• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    包裝方式對牛排貯藏期間微生物數(shù)量和演替的影響

    2021-07-29 03:27:00楊鴻博楊嘯吟張一敏梁榮蓉王芳芳毛衍偉
    食品科學(xué) 2021年13期
    關(guān)鍵詞:真空包裝氣調(diào)桿菌屬

    楊鴻博,楊嘯吟,張一敏,梁榮蓉,羅 欣,王芳芳,毛衍偉

    (山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 泰安 271018)

    牛肉營養(yǎng)豐富,蛋白質(zhì)和水分含量高[1]。因此,牛肉在貯藏和銷售過程中,極易滋生微生物,導(dǎo)致肉色褐變、產(chǎn)生異味等品質(zhì)問題,縮短了產(chǎn)品的貨架期[2-3]。氣調(diào)包裝(modified atmosphere packaging,MAP)是一種有效的牛肉保鮮技術(shù),能夠較好地保持牛肉品質(zhì)并延長其貨架期[4]。80%(體積分?jǐn)?shù),下同)O2和20% CO2是氣調(diào)包裝中最常見的氣體組成方式,其中O2和CO2分別起到護(hù)色和抑菌作用。然而,高濃度的氧氣會造成脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化以及好氧菌的大量增殖,從而導(dǎo)致牛肉品質(zhì)下降。Yang Xiaoyin等[5]探究了不同氣調(diào)包裝方式對雪花牛排貨架期和品質(zhì)的影響,結(jié)果表明80% O2氣調(diào)包裝的牛排在前4 d呈現(xiàn)出誘人的鮮紅色,但在第4天之后開始發(fā)生褐變和氧化,從而縮短了牛排的貨架期。真空包裝(vacuum package,VP)能很大程度減少氧氣對牛肉品質(zhì)的影響,但是缺氧環(huán)境使牛肉呈現(xiàn)暗紫色,且真空包裝造成的汁液損失會大大降低消費者的購買欲[6]。因此,如何在延長牛肉貨架期的基礎(chǔ)上減少高氧包裝對牛肉造成的不良影響是當(dāng)前肉類科學(xué)中的亟待解決的問題。

    50% O2氣調(diào)包裝(50% O2+30% CO2+20% N2)是一種新設(shè)計的氣調(diào)包裝,其主要目的是在保證良好肉色的前提下,盡量延緩肉類的氧化和腐敗[4]。Lücke等[7]指出,只要使O2體積分?jǐn)?shù)達(dá)到40%~50%便可以達(dá)到良好的護(hù)色效果,Zakrys-Waliwander等[8]也證明與其他含氧量相比,50% O2氣調(diào)包裝中的牛排具有更好的風(fēng)味和嫩度。Emser等[4]發(fā)現(xiàn)CO2、O2、N2比例不同的氣調(diào)包裝對牛肉糜貯藏期間的微生物數(shù)有重大影響,50% O2氣調(diào)包裝下牛肉糜的顏色和微生物數(shù)量控制得最好。與此同時,牛肉在貯藏過程中經(jīng)歷了一系列微生物的動態(tài)演替,不同的氣體組成對微生物群落的選擇作用不同[9],而微生物的組成和演替是影響牛肉品質(zhì)和貨架期的重要因素。然而,目前缺乏對50% O2氣調(diào)包裝牛排貯藏過程中微生物演替及其與肉品質(zhì)關(guān)系的研究。因此,本研究對比了50% O2氣調(diào)包裝和真空包裝對牛肉貯藏期間微生物數(shù)量、細(xì)菌群落組成和演替的影響,并通過宏基因組的功能分析探討了不同包裝方式下微生物引起的肉類腐敗機(jī)制,為明確不同包裝方式下冷鮮牛肉的腐敗機(jī)理、根據(jù)不同包裝方式下微生物組成和演替開發(fā)有效的抑菌技術(shù)提供參考,從而進(jìn)一步延長產(chǎn)品貨架期、提高產(chǎn)品品質(zhì)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    在山東省某商業(yè)屠宰場選出20 頭24 月齡雜交公牛(魯西黃?!廖鏖T塔爾),按GB/T 19477—2018《畜禽屠宰操作規(guī)程 ?!吠涝?。宰后48 h,取肉牛左半胴體的背最長肌,真空包裝后放在泡沫箱的碎冰上打包,3 h左右運至實驗室。

    PCA培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、VRBGA培養(yǎng)基、CFC培養(yǎng)基、STAA培養(yǎng)基 北京陸橋技術(shù)股份有限公司;蛋白胨、氯化鈉 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;DNA提取試劑盒 天津迦美惠眾科技有限公司;核酸純化試劑盒美國Beckman Coulter公司;PicoGreen dsDNA定量檢測試劑盒 美國Invitrogen公司;20絲真空包裝袋 深圳喜之龍包裝制品有限公司;TQBC-0775氣調(diào)包裝盒、Lid 1050阻隔膜 希悅爾(中國)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    氣調(diào)包裝機(jī) 中國大江機(jī)械設(shè)備有限公司;Seven2Go pH計、數(shù)字天平 瑞士梅特勒-托利多公司;SP62色差計 美國愛色麗公司;真空包裝機(jī) 德國Haggenmüller GmbH公司;微孔板分光光度計 美國BioTek公司;離心機(jī) 德國Eppendorf公司;蒸汽壓力滅菌鍋 廈門致微儀器有限公司;Nano DropTM1000紫外-可見分光光度計、生物安全柜 美國賽默飛世爾科技公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品采集和處理

