表面增強(qiáng)拉曼光譜快速檢測抗風(fēng)濕類中成藥中非法添加的美洛昔康

龔婭軍， 姚衛(wèi)蓉， 謝云飛

（江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122）

目前，抗風(fēng)濕類中成藥中美洛昔康的檢測手段單一，主要集中在高效液相色譜以及高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜[1-3]。拉曼光譜是一種指紋圖譜，能提供分子振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)的信息，而每一種物質(zhì)在單色強(qiáng)光的照射下都能產(chǎn)生特定的分子振動(dòng)能和轉(zhuǎn)動(dòng)能變化，因此每一種物質(zhì)都對(duì)應(yīng)一種特定的拉曼光譜，所以被應(yīng)用于物質(zhì)的定性檢測[4]。但常規(guī)的拉曼光譜受到其很弱的拉曼信號(hào)的限制，沒能被廣泛應(yīng)用[5]。表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）可以通過強(qiáng)化基底的物理和化學(xué)增強(qiáng)，極大提高SERS的信號(hào)強(qiáng)度，甚至實(shí)現(xiàn)單分子檢測[6-7]。SERS以其獨(dú)特的優(yōu)勢，例如靈敏度高、操作快速簡便以及可以實(shí)現(xiàn)無損檢測等被廣泛應(yīng)用在食品分析[8-9]、生物醫(yī)學(xué)[10-11]以及環(huán)境監(jiān)督中[12-13]。近年來，貴金屬納米粒子修飾的納米陣列作為SERS增強(qiáng)基底引起了研究者們廣泛的興趣，該基底SERS增強(qiáng)效果好，具有良好的重現(xiàn)性以及穩(wěn)定性。Lin等制備了大面積金納米粒子修飾的硅納米棒，其增強(qiáng)因子達(dá)到107，并且發(fā)現(xiàn)長淀粉樣蛋白-β原纖維能在此基底上產(chǎn)生超敏感拉曼信號(hào)，這為與阿爾茨海默病相關(guān)的淀粉樣蛋白聚集體的檢測提供了支撐[14]。Lee等利用斜角沉積的方法在硅納米陣列上用金納米粒子修飾，其增強(qiáng)因子達(dá)到1.78×106，并且將其應(yīng)用到實(shí)際的檢測中，可檢測濃度為0.01~100μmol/L的孔雀石綠[15]。Wei等通過將DNA鏈固定在金納米粒子修飾的硅納米線陣列，用有機(jī)染料標(biāo)記的寡核苷酸捕獲和報(bào)告探針，可檢測濃度低至10 fmol/L的DNA[16]。

作者通過金屬輔助的化學(xué)刻蝕與無電沉積的方式，制備一種銀納米枝晶修飾的硅納米陣列（silver nanodendrite-modified silicon nanoarrays，AgND/SiNWs），將其作為表面增強(qiáng)拉曼光譜的增強(qiáng)基底應(yīng)用于美洛昔康的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

硅片（P-100，單面拋光，5~10Ω·cm，厚度（525±25）μm）：蘇州銳材半導(dǎo)體有限公司產(chǎn)品；美洛昔康對(duì)照品（99.99%）：中檢所產(chǎn)品；丙酮（色譜純）、無水乙醇（色譜純）、過氧化氫（分析純）、氫氟酸（分析純）、硝酸（分析純）、乙腈（色譜純）、硝酸銀（基準(zhǔn)）、硝酸鐵（分析純）、硼氫化鈉（分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；超純水：廣州屈臣氏食品飲料有限公司產(chǎn)品；復(fù)方螞蟻活絡(luò)膠囊：四平正和制藥有限公司產(chǎn)品。

1.2 儀器與設(shè)備

便攜式拉曼光譜儀（RamTracer?-200-HS）：OptoTrace Technologies公司產(chǎn)品；有機(jī)濾膜（0.45 μm）：上海安譜公司產(chǎn)品；聚四氟乙烯燒杯：上海申迪玻璃儀器有限公司產(chǎn)品；聚四氟乙烯坩堝：上海申迪玻璃儀器有限公司產(chǎn)品；聚四氟乙烯鑷子：蘇州銳材半導(dǎo)體有限公司產(chǎn)品；分析天平（AB104-N）：梅特勒-托利多國際股份有限公司產(chǎn)品；超聲波清洗儀（KH-500B）：昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司產(chǎn)品；可調(diào)式移液槍：Dragon-Lab公司產(chǎn)品；SU8100冷場發(fā)射掃描電子顯微鏡：日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)公司產(chǎn)品；X射線衍射儀（D2 PHASER）：德國布魯克AXS有限公司產(chǎn)品；UV-2450紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 拉曼檢測條件 掃描功率300 mW，激發(fā)波長785 nm，積分時(shí)間5 s，積分次數(shù)3次。

