)照組，其余55只大鼠按參考文獻(xiàn)［5］中的方法制備滑膜炎大鼠模型。取0.2 mL弗氏完全佐劑對(duì)大鼠右后足趾進(jìn)行皮內(nèi)注射給藥，經(jīng)變態(tài)反應(yīng)后可建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，對(duì)照組大鼠則在相同部位注射等量生理鹽水。造模成功標(biāo)準(zhǔn)：造模后第21天，大鼠右后足趾腫脹明顯。45只大鼠建模成功，隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組，分別為10、11、12和12只。

造模成功后，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠分別給予10 mg·kg－1吲哚美辛、60 mg·kg－1薯蕷皂苷和120 mg·kg－1薯蕷皂苷灌胃，模型組和對(duì)照組大鼠給予等量生理鹽水灌胃，每日1次。大鼠均按設(shè)定劑量連續(xù)灌胃給藥21 d。

1.4 屈關(guān)節(jié)疼痛實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠干預(yù)后疼痛癥狀在干預(yù)后第3、7、14和21天測(cè)定大鼠致炎側(cè)關(guān)節(jié)的縮腿嘶鳴評(píng)分即疼痛評(píng)分［6］，具體操作：將大鼠頭部裝入線手套中，兩后腿和尾部伸出筒外，穩(wěn)定5 min開(kāi)始檢測(cè)。①屈趾：將大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)向腳掌方向緩慢、柔和彎曲，每5 s操作1次，共5次；②屈背：將大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)向腳背方向緩慢、柔和屈曲，檢測(cè)背屈關(guān)節(jié)縮腿和嘶鳴評(píng)分，方法同上。若大鼠在屈趾和屈背時(shí)出現(xiàn)嘶鳴或縮腿反應(yīng)，計(jì)1分，無(wú)反應(yīng)計(jì)0分。嘶鳴評(píng)分和縮腿評(píng)分范圍均為0～5分，總評(píng)分范圍為0～10分，以大鼠縮腿和嘶鳴總評(píng)分即疼痛評(píng)分反映大鼠關(guān)節(jié)疼痛癥狀。

1.5 大鼠干預(yù)后足趾腫脹程度觀察在干預(yù)后第3、7、14和21天檢測(cè)大鼠足趾腫脹程度。具體操作：保持大鼠致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)自然下垂，角度在110°～120°，在足趾皮膚和毛發(fā)分界線處畫(huà)線，包裹整個(gè)踝關(guān)節(jié)，右側(cè)足緩慢置入足容積測(cè)量?jī)x燒杯內(nèi)，杯內(nèi)盛水，保持畫(huà)線水平面和燒杯水面齊平，此時(shí)測(cè)量?jī)x發(fā)出滴滴聲，按下踏板，即刻記錄足容積數(shù)值，共測(cè)量3次，取其平均值。

1.6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中炎癥因子水平給藥21 d后，腹腔注射麻醉劑，以頸動(dòng)脈放血方法處死大鼠，在大鼠右后肢正中縱形切開(kāi)皮膚、肌肉，暴露膝關(guān)節(jié)，向下分離可見(jiàn)滑膜組織，手術(shù)刀分離關(guān)節(jié)囊滑膜層和纖維層，取出滑膜層組織，加入PBS緩沖液，3 500 r·min－1離心15 min，離心半徑10 cm，取上清液。嚴(yán)格按照試劑使用說(shuō)明書(shū)，取100μL樣品和稀釋標(biāo)準(zhǔn)品分別至每孔，避光孵育90 min，洗板5次；分別加入生物素化抗體稀釋液、生物素化抗體工作液100μL/孔，孵育1 h，洗板5次；分別加入酶結(jié)合物稀釋液、酶結(jié)合物工作液，100μL/孔，孵育30 min，洗板5次；加入顯色底物100μL/孔，孵育15 min；加入終止液100μL/孔，混勻，3 min內(nèi)在450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（A）值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，平滑線連接各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算TNF-α和IL-1β水平（ng·L－1）。

1.7 HE染色觀察大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)取大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜層組織，置入4%多聚甲醛中過(guò)夜，以石蠟固定包埋，制作為4μm厚切片。采用二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，HE染色。將蓋玻片覆蓋于載玻片上封片，采用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠滑膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)。