    將背最長肌去除真空包裝后分割成9 塊3 cm厚的牛排,在每條背最長肌中隨機(jī)取出一塊牛排,定義為貯藏0 d的樣本,剩余的牛排在室溫下分別進(jìn)行真空包裝(VP處理組)和50% O2氣調(diào)包裝(MAP處理組,50% O2+30% CO2+20% N2),然后于0~4 ℃條件下貯藏,分別在貯藏的0、3、7、14、21 d進(jìn)行取樣分析。

    1.3.2 pH值和色澤的測定

    色澤指標(biāo)由亮度(L*值)、紅度(a*值)和黃度(b*值)表示,使用色差計進(jìn)行測定。測定前使用白色和黑色標(biāo)準(zhǔn)板對色差計進(jìn)行校正,牛排去除包裝后在室溫下發(fā)色30 min,每塊牛排樣品在擦干表面水分之后測定5 個不同的位置,分別記錄每個位置的數(shù)據(jù)。用pH計(提前用pH值分別為4.00和7.00的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液在4 ℃下進(jìn)行校正)測定牛排的pH值,探頭插入深度約為3 cm,連續(xù)測定5 次。

    1.3.3 微生物指標(biāo)測定

    微生物指標(biāo)測定參考Yang Xiaoyin等[5]的方法。每塊牛排樣品獲取25 g表面肉樣,加入225 mL無菌蛋白胨生理鹽水溶液在拍打均質(zhì)機(jī)中室溫均質(zhì)90 s。樣品使用體積分?jǐn)?shù)0.1%無菌蛋白胨溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋,挑選適當(dāng)?shù)南♂屘荻冗M(jìn)行微生物培養(yǎng),培養(yǎng)條件如表1所示。

    表1 微生物計數(shù)采用的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件Table 1 Culture media and culture conditions used for microbial counting

    1.3.4 微生物多樣性分析

    收集1.3.3節(jié)均質(zhì)后的溶液30 mL進(jìn)行過濾,然后在4 ℃下10 000×g離心5 min。棄上清液,將含DNA的沉淀溶于1.5 mL 0.15 mol/L的NaCl溶液中,4 ℃下12 000×g離心5 min。使用DNA提取試劑盒提取DNA。采用338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)引物對細(xì)菌16S rDNA的V3~V4可變區(qū)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增,擴(kuò)增參數(shù):98 ℃預(yù)變性2 min;98 ℃變性15 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,25~30 個循環(huán);最終72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測,并用PCR純化試劑盒進(jìn)行純化。

    使用Illumina Mi Seq PE250平臺對提取的DNA進(jìn)行測序,并截去Barcode序列和PCR擴(kuò)增引物序列。以97%的相似度將DNA測序數(shù)據(jù)聚類成操作分類單元(operational taxonomy unit,OTU)并篩選出代表序列。通過SILVA數(shù)據(jù)庫(http://www.arb-siLva.de/)對OTU代表序列進(jìn)行對比,在分類學(xué)上劃分OTU。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    除特殊說明外,指標(biāo)測定均設(shè)3 次平行,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。分析肉色、pH值、微生物指標(biāo)時,以包裝方式和貯藏時間及其交互作用為固定效應(yīng),牛胴體為隨機(jī)效應(yīng),采用SPSS一般線性模型單變量進(jìn)行差異顯著性分析,多重比較采用Tukey’s法,P<0.05表明數(shù)據(jù)之間具有顯著性差異。

    對于微生物多樣性結(jié)果,對97%相似度的OTU分析其Alpha多樣性(Chao 1、ACE和Shannon指數(shù))和Beta多樣性。利用樣品之間物種的進(jìn)化信息及物種的豐度信息進(jìn)行Unifrac分析,將得到的樣品之間距離矩陣信息進(jìn)行主成分分析和熱圖分析。對測序分析得到的OTU豐度數(shù)據(jù)進(jìn)行均一化處理,從細(xì)菌的基因組信息得到對應(yīng)的基因信息及注釋信息,再結(jié)合均一化的OTU豐度來預(yù)測樣品中可能存在的各級京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路信息。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 牛排貯藏過程中pH值的變化

    分析結(jié)果表明,包裝方式與貯藏時間的交互作用對pH值無顯著影響(P>0.05)。由圖1可知,兩組牛排貯藏初期pH值較為穩(wěn)定,貯藏7 d后pH值升高,到第21天時pH值顯著高于0~7 d(P<0.05)。Karabagias等[10]認(rèn)為貯藏后期pH值升高可能是蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生NH3和胺類化合物等堿性物質(zhì)所致,這種現(xiàn)象在一定程度上反映了肉的腐敗。

    圖1 真空包裝和50% O2氣調(diào)包裝下牛排pH值的變化趨勢Fig. 1 Evolution of pH during storage of beef steaks in vacuum and modified atmosphere

    2.2 牛排貯藏過程中色澤的變化

    肉色是評價肉品質(zhì)最直觀的指標(biāo),也是消費者購買肉時評價肉品新鮮度的首要指標(biāo),牛排的褐變通常會讓消費者聯(lián)想到肉的腐敗,導(dǎo)致拒絕購買[11]。