1.3.2 AgND/SiNWs的合成 首先，將P型單面拋光的硅片切割成1.5 cm×1.5 cm的片狀，依次用丙酮、無水乙醇以及超純水超聲清洗10 min，室溫自然晾干。晾干的硅片浸入HF（4.6 mol/L）與AgNO3（0.44 mol/L）溶液中10 s，在其表面形成銀網(wǎng)絡(luò)，銀作為催化劑參與下一步的刻蝕反應(yīng)。后將硅片浸入刻蝕液中進(jìn)行一定時(shí)間的刻蝕，獲得表面有一定深度的陣列，為下一步銀納米粒子的沉積提供極大的比表面積。接著將處理好的硅片浸入HF（4.6 mol/L）與AgNO3（0.01 mol/L））溶液中一定時(shí)間，以獲得AgND/SiNWs。最后在體積分?jǐn)?shù)5%的硝酸溶液中浸泡15 min，超純水沖洗表面，取出，室溫晾干，備用。

1.3.3 樣品預(yù)處理 稱取0.3 g樣品，加乙腈30 mL，超聲提取15 min，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用乙腈稀釋至刻度。過濾，濾液備用；樣品加標(biāo)處理：稱取0.3 g樣品，加乙腈30 mL，加標(biāo)質(zhì)量濃度為2、10、20μg/mL，超聲提取15 min，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。過濾，濾液備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 美洛昔康分子的理論計(jì)算與拉曼歸屬指認(rèn)

分別使用HyperChem、Gaussian09對(duì)美洛昔康分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，然后對(duì)最優(yōu)結(jié)構(gòu)進(jìn)行拉曼位移的理論計(jì)算。優(yōu)化時(shí)，采用密度泛函方法中的b3lyp方法，并結(jié)合6-311+g（d）基組，分子結(jié)構(gòu)優(yōu)化結(jié)果如圖1所示；之后將關(guān)鍵字設(shè)為：p opt freq=raman，geom=connectivity，對(duì)分子進(jìn)行拉曼位移的理論計(jì)算（校正因子為0.968 0），如圖2所示，與固體美洛昔康的普通拉曼光譜圖對(duì)比，光譜圖基本一致。使用GaussianView5.0觀察和分析計(jì)算結(jié)果，并使用Veda4進(jìn)行PED（振動(dòng)歸屬指認(rèn)）分析，對(duì)美洛昔康分子在拉曼光譜中的各個(gè)振動(dòng)峰及其貢獻(xiàn)率進(jìn)行歸屬指認(rèn)，見表1。

圖1 美洛昔康的分子結(jié)構(gòu)優(yōu)化圖Fig.1 Optimized molecular structure of meloxicam

圖2中美洛昔康分子的理論計(jì)算與固體分子的普通拉曼光譜圖稍有差別但總體基本一致，究其原因，理論計(jì)算時(shí)考慮的僅僅是單個(gè)分子在理想狀態(tài)下的拉曼光譜，而實(shí)際樣品中是很多分子聚集在一起的狀態(tài)，因而導(dǎo)致理論計(jì)算與實(shí)驗(yàn)光譜有一定的拉曼位移差異，但是絕大多數(shù)的理論計(jì)算光譜與實(shí)驗(yàn)光譜具備很好的吻合度，對(duì)拉曼特征峰的歸屬以及指認(rèn)具有一定的指導(dǎo)作用。

圖2 美洛昔康的實(shí)驗(yàn)拉曼光譜和理論拉曼光譜Fig.2 Experimental and theoretical Raman spectrum of meloxicam