1.8 Western blotting法檢測(cè)大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TLR2、MyD88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平取大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織，勻漿器研碎后加入RIPA裂解液，12 000 r·min－1離心15 min，離心半徑10 cm，取上清。BCA法提取總蛋白，將蛋白與上樣緩沖液混勻，沸水浴變性10 min，冷卻后取50μg蛋白進(jìn)行SDS-硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳，結(jié)束后將蛋白樣品從凝膠轉(zhuǎn)到聚偏二氟乙烯膜上。轉(zhuǎn)膜后，5%脫脂奶粉封閉2 h，再將條帶浸入兔抗大 鼠TLR2（1∶1 000）、MyD88（1∶1 000）、NF-κB（1∶1 000）和p-NF-κB p65（1∶1 000）單克隆抗體（一抗），4℃孵育過(guò)夜。第2天棄一抗，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，搖床室溫孵育2 h，結(jié)束后棄抗體，取出聚偏二氟乙烯膜PBS清洗3次，采用凝膠成像系統(tǒng)曝光，以凝膠掃描成像系統(tǒng)掃描條帶分析各個(gè)條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組大鼠疼痛評(píng)分、足趾腫脹程度、關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平及TLR2、MyD88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠關(guān)節(jié)疼痛評(píng)分隨時(shí)間延長(zhǎng)，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠疼痛評(píng)分持續(xù)降低（P＜0.05），模型組大鼠疼痛評(píng)分持續(xù)升高（P＜0.05），對(duì)照組大鼠疼痛評(píng)分無(wú)明顯變化（P＞0.05）。與對(duì)照組比較，模型組、陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組疼痛評(píng)分明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組疼痛評(píng)分明顯降低（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥組比較，低劑量薯蕷皂苷組和高劑量大鼠薯蕷皂苷組疼痛評(píng)分明顯升高（P＜0.05）；與低劑量薯蕷皂苷組比較，高劑量薯蕷皂苷組大鼠疼痛評(píng)分明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠右后肢疼痛評(píng)分Tab.1Pain scores of right hind limbs of rats in various groups(±s)

表1 各組大鼠右后肢疼痛評(píng)分Tab.1Pain scores of right hind limbs of rats in various groups(±s)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with positive drug group；O P＜0.05 compared with low dose of diosgenin group；□P＜0.05 compared with 3 d；▲P＜0.05 compared with 7 d；●P＜0.05 compared with 14 d.

Group Control Model Positive drug Diosgenin Low dose High dose F P n 10 10 11 12 12 Pain score（t/d）3 0.64±0.11 10.62±1.23*7.14±0.75*△9.42±1.27*△#8.25±1.28*△#O 140.339＜0.01 7 0.66±0.12 12.98±1.16*□5.01±1.52*△□8.39±1.58*△#□6.77±1.54*△#O□115.942＜0.01 14 0.61±0.14 14.78±1.45*□▲3.58±0.74*△□▲7.39±0.71*△#□▲4.94±0.77*△#O□▲395.789＜0.01 21 0.65±0.13 16.69±1.98*□▲●1.78±0.35*△□▲●4.74±0.45*△#□▲●2.78±0.29*△#O□▲●542.709＜0.01

2.2 各組大鼠足趾腫脹程度隨時(shí)間延長(zhǎng)，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠足趾腫脹程度持續(xù)降低（P＜0.05），模型組大鼠足趾腫脹程度持續(xù)增加（P＜0.05），對(duì)照組大鼠足趾腫脹程度無(wú)明顯變化（P＞0.05）。與對(duì)照組比較，模型組、陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠足趾腫脹程度明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠足趾腫脹程度明顯降低（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥組比較，低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠足趾腫脹程度明顯增加（P＜0.05）；與低劑量薯蕷皂苷組比較，高劑量薯蕷皂苷組大鼠足趾腫脹程度明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠足趾腫脹程度Tab.2Toe swelling degrees of rats in various groups(±s，V/mL)

表2 各組大鼠足趾腫脹程度Tab.2Toe swelling degrees of rats in various groups(±s，V/mL)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with positive drug group；○P＜0.05 compared with low dose of diosgenin of dioscin group；□P＜0.05 compared with 3 d；▲P＜0.05 compared with 7 d；●P＜0.05 compared with 14 d.

Group Control Model Positive drug Diosgenin Low dose High dose F P n 10 10 11 12 12 Toe swelling degree（t/d）3 0.03±0.01 0.75±0.08*0.41±0.05*△0.61±0.07*△#0.53±0.08*△#○182.726＜0.01 7 0.04±0.01 0.97±0.09*□0.32±0.04*△□0.48±0.08*△#□0.37±0.04*△#○□326.404＜0.01 14 0.02±0.01 1.45±0.19*□▲0.24±0.03*△□▲0.37±0.04*△#□▲0.29±0.05*△#○□▲418.313＜0.01 21 0.03±0.01 1.61±0.09*□▲●0.12±0.02*△□▲●0.24±0.05*△#□▲●0.19±0.03*△#○□▲●1 920.000＜0.01

2.3 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平與對(duì)照組比較，模型組、陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平明顯降低（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥組比較，低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平明顯升高（P＜0.05）；與低劑量薯蕷皂苷組比較，高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平Tab.3Levels of T NF-αand IL-1βin synovial tissue of joint synovium tissue of rats in various groups[±s,ρB/(ng·L－1)]

表3 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TNF-α和IL-1β水平Tab.3Levels of T NF-αand IL-1βin synovial tissue of joint synovium tissue of rats in various groups[±s,ρB/(ng·L－1)]

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with positive drug group；○P＜0.05 compared with low dose of diosgenin group.