    在整個貯藏期間,包裝方式與貯藏時間交互作用對L*值無顯著影響(P>0.05),但貯藏時間對L*值有顯著影響(P<0.05)。兩組排骨在貯藏過程中L*值呈顯著增加的趨勢(表2),這是因為貯藏過程中往往伴隨著肌肉纖維收縮和蛋白質(zhì)降解等現(xiàn)象,這會導(dǎo)致肌肉顏色變淺、肌細(xì)胞胞外空間增加,且肌細(xì)胞胞外空間增加會導(dǎo)致產(chǎn)生更多的光散射和反射,從而使L*值增加[12-14]。

    表2 真空包裝和50% O2氣調(diào)包裝下牛排色澤的變化趨勢Table 2 Evolution of color parameters during storage of beef steaks in vacuum and modified atmosphere

    肉的顏色主要由氧合肌紅蛋白(oxymyoglobin,Oxy-Mb)、脫氧肌紅蛋白(deoxymyoglobin,Deo-Mb)和高鐵肌紅蛋白(metmyoglobin,Met-Mb)的濃度和比例決定[15]。表2結(jié)果表明,包裝方式對a*值和b*值均有顯著影響(P<0.05)。相比于真空包裝組,50% O2氣調(diào)包裝牛排具有更高的a*值和b*值,這是因為50% O2的含氧環(huán)境有利于形成Oxy-Mb,使肉呈現(xiàn)鮮紅色[16]。Esmer[4]和Raines[17]等研究也指出a*值的降低反映了肉紅色的損失,與Met-Mb的形成以及肉色從鮮紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樽睾稚芮邢嚓P(guān)。O’Sullivan等[18]的研究表明,b*值與肉類褐變以及肉類感官評定中的評分呈負(fù)相關(guān)性,b*值的下降表明Met-Mb的形成。研究認(rèn)為,氣調(diào)包裝的牛排,如果貯藏后期包裝中氧的濃度下降,當(dāng)牛排表面的氧分壓降低到有利于Met-Mb形成的范圍時,可以加速Met-Mb的積累[19]。Bevilacqua等[20]認(rèn)為一旦菌落總數(shù)超過7(lg(CFU/g)),肉表面的氧分壓就會由于微生物的呼吸耗氧而快速降低,從而加速肉的褐變。真空包裝牛排雖然不存在氧濃度降低的問題,但是其本身很低的氧分壓以及后期快速增長的微生物數(shù)量同樣有影響。

    2.3 牛排貯藏過程中微生物的變化

    如表3所示,在本研究中,各微生物的數(shù)量在牛排貯藏期間均呈現(xiàn)上升趨勢。新鮮牛排的初始菌落總數(shù)為3.71(lg(CFU/g)),屬于正常水平[8]。菌落總數(shù)、乳酸菌數(shù)和假單胞菌數(shù)在前7 d內(nèi)整體上無顯著變化,7 d之后顯著增加(P<0.05)。50% O2氣調(diào)包裝組菌落總數(shù)貯藏期間低于真空包裝組,且在貯藏末期具有顯著性差異(P<0.05)。

    表3 真空包裝和50% O2氣調(diào)包裝牛排貯藏期間微生物的變化Table 3 Evolution of microbial counts during storage of beef steaks in vacuum and modified atmosphere lg(CFU/g)

    乳酸菌是一類兼性厭氧革蘭氏陽性菌,無論有氧無氧條件都可生存[8]。許多研究表明,高濃度的二氧化碳對乳酸菌沒有顯著的抑制作用,所以乳酸菌通常能適應(yīng)氣調(diào)包裝環(huán)境,這也使得乳酸菌成為氣調(diào)包裝肉中菌群的重要組成部分[21]。然而在本研究中,貯藏14 d后50% O2氣調(diào)包裝牛排中的乳酸菌數(shù)顯著低于真空包裝組(P<0.05)。這可能是因為高濃度的氧在微生物體內(nèi)產(chǎn)生大量的活性氧自由基,導(dǎo)致微生物蛋白氧化損傷,對微生物產(chǎn)生毒害作用,致使微生物死亡[22]。

    假單胞菌是專性好氧革蘭氏陰性菌,是生肉有氧冷藏條件下的優(yōu)勢菌群。但在本研究貯藏后期,50% O2氣調(diào)包裝牛排中的假單胞菌數(shù)顯著低于真空包裝組(P<0.05)。Lorenzo等[23]發(fā)現(xiàn)真空包裝和80% O2氣調(diào)包裝的馬駒肉中假單胞菌數(shù)差異不顯著(P>0.05),而30% O2氣調(diào)包裝組(30% O2+70% CO2)肉中的假單胞菌數(shù)顯著低于真空包裝和80% O2氣調(diào)包裝組樣品(P<0.05),這與本研究結(jié)果類似。CO2濃度對膜流動性、細(xì)胞內(nèi)酶促反應(yīng)過程以及代謝反應(yīng)等有直接影響[24-27]。CO2的溶解可能是氣調(diào)包裝抑制假單胞菌生長的主要原因之一。總而言之,O2和CO2對假單胞菌的生長都有影響,但50% O2氣調(diào)包裝抑制假單胞菌的主要原因還需要進(jìn)一步研究。