通過PED分析得出表1并結(jié)合圖1、圖2可以看出，對(duì)美洛昔康的拉曼光譜貢獻(xiàn)率最大的特征峰為670、1 032、1 116、1 160、1 264、1 304、1 470、1 530、1 592 cm-1，其中，670 cm-1處為C27—S28以及S28—C27=N32的伸縮振動(dòng)，主要是S28—C27=N32的伸縮振動(dòng)，貢獻(xiàn)率為37%；1 032 cm-1處為苯環(huán)內(nèi)C8—C9伸縮振動(dòng)以及N18—C19的伸縮振動(dòng)；1 116 cm-1處為S=O的振動(dòng)；1 160 cm-1處為苯環(huán)內(nèi)C6—C9、H20—C19—N18—S15以 及 H21—C19—N18—S15的振動(dòng)；1 304 cm-1處為S=O的振動(dòng)；1 470 cm-1以及1 530 cm-1處為—CH3的伸縮振動(dòng)；1 592 cm-1處為環(huán)內(nèi)N32=C27以及C29=C30的振動(dòng)。

表1 美洛昔康理論計(jì)算以及實(shí)驗(yàn)拉曼光譜特征峰及振動(dòng)歸屬表Table 1 Experimental and calculated Raman spectrum in frequency and assignment of meloxicam

2.2 AgND/SiNWs的SERS增強(qiáng)性能

為確定AgND/SiNWs對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果，圖3給出了美洛昔康及其在未刻蝕硅片和AgND/SiNWs上的拉曼光譜。從圖3可以看出，美洛昔康在錫箔紙上經(jīng)普通拉曼檢測沒有任何拉曼信號(hào)，光譜中出現(xiàn)的拉曼峰為溶劑乙腈在918、1 374 cm-1處的拉曼位移；在未刻蝕的硅片上同樣觀察不到美洛昔康的拉曼信號(hào)，只在520 cm-1處出現(xiàn)單晶硅的拉曼特征峰；而在AgND/SiNWs上觀察到很強(qiáng)的拉曼信號(hào)，同樣在520 cm-1處也出現(xiàn)了單晶硅的拉曼信號(hào)，證明制備的基底具有很好的SERS增強(qiáng)效果。

圖3 美洛昔康乙腈溶液在錫箔紙上（a）、在未經(jīng)蝕刻的硅片上（b）及AgND/SiNWs上（c）的拉曼光譜圖Fig.3 Raman spectra of meloxicam acetonitrile solution in aluminum foil(a)，unetched silicon wafter(b)and AgND/SiNWs(c)

2.3 AgND/SiNWs制備條件優(yōu)化

比較不同氧化劑對(duì)硅納米陣列形成過程的影響，從而可改變基底的SERS增強(qiáng)效果。分別使用硝酸鐵（AgND/SiNWs2）、過氧化氫（AgND/SiNWs1）作為氧化劑，與氫氟酸組成2種刻蝕溶液，制備得到2種基底，對(duì)美洛昔康的增強(qiáng)效果見圖4（a）。過氧化氫作為氧化劑時(shí)制備得到的AgND/SiNWs對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)性能優(yōu)于硝酸鐵作為氧化劑時(shí)制備得到的基底。為進(jìn)一步證實(shí)過氧化氫的主導(dǎo)作用，將過氧化氫與硝酸鐵同時(shí)作為氧化劑制備新的基底（AgND/SiNWs3），其對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果與過氧化氫單獨(dú)作為氧化劑時(shí)一致（見圖4（a））。在整個(gè)金屬輔助的化學(xué)刻蝕過程中，根據(jù)原電池模型，涉及一個(gè)局域的微電化學(xué)過程[17-18]。簡單表述為：硅片表面形成的Ag網(wǎng)絡(luò)作為催化劑加速底部局域Si的氧化，氫氟酸將氧化后的Si溶解刻蝕后，洗去Ag網(wǎng)絡(luò)層，剩下的Si就形成了SiNWs。Si的氧化可能是形成SiNWs重要的前驅(qū)，而為了加速Si的氧化，必須維持一定濃度的自由Ag+。在HFH2O2-H2O體系中，H2O2不僅作為氧化劑參與其中，并且可以溶解Ag納米顆粒，從而維持溶液中一定濃度的自由Ag+；而在HF-Fe（NO3）3-H2O體系中，有文獻(xiàn)指出[19]，在Fe（NO3）3作為氧化劑參與反應(yīng)時(shí)，對(duì)于SiNWs的形成起重要作用的是NO3-離子，并非Fe3+離子，這可能是HF-H2O2-H2O體系制備的SiNWs對(duì)于美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果優(yōu)于HF-Fe（NO3）3-H2O體系的原因。