Group Control Model Positive drug Diosgenin Low dose High dose F P n 10 10 11 12 12 TNF-α 61.22±7.03 180.39±10.06*139.25±11.02*△104.34±8.04*△#90.29±9.03*△#○259.719＜0.01 IL-1β 5.26±0.24 10.47±0.95*5.31±0.53*△8.44±0.74*△#6.98±0.85*△#○99.563＜0.01

2.4 大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織正常，細(xì)胞排列整齊，無(wú)水腫、充血和增生，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織水腫和充血嚴(yán)重，滑膜細(xì)胞排列紊亂并大量增生，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；低劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織充血和水腫減輕，細(xì)胞增生略有減少；陽(yáng)性藥組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織輕度水腫和充血，細(xì)胞排列相對(duì)整齊，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，少見(jiàn)增生。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)（HE，×400）Fig.1Pathomorphology of joint synovium tissue of rats in various groups(HE,×400)

2.5 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TLR2、My D88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平各組大鼠滑膜組織中NF-κB蛋白表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組比較，模型組、陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠滑膜組織中TLR2、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠滑膜組織中TLR2、My D88和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥組比較，低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠滑膜組織中TLR2、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與低劑量薯蕷皂苷組比較，高劑量薯蕷皂苷組大鼠滑膜組織中TLR2、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表4和圖2。

表4 各組大鼠滑膜組織中TLR2、MyD88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平Tab.4Expression levels of TLR2,MyD88,NF-κB,and p-NF-κB p65 proteins in synovium tissue of rats in various groups(±s)

表4 各組大鼠滑膜組織中TLR2、MyD88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平Tab.4Expression levels of TLR2,MyD88,NF-κB,and p-NF-κB p65 proteins in synovium tissue of rats in various groups(±s)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with positive drug group；○P＜0.05 compared with low dose of diosgenin group.

Group Control Model Positive drug Diosgenin Low dose High dose F P n 10 10 11 12 12 TLR2 0.24±0.06 0.85±0.09*0.33±0.04*△0.49±0.08*△#0.37±0.05*△#○41.877＜0.01 My D88 0.17±0.04 0.69±0.07*0.32±0.08*△0.48±0.09*△#0.39±0.11*△#○54.856＜0.01 NF-κB 0.59±0.12 0.58±0.15 0.60±0.14 0.61±0.12 0.59±0.11 0.088 0.986 p-NF-κB p65 0.05±0.01 0.45±0.08*0.11±0.02*△0.36±0.05*△#0.19±0.03*△#○151.553＜0.01

圖2 各組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中TLR2、My D88、NF-κB和p-NF-κB p65蛋白表達(dá)電泳圖Fig.2Electrophoregramof expressionsof TLR2,My D88,NF-κB,and p-NF-κB p65 proteins in synovium tissue of rats in various groups

3 討 論

膝關(guān)節(jié)滑膜炎為臨床多發(fā)性疾病。人體膝關(guān)節(jié)滑膜位置表淺容易受損，受傷后滑膜呈水腫、充血和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)表現(xiàn)，若處理不及時(shí)，晚期可出現(xiàn)滑膜肥厚和軟骨萎縮等后果，影響關(guān)節(jié)功能［7-8］。因滑膜炎的病因和病機(jī)尚未清楚，以至于臨床治療方法和靶標(biāo)均不明確，大部分西藥療法仍停留于滑膜炎后遺癥和炎癥治療上，無(wú)突破性發(fā)展。中醫(yī)藥經(jīng)過(guò)數(shù)千年發(fā)展，在滑膜炎治療中積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，中醫(yī)認(rèn)為滑膜炎的病機(jī)為氣血瘀阻、經(jīng)絡(luò)不通和風(fēng)寒濕痹，為此研制了活血化瘀、舒筋活絡(luò)和滲濕利水等治療方藥，開(kāi)發(fā)前景好。故本研究從中醫(yī)學(xué)角度探索治療藥物，利用中藥多途徑、多成分和多靶點(diǎn)的藥理作用，尋找治療滑膜炎的突破口。