    熱死環(huán)絲菌是一種兼性厭氧微生物,是氣調(diào)包裝肉類和海鮮產(chǎn)品的優(yōu)勢菌群[28]。隨著貯藏時間的延長,熱死環(huán)絲菌數(shù)顯著上升(P<0.05),兩種包裝的熱死環(huán)絲菌數(shù)在整個貯藏時間內(nèi)差異不顯著(P>0.05)。Lopez-Galvez等[29]研究表明,當(dāng)氧氣體積分?jǐn)?shù)高于0.2%時,CO2對熱死環(huán)絲菌的抑制效果會顯著降低,另一項研究則顯示,真空包裝中殘留的氧氣可以促進(jìn)熱死環(huán)絲菌的生長[30]??傮w看來,50% O2氣調(diào)包裝和真空包裝對熱死環(huán)絲菌的抑菌作用差異不顯著(P>0.05),影響其在肉中生長和代謝的因素也較為復(fù)雜,需要進(jìn)一步研究探索。

    腸桿菌科是一類兼性厭氧革蘭氏陰性菌,其中的大腸菌群數(shù)常作為檢測肉類被糞便污染程度的指標(biāo)。貯藏前7 d,兩種包裝的腸桿菌數(shù)略有增加,但差異不顯著(P>0.05);7 d之后,腸桿菌數(shù)顯著增加(P<0.05)。Berruga等[31]發(fā)現(xiàn),只有當(dāng)CO2體積分?jǐn)?shù)高于40%時,CO2才能抑制腸桿菌的生長。因此,CO2對腸桿菌的抑菌作用需要進(jìn)一步研究。此外,本研究中腸桿菌科初始數(shù)量為3.26(lg(CFU/g)),高于之前的研究結(jié)果[31],這可能也是導(dǎo)致氣調(diào)包裝對腸桿菌科抑制不顯著的重要原因。

    2.4 牛排貯藏過程中微生物多樣性分析結(jié)果

    如表4所示,真空包裝組樣本的有效測序量在43 810~52 919之間,而50% O2氣調(diào)包裝組樣本的有效測序量則在43 058~57 881之間。此外,本研究還分析了OTU數(shù)、ACE指數(shù)、Chao1指數(shù)和Shannon指數(shù)。其中OTU數(shù)與微生物種類相關(guān),OTU數(shù)越多則表明測序樣品中的微生物種類越多。ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)反映了樣品中微生物群落的物種豐度,單指群落中物種的數(shù)量,而不考慮群落中每個物種的豐度分布情況。與ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)不同,Shannon指數(shù)則反映群落的多樣性。一般Chao1指數(shù)、ACE指數(shù)和Shannon指數(shù)越高,說明樣品的微生物多樣性越豐富。

    表4 貯藏期間氣調(diào)包裝與真空包裝牛排測序的微生物群落物種豐度及多樣性Table 4 Species richness and diversity of bacterial community in beef steaks during storage in vacuum and modified atmosphere

    整個貯藏期間,氣調(diào)包裝和真空包裝牛排測序樣本的OTU數(shù)、Chao1指數(shù)、ACE指數(shù)和Shannon指數(shù)均呈先上升后下降的趨勢,這意味著隨著貯藏時間的延長,兩種包裝環(huán)境下的微生物多樣性先升高再降低。這是因為肉中的初始微生物種類繁多,在適應(yīng)環(huán)境之后會大量增殖;但隨著貯藏時間延長,一部分微生物在競爭中取得優(yōu)勢大量繁殖并抑制了其他微生物的生長,最終成為優(yōu)勢菌群[32]。此外,50% O2氣調(diào)包裝組在貯藏21 d時的OTU數(shù)、ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)均低于真空包裝組,這表明貯藏結(jié)束時50% O2氣調(diào)包裝牛排的微生物多樣性要小于真空包裝組。

    對不同貯藏時間的真空包裝和氣調(diào)包裝牛排中的微生物基因進(jìn)行測序,共檢測到37 個門的微生物,其中相對豐度大于1%的有變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Acfinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和異常球菌-棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)。由圖2A可知,在貯藏前14 d,無論真空包裝還是50% O2氣調(diào)包裝的牛排中,最主要的菌群都是變形菌門(相對豐度均大于50%),但是到貯藏期結(jié)束時,該菌群被厚壁菌門(Firmicutes)代替,厚壁菌門成為氣調(diào)包裝和真空包裝牛排中的優(yōu)勢菌群,這可能是由于貯藏14 d之后熱死環(huán)絲菌和乳酸菌快速增殖所致,這兩個菌屬都屬于厚壁菌門。

    圖2 貯藏期間氣調(diào)包裝和真空包裝牛排微生物群落的相對豐度Fig. 2 Relative abundance of bacterial community in beef steaks during storage in vacuum and modified atmosphere

    由圖2B可知,在屬水平上,初始微生物群落主要由不動桿菌屬(Acinetobacter)(15.24%)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)(9.00%)、棲熱菌屬(Thermus)(8.05%)和金黃桿菌屬(Chryseobacterium)(4.31%)等組成。這些微生物主要來源于肉牛的養(yǎng)殖環(huán)境和牛排生產(chǎn)的屠宰加工環(huán)境,例如土壤、水源和屠宰器械等污染源[33-34]。肉食桿菌(Carnobacterium)是一種異源發(fā)酵菌,能產(chǎn)生與真空包裝肉品腐敗有關(guān)的丁酸和硫化物。在本研究的真空包裝組中,肉食桿菌屬相對豐度在前7 d增長并不明顯,但從第14天開始迅速增加并于第21天達(dá)到最大值(62.5%),成為最主要的優(yōu)勢菌。這說明肉食桿菌在貯藏后期的真空包裝中具有更大的競爭優(yōu)勢,這也與之前的研究結(jié)論[35]類似。