金屬輔助的化學(xué)刻蝕制備硅納米陣列分為一步法與兩步法。為了探究哪種方法制備的基底對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果更好，采用兩種方法制備AgND/SiNWs，評(píng)價(jià)其SERS增強(qiáng)效果。結(jié)果如圖4（b）所示。由兩步法制備的基底對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果明顯比一步法好。這是因?yàn)樵谝徊椒ㄖ苽浠椎倪^程中，硅片直接浸入由HF/AgNO3/H2O2組成的溶液，而H2O2對(duì)Ag顆粒的生長有阻礙作用，加入H2O2后溶液中光激發(fā)的空穴增加，電子減少，所以Ag+無法捕獲更多的e-，進(jìn)而析出更多的Ag顆粒，使得制備的基底SERS增強(qiáng)效果差于兩步法[20]。

圖4 美洛昔康在不同硅納米陣列的拉曼光譜及硅納米陣列的掃描電鏡圖Fig.4 Raman spectrum of meloxicam in different AgND/SiNWs and the SEM images of different AgNDs/SiNWs

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，刻蝕時(shí)間對(duì)硅納米陣列的形成也有一定影響，從而影響其SERS增強(qiáng)效果。圖4（c）顯示在刻蝕時(shí)間為25 min時(shí)，基底的SERS增強(qiáng)效果最好，圖4（e）為不同刻蝕時(shí)間（10、25、40 min）制備的硅納米陣列截面的掃描電鏡圖?？梢钥闯?，隨著刻蝕時(shí)間延長，硅納米陣列的長度也隨之增加，與文獻(xiàn)結(jié)果一致。

通過改變鍍銀時(shí)間來制備不同的AgNDs/SiNWs，圖4（d）給出了不同鍍銀時(shí)間生成的AgNDs/SiNWs對(duì)美洛昔康的SERS增強(qiáng)效果圖，鍍銀時(shí)間為120 s時(shí)，其SERS增強(qiáng)效果最好。鍍銀的過程實(shí)際上是一個(gè)還原反應(yīng)。初期，相對(duì)較高濃度的銀鹽和還原劑導(dǎo)致銀核的生長，在SiNWs的頂部形成微小的AgNPs，隨著反應(yīng)的繼續(xù)，銀鹽和還原劑的濃度都隨之降低，此時(shí)銀的生長主要是由表面能的降低驅(qū)動(dòng)的，從而形成AgNDs。納米級(jí)的枝晶縫隙將大大增強(qiáng)拉曼信號(hào)強(qiáng)度。當(dāng)反應(yīng)時(shí)間延長到180 s，不規(guī)則的AgNDs將影響SERS增強(qiáng)效果[21-23]。圖4（f）為其掃描電鏡圖，可以看出，隨著鍍銀時(shí)間由0 s增加至60 s，銀納米枝晶側(cè)面的枝晶也逐漸增多，到120 s時(shí)，可以看到銀納米枝晶的分布比較整齊、均勻，當(dāng)時(shí)間延長至180 s時(shí)，生成的枝晶多而不規(guī)則。

2.4 重現(xiàn)性

以目標(biāo)物美洛昔康為探針分子來探究其重現(xiàn)性，結(jié)果如圖5所示。10次掃描的結(jié)果具有較高的重現(xiàn)性，為了定量評(píng)估，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。結(jié)合表2，美洛昔康9個(gè)特征峰強(qiáng)度平均RSD為11%。

表2 美洛昔康10次掃描結(jié)果及RSDTable 2 10 scan results and RSD of meloxicam

圖5 美洛昔康在AgNDs/SiNWs上的連續(xù)掃描拉曼光譜圖Fig.5 Raman spectra of meloxicam in AgNDs/SiNWs with continuous scanning

2.5 可重復(fù)利用性

以目標(biāo)物美洛昔康為探針分子，探究基底的可重復(fù)利用性。圖6（a）給出了經(jīng)過不同的清洗時(shí)間后，基底上殘留的美洛昔康的拉曼光譜圖?？梢钥闯?，清洗時(shí)間由10 s增加至50 s，仍然可以分辨出美洛昔康在1 592、1 530、1 116、1 032 cm-1等處的位移。當(dāng)清洗時(shí)間延長至70 s，基本分辨不出美洛昔康的特征峰。圖6（b）是美洛昔康在清洗70 s、清洗7次的AgNDs/SiNWs上的拉曼光譜圖。隨著清洗次數(shù)的增加，特征峰的強(qiáng)度也逐漸降低，到第7次，美洛昔康的特征峰強(qiáng)度明顯下降，可認(rèn)為該基底清洗時(shí)間70 s，可重復(fù)利用7次。

