溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

司佩茹，周紅建，楊顯偉，莫 菲，姚俊營(yíng)，張繼業(yè)，李俊霞

（1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，陜西 西安 710061；2.遂成藥業(yè)股份有限公司，河南 新鄭 451150）

鹽酸達(dá)克羅寧，化學(xué)名為4-丁氧基-3-哌啶基苯丙酮鹽酸鹽。美國(guó)藥典第35 版已收錄本品，且該藥在我國(guó)臨床上已使用多年，尤其是鹽酸達(dá)克羅寧膠漿（商品名達(dá)己蘇）產(chǎn)品，內(nèi)窺鏡插管操作中能夠減輕檢查患者的不適感[1-4]。但在臨床應(yīng)用中偶見輕度頭痛、焦慮、冷熱感覺、麻木等不良反應(yīng)，如兒童、老人用藥過量，偶會(huì)發(fā)生驚厥。研究表明[5]，涂抹達(dá)克羅寧膠漿可有效緩解全麻患者氣管鏡術(shù)后咽喉部疼痛，降低拔管不良反應(yīng)發(fā)生率。利多卡因?yàn)榫植柯樽硭?，隨著劑量加大，麻醉作用或毒性增強(qiáng)。其膠漿劑常用于內(nèi)窺鏡檢查，因此有學(xué)者研究鹽酸達(dá)克羅寧膠漿和利多卡因膠漿局部麻醉效果。Sha J 等[6]比較了柔性纖維喉鏡檢查中鹽酸達(dá)克羅寧膠漿和鹽酸利多卡因膠漿的效果，該隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸達(dá)克羅寧膠漿更有效?？赡艿脑?yàn)辂}酸達(dá)克羅寧在喉部黏膜有持續(xù)的作用時(shí)間，膠漿中的羧甲基纖維素鈉增大了黏度，延長(zhǎng)了作用時(shí)間。但是相比于在一定溫度下溫敏型凝膠來說膠漿流動(dòng)性較高，口服后停留時(shí)間較短，且難以覆蓋整個(gè)腔道內(nèi)表面，致使麻醉效果降低。為保障良好的臨床應(yīng)用效果，需要相對(duì)較高的給藥劑量，增加了產(chǎn)生不良反應(yīng)的可能性[7，8]，同時(shí)鹽酸達(dá)克羅寧具有苦味，較高劑量會(huì)使患者產(chǎn)生不適感。溫敏型凝膠[9-11]是指在室溫下為流動(dòng)性良好的液體，而當(dāng)溫度升至體溫附近時(shí)，能夠迅速轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀態(tài)的一類制劑。根據(jù)目前臨床應(yīng)用的特點(diǎn)，將鹽酸達(dá)克羅寧制備成溫敏型凝膠產(chǎn)品，利用食管內(nèi)壁與外界溫度的顯著差異，能夠在同等給藥劑量下，增加鹽酸達(dá)克羅寧的滯留時(shí)間，由于流動(dòng)性減弱，相同給藥體積下，凝膠在食管壁的覆蓋面積也會(huì)相應(yīng)增加。因此在同等體積和同等給藥劑量下，能夠顯著提高局部麻醉的效果，進(jìn)而提高患者順應(yīng)性。因此，溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧凝膠的研發(fā)，可有效的提高患者術(shù)前準(zhǔn)備效率，可以緩解臨床消化道內(nèi)窺鏡檢查對(duì)患者帶來的刺激和不適感。本研究主要制備了一種溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液，分析其性質(zhì)并應(yīng)用所建立的分析方法對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)和穩(wěn)定性研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Alliance HPLC 高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)Waters 公司）；NDJ-9T 數(shù)字旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)（上海方瑞儀器有限公司）；Thermo Scientific 加熱磁力攪拌器（賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司）；梅特勒-托利多Five Easy Plus pH 計(jì)（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）；PL1502E 電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；ATX124 分析天平（日本島津公司）；DF-101S 集熱式恒溫加熱器（鄭州科豐儀器設(shè)備有限公司）；BIO-DL 移液器（Genex Beta 寶予德中國(guó)有限公司）；LHH-150GSP 藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；0.45 μm 過濾器，天津市科億隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 材料 鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品（100423-201102），中國(guó)食品藥品檢定研究院；鹽酸達(dá)克羅寧原料藥，河南精康制藥有限公司；達(dá)己蘇-鹽酸達(dá)克羅寧膠漿，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司；泊洛沙姆407，泊洛沙姆188，巴斯夫（中國(guó)）有限公司；苯甲酸鈉，上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司；乙腈、甲酸，色譜級(jí)，科密歐化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液的制備

2.1.1 處方 鹽酸達(dá)克羅寧10.0 g，泊洛沙姆188 5.0 g，泊洛沙姆407 25.0 g，苯甲酸鈉0.1 g，純化水加至1000 ml。

2.1.2 制備工藝 稱取10.0 g 鹽酸達(dá)克羅寧原料藥，溶于400 ml 純化水中，得鹽酸達(dá)克羅寧溶液；另取400 ml 純化水慢慢加入精密稱定好的5.0 g 泊洛沙姆188 25.0 g 泊洛沙姆407，置于4 ℃冰箱待溶脹完全后取出至環(huán)境溫度，再與鹽酸達(dá)克羅寧溶液混合均勻，加入0.1 g 苯甲酸鈉，加純化水至1000 ml，攪拌均勻即得。