    不同于真空包裝組,50% O2氣調(diào)包裝組的優(yōu)勢菌群演變趨勢更為復(fù)雜,前7 d各種菌的相對豐度差異并不明顯,假單胞菌屬(Pseudomonas)和不動桿菌屬相對豐度較高;但從第14天開始,環(huán)絲菌屬(Brochothrix)相對豐度迅速上升。在貯藏后期(21 d),環(huán)絲菌屬(Brochothrix)(41.9%)、沙雷氏菌屬(Serratia)(22.0%)和乳桿菌屬(Lactobacillus)(15.8%)成為50% O2氣調(diào)包裝組的優(yōu)勢菌群,這3 種菌的比例超過了79%。熱死環(huán)絲菌通常被認(rèn)為是含氧包裝肉類的主要腐敗微生物[36]。本研究中,雖然環(huán)絲菌屬在初始菌中的相對豐度很低,但隨著貯藏時間的延長,當(dāng)其他微生物的生長消耗了包裝內(nèi)的氧氣造成局部低氧時,熱死環(huán)絲菌能首先利用葡萄糖作為生長基質(zhì)并快速生長[37]。因此,隨著貯藏時間延長,環(huán)絲菌屬相對豐度越來越高,最終成為了50% O2氣調(diào)包裝貯藏后期的最大優(yōu)勢菌群。乳桿菌屬同樣是50% O2氣調(diào)包裝組貯藏后期的優(yōu)勢菌群之一,隨著其優(yōu)勢地位的增強還會對其他菌群產(chǎn)生抑制作用,但在本研究中即使到了貯藏末期其相對豐度仍大大低于環(huán)絲菌屬,并不能對環(huán)絲菌屬起到很大的抑制作用。沙雷氏菌屬屬于腸桿菌科,常見于氣調(diào)包裝的生肉中,其與動物生活的環(huán)境密切相關(guān),所以很容易進(jìn)入肉類加工生產(chǎn)鏈中。Carrizosa等[9]發(fā)現(xiàn)沙雷氏菌是導(dǎo)致高氧包裝肉類腐敗的優(yōu)勢菌群之一,與本研究得出的結(jié)果類似。

    本研究對氣調(diào)包裝和真空包裝牛排的微生物DNA測序數(shù)據(jù)進(jìn)行了主成分分析和熱圖分析,進(jìn)一步揭示了其在貯藏期間的微生物群落結(jié)構(gòu)變化。從主成分分析結(jié)果(圖3)可以看出,第一主成分(PC1)、第二主成分(PC2)的貢獻(xiàn)率分別為56.20%、26.29%,二者之和大于80%。貯藏前7 d,真空包裝和50% O2氣調(diào)包裝牛排中的微生物群落結(jié)構(gòu)并無明顯不同,14 d之后兩種包裝牛排中的微生物群落結(jié)構(gòu)開始出現(xiàn)較大差異。這表明貯藏7 d后優(yōu)勢菌群發(fā)生了變化,最終導(dǎo)致肉品腐敗的關(guān)鍵微生物可能也發(fā)生了改變。

    圖3 氣調(diào)包裝和真空包裝牛排貯藏期間微生物群落的主成分分析Fig. 3 Principal component analysis plot for the microbial community in beef steaks during storage in vacuum and modified atmosphere

    通過熱圖分析(圖4)可知,50% O2氣調(diào)包裝中環(huán)絲菌屬、沙雷氏菌屬和乳桿菌屬聚類在一起,且這3 種菌對應(yīng)的OTUs相對含量在整個群落OTUs中最高,表明它們是50% O2氣調(diào)包裝牛排貯藏期間的主要優(yōu)勢菌群。肉食桿菌屬和哈夫尼菌屬在真空包裝組中被聚類到了一起,這表明它們是真空包裝牛排貯藏后期的優(yōu)勢菌群。類似的,熱圖分析把前7 d的所有樣本聚類在了一起,14 d后的樣本聚類在了一起,這表明7~14 d的貯藏過程中牛排的微生物菌落結(jié)構(gòu)發(fā)生了重大改變,這也與主成分分析結(jié)果相同。

    圖4 氣調(diào)包裝與真空包裝牛排貯藏期間的微生物群落熱圖分析Fig. 4 Heat map showing the microbial community composition of beef steaks during storage in vacuum and modified atmosphere

    微生物代謝對肉腐敗的影響與肉貯藏環(huán)境密切相關(guān)。與肉腐敗相關(guān)的微生物大多優(yōu)先利用葡萄糖,并產(chǎn)生代謝物。本實驗對氣調(diào)包裝與真空包裝牛排中的微生物群落進(jìn)行了宏基因組功能預(yù)測,研究了貯藏期間牛排的腐敗過程及機(jī)制。從圖5可以看出,在貯藏過程中,與碳水化合物代謝相關(guān)基因和蛋白質(zhì)代謝相關(guān)基因的數(shù)量明顯高于其他代謝過程。貯藏前7 d,兩種包裝下牛排中的微生物的蛋白質(zhì)代謝基因數(shù)量差異并不明顯。而貯藏到第21天時,相比于真空包裝組,50% O2氣調(diào)包裝牛排中的微生物群落中,涉及碳水化合物代謝的基因數(shù)量更低,涉及蛋白質(zhì)代謝的基因數(shù)量更多。這說明貯藏后期,50% O2氣調(diào)包裝牛排中微生物群落具有比真空包裝牛排中微生物群落更低的糖代謝水平和更高的蛋白質(zhì)降解能力。