圖6 美洛昔康在AgNDs/SiNWs上的拉曼光譜圖Fig.6 Raman spectra of meloxicam on AgNDs/SiNWs

2.6 儲(chǔ)存穩(wěn)定性

為探究制備的AgNDs/SiNWs基底的時(shí)間穩(wěn)定性，以目標(biāo)物美洛昔康為探針分子，放置不同時(shí)間后進(jìn)行拉曼測試，結(jié)果如圖7所示。制備的AgNDs/SiNWs在4 d內(nèi)幾乎保持一致的SERS增強(qiáng)效果，穩(wěn)定性較好，美洛昔康的主要特征峰強(qiáng)度降低幅度很小。在第96天時(shí)，仍然能清楚地分辨美洛昔康的主要特征峰。該結(jié)果表明，AgNDs/SiNWs基底時(shí)間穩(wěn)定性好，且在距離制備時(shí)間越短使用，其SERS增強(qiáng)效果越明顯。放置96 d的AgNDs/SiNWs增強(qiáng)信號(hào)有所減弱，但仍可使用。

圖7 AgNDs/SiNWs放置不同時(shí)間后對(duì)美洛昔康的增強(qiáng)效果對(duì)比Fig.7 Comparison of the Raman spectra of meloxicam AgNDs/SiNWs in different time

3 方法應(yīng)用

3.1 目標(biāo)檢測物質(zhì)的確定

將2個(gè)質(zhì)量濃度的美洛昔康對(duì)照品溶液的拉曼光譜圖與其固體粉末的拉曼光譜圖比較，確定目標(biāo)檢測物質(zhì)。由圖8可以看出，在670、1 032、1 116、1 160、1 264、1 304、1 470、1 530、1 592 cm-1處，兩者拉曼位移一致，可以確定檢測物質(zhì)，并且可將其作為美洛昔康的定性依據(jù)。

圖8 質(zhì)量濃度為25、100μg/mL的美洛昔康對(duì)照品溶液與其固體拉曼光譜圖Fig.8 Raman spectra of meloxicam in solid state,25μg/mL and 100μg/mL

3.2 基底與待測液接觸方式對(duì)SERS增強(qiáng)效果的影響

待測液與基底的接觸方式對(duì)SERS增強(qiáng)效果有影響。作者選取的2種接觸方式為浸泡和滴加。圖9顯示了2種接觸方式對(duì)SERS增強(qiáng)效果的影響?？梢钥闯?，浸泡與滴加2種方式的SERS增強(qiáng)效果沒有顯著差別。

圖9 浸泡與滴加兩種接觸方式檢測的美洛昔康拉曼光譜圖Fig.9 Raman spectra of meloxicam detected by two contact methods

3.3 待測溶液滴加體積對(duì)SERS增強(qiáng)效果的影響

待測液的體積可影響目標(biāo)分子在AgNDs/SiNWs基底上的吸附情況，從而對(duì)SERS增強(qiáng)效果產(chǎn)生影響。圖10顯示了在同一批制備的AgNDs/SiNWs基底上滴加不同體積美洛昔康的拉曼光譜圖?？梢钥闯?，當(dāng)美洛昔康的體積逐漸增加到5μL以后，美洛昔康的主要特征峰峰形及其峰的強(qiáng)度幾乎不再發(fā)生變化。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用滴加體積5μL的檢測方法。

圖10 不同體積的美洛昔康溶液的拉曼光譜圖Fig.10 Raman spectra of meloxicam solution with different volume

3.4 檢測時(shí)間對(duì)SERS增強(qiáng)效果的影響

圖11 顯示了美洛昔康在AgNDs/SiNWs基底上進(jìn)行連續(xù)檢測的拉曼信號(hào)強(qiáng)度對(duì)比?？梢钥闯?，隨著檢測時(shí)間的延長，美洛昔康在AgNDs/SiNWs基底上的拉曼特征峰峰形及其強(qiáng)度幾乎保持不變。檢測時(shí)間影響SERS增強(qiáng)效果一方面在于其會(huì)影響待測分子與基底的結(jié)合強(qiáng)度，而實(shí)驗(yàn)中的溶劑均為乙腈，揮發(fā)性極好，少量的待測液滴加到基底上很快便會(huì)揮發(fā)從而只留下待測分子，所以檢測時(shí)間對(duì)其幾乎不產(chǎn)生影響。