穿龍薯蕷是治療勞損扭傷、風(fēng)寒濕痹和筋骨麻木等病癥的常用藥，薯蕷皂苷是其根莖中提取的脂溶性皂苷主要成分，因而醫(yī)學(xué)研究者［9］認(rèn)為可采用薯蕷皂苷治療滑膜炎。關(guān)節(jié)腫脹和疼痛為滑膜炎主要表現(xiàn)，本研究從鎮(zhèn)痛方面觀察了薯蕷皂苷對(duì)滑膜炎大鼠的治療作用，結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠疼痛評(píng)分和足趾腫脹程度均明顯降低，同時(shí)陽(yáng)性藥組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠疼痛評(píng)分和足趾腫脹程度明顯降低，提示薯蕷皂苷在減輕滑膜炎大鼠疼痛和患肢腫脹方面效果確切，且呈劑量依賴(lài)性。王文云等［10］研究表明：薯蕷皂苷有多個(gè)抗炎分子靶點(diǎn)，可抑制脂多糖誘導(dǎo)的BV 2細(xì)胞中TNF-α水平，具有一定抗炎作用。IL-1β是炎癥調(diào)節(jié)的始動(dòng)因素，也是滑膜炎發(fā)作的主要原因，可促進(jìn)滑膜增生，上調(diào)滑膜細(xì)胞黏附因子表達(dá)，加重滑膜炎癥，誘導(dǎo)骨吸收［11］。TNF-α可選擇性抑制蛋白聚糖合成和軟骨膠原產(chǎn)生，促進(jìn)其降解，與滑膜炎病情進(jìn)展有密切關(guān)聯(lián)，與IL-1β在滑膜炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有協(xié)同作用，可介導(dǎo)對(duì)膝關(guān)節(jié)滑膜組織的破壞［12-13］。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性藥組、低劑量薯蕷皂苷組和高劑量薯蕷皂苷組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中IL-1β和TNF-α水平明顯降低，與王文云等［10］研究結(jié)果一致；HE染色結(jié)果顯示：上述3組大鼠滑膜組織水腫和充血減輕，滑膜細(xì)胞排列相對(duì)整齊且增生減少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況改善，提示薯蕷皂苷可通過(guò)抑制IL-1β和TNF-α減輕炎癥反應(yīng)，減輕滑膜組織水腫和充血，進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)滑膜炎的治療作用。

NF-κB幾乎存在于全部細(xì)胞中，廣泛參與細(xì)胞凋亡和炎癥等生理病理過(guò)程的基因調(diào)控。在滑膜炎癥中，NF-κB作為調(diào)節(jié)因子扮演了重要角色：外界因素通過(guò)TLR2促進(jìn)NF-κB活化，從而激活下游信號(hào)通道，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘使促炎因子和共刺激分子表達(dá)增強(qiáng)，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控效應(yīng)［14-15］。TLR2為跨膜受體蛋白，可通過(guò)細(xì)胞質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和富含細(xì)胞外亮氨酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)域發(fā)揮信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子作用，刺激炎癥因子產(chǎn)生，參與病原體的殺傷過(guò)程［16-17］。MyD88是TLR信號(hào)通路中的信號(hào)向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵接頭分子，TLR2活化后可募集MyD88，當(dāng)機(jī)體受到外界刺激，自身防御機(jī)制被激活，各種細(xì)胞因子釋放并激活TLR2，導(dǎo)致MyD88募集，最終激活NF-κB。NF-κB活化和轉(zhuǎn)錄可促進(jìn)IL-1β和TNF-α等細(xì)胞因子合成，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控，而上述細(xì)胞因子還可激活NF-κB，陷入惡性循環(huán)［18-19］。TLR2/NF-κB激活是目前所認(rèn)識(shí)的引發(fā)滑膜炎癥損傷的重要通路，崔毅佳等［20］研究顯示：甲氨蝶呤是通過(guò)抑制炎癥信號(hào)通路TLR2、NF-кB mRNA和蛋白表達(dá)治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜炎。本研究結(jié)果顯示：滑膜炎大鼠體內(nèi)TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)被激活，薯蕷皂苷治療后，該通路相關(guān)蛋白表達(dá)受到抑制，提示薯蕷皂苷可通過(guò)抑制TLR2-NF-κB通路下調(diào)NF-κB下游IL-1β、TNF-α等促炎細(xì)胞因子表達(dá)，發(fā)揮治療滑膜炎的作用。

綜上所述，薯蕷皂苷可能通過(guò)抑制TLR2-NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮治療滑膜炎的作用。