    圖5 氣調(diào)包裝和真空包裝牛排在貯藏期間微生物群落的代謝功能預(yù)測Fig. 5 Predicted metabolic function of the microbial community in beef steaks stored in different packages for different periods of time

    肉食桿菌通常會出現(xiàn)在貯藏初期的真空包裝牛排中,并在其微生物菌群結(jié)構(gòu)中占主導(dǎo)地位,但隨著貯藏時間延長通常會被其他乳酸菌所取代[38]。但是,Casaburi等[39]發(fā)現(xiàn)肉食桿菌是真空包裝冷鮮牛排貯藏末期的主要優(yōu)勢菌群,且相對豐度達(dá)到了80%,與本研究結(jié)果十分相似。作為乳酸菌的特殊分支,肉食桿菌屬是一類可以分解多種碳水化合物為自身代謝供能的細(xì)菌[40],圖5也表明貯藏后期真空包裝組牛排中微生物群落的碳水化合物代謝水平較高,這與肉食桿菌是真空包裝牛排貯藏后期的主要優(yōu)勢菌群密切相關(guān)。

    不同于肉食桿菌,在肉貯藏初期熱死環(huán)絲菌僅能代謝葡萄糖,當(dāng)葡萄糖消耗完之后會轉(zhuǎn)而分解蛋白質(zhì),利用氨基酸來供能[39]。因為貯藏后期50% O2氣調(diào)包裝牛排中微生物的蛋白質(zhì)代謝水平高于真空包裝組,這表明在貯藏期間50% O2氣調(diào)包裝牛排中微生物對于蛋白質(zhì)的代謝大于真空包裝組。Braun等[41]研究指出,熱死環(huán)絲菌的胞外分泌物含有較高的蛋白酶活性,這表明熱死環(huán)絲菌具有較高的蛋白質(zhì)分解能力,能夠降解蛋白質(zhì)為自身供能,這或許是50% O2氣調(diào)包裝微生物群落具有更高蛋白質(zhì)降解能力的原因。

    3 結(jié) 論

    與真空包裝相比,50% O2氣調(diào)包裝具有更好的護(hù)色能力和抑菌效果。隨著貯藏時間的延長,氣調(diào)包裝和真空包裝牛排中的微生物從貯藏初期的變形菌門轉(zhuǎn)變?yōu)橘A藏后期的厚壁菌門。在屬水平上,牛排的初始微生物群落主要由不動桿菌屬、蒼白桿菌屬、棲熱菌屬和金黃桿菌屬組成,隨著貯藏時間的延長,肉食桿菌屬成為真空包裝牛排中的優(yōu)勢菌群,而環(huán)絲菌屬、沙雷氏菌屬和乳桿菌屬成為50% O2氣調(diào)包裝牛排的優(yōu)勢菌群;貯藏7~14 d是牛排中微生物種類產(chǎn)生變化的關(guān)鍵時間點。與真空包裝牛排相比,50% O2氣調(diào)包裝牛排中的微生物群落具有較低的糖代謝和較高的蛋白質(zhì)代謝能力。本研究明確了50% O2氣調(diào)包裝對貯藏過程中牛排品質(zhì)和微生物的影響,探明了50% O2氣調(diào)包裝和真空包裝貯藏過程中微生物的演替、微生物演替關(guān)鍵時間點和代謝異同,為開發(fā)牛排貯藏技術(shù)提供了科學(xué)參考。