圖11 不同檢測時(shí)間下美洛昔康的拉曼光譜圖Fig.11 Raman spectra of meloxicam detected under different adsorption time

3.5 最低檢測濃度以及線性相關(guān)性的確定

圖12 （a）顯示了不同質(zhì)量濃度的美洛昔康在AgNDs/SiNWs上的拉曼光譜圖?？梢钥闯觯S著美洛昔康的質(zhì)量濃度降低，其主要拉曼特征峰的強(qiáng)度也隨之下降，直到質(zhì)量濃度下降至0.1μg/mL，仍然可以大致分辨其拉曼特征峰，當(dāng)質(zhì)量濃度繼續(xù)下降至0.05μg/mL時(shí)，幾乎觀察不到美洛昔康主要的拉曼特征峰，所以該方法最低檢測質(zhì)量濃度為0.1μg/mL。并且在1 160 cm-1處，拉曼特征峰的強(qiáng)度（即峰的高度）與其質(zhì)量濃度在0.1~25μg/mL呈線性相關(guān)性（y=8.688 7x+89.945 9，R2=0.992 3），線性關(guān)系良好（見圖12（b））。

圖12 不同質(zhì)量濃度的美洛昔康拉曼光譜圖及線性關(guān)系圖Fig.12 Raman spectra and linear diagrams of meloxicam with different mass concentrations

3.6 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

為了驗(yàn)證該方法對(duì)實(shí)際樣品的檢測效果，對(duì)市售的抗風(fēng)濕類中成藥復(fù)方螞蟻活絡(luò)膠囊中的美洛昔康進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖13所示。空白樣品的拉曼光譜圖中沒有出現(xiàn)美洛昔康的特征峰，說明實(shí)驗(yàn)所用的抗風(fēng)濕類中成藥復(fù)方螞蟻活絡(luò)膠囊中美洛昔康質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于該方法的最低檢測值16.7μg/g；而3個(gè)加標(biāo)組（2、10、20μg/mL）的拉曼光譜圖中均出現(xiàn)美洛昔康的拉曼信號(hào)，以1 160 cm-1處拉曼強(qiáng)度與美洛昔康質(zhì)量濃度之間的線性關(guān)系為參考，加標(biāo)回收率為80.0%~112.4%，表明該方法具有實(shí)用價(jià)值。

圖13 美洛昔康固體、空白樣品以及加標(biāo)組的拉曼光譜圖（加標(biāo)質(zhì)量濃度分別為2、10、20μg/mL）Fig.13 Raman spectra of meloxicam in solid state,blank sample,and liquid state with concentration of 2,10,20μg/mL

4 結(jié) 語

采用金屬輔助的化學(xué)刻蝕原理制備AgNDs/SiNWs，調(diào)節(jié)刻蝕條件，對(duì)基底的SERS增強(qiáng)效果進(jìn)行了研究。具體內(nèi)容如下：通過改變刻蝕液種類、刻蝕方法、刻蝕時(shí)間以及鍍銀時(shí)間，制備出SERS增強(qiáng)效果更好的AgNDs/SiNWs。具體選擇HF-H2O2-H2O體系作為刻蝕液，采用兩步法，刻蝕時(shí)間25 min，鍍銀時(shí)間120 s的刻蝕條件。優(yōu)化采用該基底檢測美洛昔康的檢測條件，將5μL美洛昔康滴加在AgNDs/SiNWs上進(jìn)行拉曼檢測，最低檢測質(zhì)量濃度為0.1μg/mL。對(duì)市售抗風(fēng)濕類中成藥復(fù)方螞蟻活絡(luò)膠囊中的美洛昔康進(jìn)行檢測，并計(jì)算加標(biāo)回收率。實(shí)際樣品中美洛昔康質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于該方法最低檢測值16.7μg/g，且加標(biāo)回收率為80.0%~112.4%。該方法操作簡單快速，對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備要求低，為有關(guān)部門對(duì)抗風(fēng)濕類中成藥中的違法添加物質(zhì)美洛昔康的檢測提供一種新方法。