    猜你喜歡
    真空包裝氣調(diào)桿菌屬
    潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群分布特征分析
    果蔬氣調(diào)貯藏技術(shù)及設(shè)備
    養(yǎng)豬微生物發(fā)酵床芽胞桿菌空間生態(tài)位特性
    真空包裝粽子品質(zhì)指標(biāo)研究
    食品工程(2015年3期)2015-12-07 10:20:55
    解碼食品真空包裝機(jī)械及其應(yīng)用趨勢
    塑料包裝(2015年1期)2015-09-26 12:23:39
    新型簡易氣調(diào)箱可延長果蔬保質(zhì)期
    類芽孢桿菌屬β-葡萄糖苷酶在大腸桿菌中可溶性重組表達(dá)的優(yōu)化
    Vitek-2 Compact和MALDI TOF MS對棒狀桿菌屬細(xì)菌鑒定能力評估
    O2聯(lián)合CO2氣調(diào)對西蘭花活性氧代謝及保鮮效果的影響
    真空包裝水晶肴肉加工及貯藏過程中的菌相研究
    国产一区二区激情短视频| 一进一出抽搐动态| 又爽又黄a免费视频| 亚洲成av人片在线播放无| 国产极品精品免费视频能看的| 日本与韩国留学比较| 国产精品人妻久久久影院| 日韩av在线大香蕉| 美女 人体艺术 gogo| 九色国产91popny在线| 成人永久免费在线观看视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产av不卡久久| 在线观看午夜福利视频| 国产av一区在线观看免费| 免费看光身美女| 日韩精品青青久久久久久| 天堂动漫精品| 精品欧美国产一区二区三| 中出人妻视频一区二区| 日本熟妇午夜| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 在线看三级毛片| 联通29元200g的流量卡| 亚洲成人免费电影在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 日韩欧美免费精品| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产色婷婷99| ponron亚洲| 国产精品一及| 午夜老司机福利剧场| 91麻豆av在线| 成人国产综合亚洲| 日本 av在线| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产在线精品亚洲第一网站| 动漫黄色视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 久久久国产成人免费| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成年版毛片免费区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6 | 日本黄大片高清| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 色av中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品一及| 午夜免费激情av| av黄色大香蕉| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久久精品大字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成人午夜高清在线视频| 精品久久久久久久久久久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲中文字幕日韩| 麻豆国产97在线/欧美| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜福利18| 听说在线观看完整版免费高清| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美色视频一区免费| 免费少妇av软件| 亚洲av日韩在线播放| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品久久久久成人av| 亚洲av成人精品一区久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 七月丁香在线播放| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲精品第二区| 在线播放无遮挡| 一区二区三区精品91| 一级二级三级毛片免费看| 韩国av在线不卡| 久久av网站| 欧美日韩在线观看h| 偷拍熟女少妇极品色| 国产69精品久久久久777片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 好男人视频免费观看在线| 亚洲图色成人| 我的老师免费观看完整版| 2018国产大陆天天弄谢| 青春草国产在线视频| 久久久久久久久久成人| 婷婷色综合大香蕉| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 老熟女久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩大片免费观看网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 91狼人影院| 亚洲欧美日韩无卡精品| 嫩草影院入口| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 一级av片app| 三级经典国产精品| 97超视频在线观看视频| 亚洲精品第二区| 欧美人与善性xxx| 黄片wwwwww| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲图色成人| 日韩一本色道免费dvd| 国产高清国产精品国产三级 | 日本vs欧美在线观看视频 | 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 成人漫画全彩无遮挡| 免费看日本二区| 女性生殖器流出的白浆| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲欧美清纯卡通| 97超碰精品成人国产| 街头女战士在线观看网站| 嫩草影院新地址| 成年av动漫网址| 九九在线视频观看精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久精品免费免费高清| 久久久午夜欧美精品| 久久久久久久精品精品| 久久精品国产a三级三级三级| 精品国产露脸久久av麻豆| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 丝袜脚勾引网站| 麻豆成人av视频| 亚洲av成人精品一二三区| 最近手机中文字幕大全| 久久婷婷青草| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲成人手机| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久 成人 亚洲| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品人妻一区二区三区麻豆| av网站免费在线观看视频| 久久影院123| 欧美极品一区二区三区四区| 寂寞人妻少妇视频99o| 免费av中文字幕在线| 国产视频内射| 熟女电影av网| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 丰满乱子伦码专区| 国产在线一区二区三区精| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁动态无遮挡网站| 国产熟女欧美一区二区| 偷拍熟女少妇极品色| av线在线观看网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲综合精品二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 日本午夜av视频| 亚洲精品国产av成人精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| www.色视频.com| 国产淫片久久久久久久久| 久久久久久久久久成人| 七月丁香在线播放| 国产精品国产三级专区第一集| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲高清免费不卡视频| 熟女av电影| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 看免费成人av毛片| 777米奇影视久久| 性色av一级| .国产精品久久| 夫妻午夜视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品无大码| 国产精品久久久久成人av| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲怡红院男人天堂| 日本欧美国产在线视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国国产精品蜜臀av免费| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费观看性生交大片5| videos熟女内射| 午夜福利在线在线| 99久久精品国产国产毛片| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品一区www在线观看| 内射极品少妇av片p| 国产精品一及| 国产精品蜜桃在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产淫语在线视频| 亚洲综合色惰| 中文字幕制服av| av网站免费在线观看视频| 91久久精品国产一区二区成人| 国产色婷婷99| 国产成人91sexporn| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲色图av天堂| 精品久久久久久久久av| 精品亚洲成a人片在线观看 | 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲精品视频女| 午夜福利视频精品| 欧美+日韩+精品| 一本色道久久久久久精品综合| 韩国高清视频一区二区三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在线观看人妻少妇| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费在线观看成人毛片| 在线看a的网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 少妇的逼水好多| 草草在线视频免费看| 三级国产精品片| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美97在线视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人精品久久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 中文资源天堂在线| 有码 亚洲区| 97在线人人人人妻| 少妇丰满av| 午夜激情福利司机影院| 国产成人精品久久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| a级一级毛片免费在线观看| 美女国产视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 成人黄色视频免费在线看| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品久久国产蜜桃| av在线app专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久人人爽人人片av| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 91久久精品国产一区二区三区| av在线app专区| 婷婷色综合大香蕉| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 一区二区三区精品91| 久久久色成人| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 黄色一级大片看看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产在线男女| 国产精品三级大全| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲av男天堂| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 丰满少妇做爰视频| 亚洲国产精品999| 国产精品免费大片| 国产91av在线免费观看| 日韩国内少妇激情av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲国产高清在线一区二区三| 精品久久国产蜜桃| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精品一二三| 亚洲美女黄色视频免费看| 人妻少妇偷人精品九色| 波野结衣二区三区在线| 97在线视频观看| 国产色婷婷99| 少妇人妻 视频| 亚洲av综合色区一区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩电影二区| 日本午夜av视频| 色视频www国产| 国产乱人视频| 午夜老司机福利剧场| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 有码 亚洲区| 在线观看一区二区三区激情| 国产亚洲5aaaaa淫片| 大香蕉97超碰在线| 国产成人一区二区在线| 在线观看国产h片| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品一区www在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚州av有码| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美97在线视频| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 精品酒店卫生间| 一区二区三区四区激情视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久a久久爽久久v久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| a 毛片基地| av福利片在线观看| 嫩草影院入口| 日韩国内少妇激情av| 国产精品福利在线免费观看| 热re99久久精品国产66热6| 国产高清三级在线| 欧美精品国产亚洲| 99久久精品一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 国产精品伦人一区二区| 中文欧美无线码| 91在线精品国自产拍蜜月| 丝瓜视频免费看黄片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚州av有码| 韩国av在线不卡| 欧美三级亚洲精品| 在线 av 中文字幕| 99视频精品全部免费 在线| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费少妇av软件| 哪个播放器可以免费观看大片| 女性被躁到高潮视频| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 夫妻午夜视频| 尾随美女入室| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜视频国产福利| 色吧在线观看| 观看免费一级毛片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美极品一区二区三区四区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日本黄色片子视频| 亚洲精品视频女| 国产乱来视频区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 又大又黄又爽视频免费| 日本黄色片子视频| 婷婷色综合大香蕉| 99热全是精品| 精品久久久久久久久亚洲| 久久久久精品性色| 亚洲真实伦在线观看| 高清欧美精品videossex| 亚洲电影在线观看av| 国产综合精华液| 日韩国内少妇激情av| 成人影院久久| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲国产欧美人成| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产成人免费观看mmmm| 国产成人a区在线观看| 久久精品国产自在天天线| 丝瓜视频免费看黄片| 国产极品天堂在线| 在现免费观看毛片| freevideosex欧美| 最近2019中文字幕mv第一页| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| av.在线天堂| 久久久色成人| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 精品人妻视频免费看| 最后的刺客免费高清国语| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久青草综合色| 中文字幕久久专区| 一级a做视频免费观看| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩在线观看h| 18禁动态无遮挡网站| 日韩人妻高清精品专区| 99久久精品国产国产毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 在线 av 中文字幕| 岛国毛片在线播放| 免费观看的影片在线观看| 九草在线视频观看| 好男人视频免费观看在线| 内射极品少妇av片p| 搡老乐熟女国产| 欧美人与善性xxx| 2018国产大陆天天弄谢| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 在线观看人妻少妇| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 黄色欧美视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 国产亚洲最大av| 亚洲最大成人中文| videossex国产| 人妻夜夜爽99麻豆av| 最近的中文字幕免费完整| 深夜a级毛片| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久这里有精品视频免费| 久久综合国产亚洲精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久国内精品自在自线图片| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产一级毛片在线| 国产成人免费观看mmmm| 观看免费一级毛片| 丰满乱子伦码专区| 欧美高清成人免费视频www| 天美传媒精品一区二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 精品久久久精品久久久| 国产乱人视频| 国产中年淑女户外野战色| 国产 一区精品| 久久99热6这里只有精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 大码成人一级视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久 成人 亚洲| 免费看不卡的av| 久久97久久精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲国产最新在线播放| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 成人国产av品久久久| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一区www在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲成人一二三区av| 日日撸夜夜添| 99热这里只有是精品50| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲av成人精品一区久久| 久久影院123| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲高清免费不卡视频| 交换朋友夫妻互换小说| 成年人午夜在线观看视频| 中文欧美无线码| 国产视频内射| 大陆偷拍与自拍| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲av中文av极速乱| 久久久久网色| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲高清免费不卡视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 少妇高潮的动态图| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产人妻一区二区三区在| 久久久久国产网址| 91久久精品国产一区二区成人| 国产成人freesex在线| 亚洲内射少妇av| 青春草视频在线免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美精品一区二区大全| 下体分泌物呈黄色| 成人黄色视频免费在线看| 啦啦啦啦在线视频资源| 我的女老师完整版在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 精品人妻视频免费看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久国产一区二区| 国产成人freesex在线| 91久久精品国产一区二区成人| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 99热网站在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲av中文av极速乱| 成人二区视频| 国产亚洲91精品色在线| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美三级亚洲精品| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 又爽又黄a免费视频| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 超碰97精品在线观看| xxx大片免费视频| 日韩国内少妇激情av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品国产自在天天线| 日韩欧美一区视频在线观看 | 亚洲精品乱久久久久久| 欧美激情国产日韩精品一区| 日韩亚洲欧美综合| 在线观看一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 观看美女的网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 特大巨黑吊av在线直播| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 岛国毛片在线播放| 少妇 在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 中文资源天堂在线| 99久国产av精品国产电影| 婷婷色综合大香蕉| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 好男人视频免费观看在线| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久久国产精品人妻一区二区| 97超视频在线观看视频| 麻豆成人午夜福利视频| 少妇丰满av| 男人添女人高潮全过程视频| 高清不卡的av网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 国模一区二区三区四区视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 99re6热这里在线精品视频| 成人黄色视频免费在线看| 成人特级av手机在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 最新中文字幕久久久久| 少妇精品久久久久久久| 在线天堂最新版资源| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲av欧美aⅴ国产| 女性被躁到高潮视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品久久久久成人av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | av视频免费观看在线观看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美 日韩 精品 国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 97超碰精品成人国产| 春色校园在线视频观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 99热这里只有是精品50| 国产精品无大码| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 性色avwww在线观看| 日本与韩国留学比较|