2.2 含量測(cè)定方法[12-14]

2.2.1 溶液制備 對(duì)照品溶液：精密稱取鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品10.0 mg，置于10 ml 容量瓶中，0.01 mol/L鹽酸溶解，混勻后用0.45 μm 過濾器過濾，續(xù)濾液即為1.0 mg/ml 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。供試品溶液：精密稱取溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液1.0 g，置于100 ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻后用0.45 μm 過濾器過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。陽性對(duì)照溶液：精密稱取鹽酸達(dá)克羅寧膠漿1.0 g，置于100 ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻后用0.45 μm 過濾器過濾，取續(xù)濾液作為陽性對(duì)照溶液。陰性對(duì)照溶液：配制不含主藥的泊洛沙姆188-泊洛沙姆407 空白膠液，按上述供試品溶液配制方法操作，得陰性對(duì)照溶液。

2.2.2 色譜條件 Waters Alliance 2695 高效液相色譜系統(tǒng)配備四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱及二極管陣列檢測(cè)器；Titank Hilic 親水色譜柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：乙腈-1‰ 甲酸溶液=50∶50（V∶V）；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：282 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2.3 專屬性試驗(yàn) 將對(duì)照品溶液、供試品溶液、陽性對(duì)照溶液、陰性對(duì)照溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，觀察陰性對(duì)照溶液在鹽酸達(dá)克羅寧色譜峰附近有無雜質(zhì)峰干擾。

2.2.4 線性范圍 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別稀釋至濃度為10、30、60、90、120、150 μg/ml 的溶液，按2.2.2 項(xiàng)下色譜條件分析，以峰面積（y）對(duì)進(jìn)樣濃度（x）進(jìn)行回歸。

2.2.5 精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn) 分別配制低（80 μg/ml）、中（100 μg/ml）、高（120 μg/ml）3 個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度在同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5 次，測(cè)定日內(nèi)精密度；每個(gè)濃度分別于1、2、3、4、5、6 d 各進(jìn)樣5 次進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定日間精密度。

2.2.6 回收率試驗(yàn) 精密量取不含主藥的泊洛沙姆188-泊洛沙姆407 空白膠液1.0 g 于100 ml 容量瓶中，分別加入已知量的鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品溶液，加流動(dòng)相至刻度，得低（80 μg/ml）、中（100 μg/ml）、高（120 μg/ml）3 個(gè)濃度，每個(gè)濃度測(cè)定3 次。

2.3 穩(wěn)定性評(píng)價(jià) 放置在溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度（75±5）%的藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱下，試驗(yàn)前取樣1 次，在試驗(yàn)期間第1、2、3、6 個(gè)月末各取樣1 次，考察指標(biāo)分別為外觀、膠凝溫度、黏度、pH 值及含量，評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。

2.3.1 外觀 黑色背景下觀察凝膠狀態(tài)、色澤、光澤度，無色透明為正常狀態(tài)。

2.3.2 膠凝溫度測(cè)定 采用倒置法。將溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液加入西林瓶，插入溫度傳感器，然后置于25.0 ℃恒溫水浴鍋，再以每隔0.5～1.0 ℃/min 上升，每隔1 ℃后恒溫2 min，將西林瓶倒置，觀察凝膠5 s內(nèi)是否流動(dòng)；若流動(dòng)，繼續(xù)升溫，至液面流動(dòng)緩慢后每隔0.1 ℃后恒溫2 min，繼續(xù)倒置，直至不再流動(dòng)，若5 s 內(nèi)不再流動(dòng)，此時(shí)溫度即為膠凝溫度。每組平行測(cè)定3 次。

2.3.3 黏度測(cè)定 25 ℃時(shí)選用2 號(hào)轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速100 rpm，動(dòng)力黏度應(yīng)不大于200 mPa·s；35 ℃時(shí)選用4 號(hào)轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速50 rpm，動(dòng)力黏度應(yīng)不小于70 Pa·s。

2.3.4 pH 值測(cè)定 取凝膠樣品1.0 g，加純化水10 ml稀釋后測(cè)定，pH 值應(yīng)在4.5～6.5。

3 結(jié)果

3.1 含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證

3.1.1 專屬性 鹽酸達(dá)克羅寧在確定的色譜條件下峰型良好，基質(zhì)對(duì)鹽酸達(dá)克羅寧樣品測(cè)定沒有干擾，此方法專屬性良好，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 回歸方程為：y=33595 x-12228，相關(guān)系數(shù)：r=0.9999(n=3)，結(jié)果表明鹽酸達(dá)克羅寧在10～150 μg/ml 濃度范圍內(nèi)，濃度（x）與峰面積（y）呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，可依此進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定。

3.1.3 精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn) 3 個(gè)濃度的質(zhì)控樣品精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果見表1，測(cè)得鹽酸達(dá)克羅寧實(shí)際濃度與理論濃度偏差以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差皆滿足要求，說明本方法精密度及準(zhǔn)確度良好，滿足測(cè)定要求。

表1 精密度及準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果（n=5）

3.1.4 回收率試驗(yàn) 回收率試驗(yàn)結(jié)果見表2 所示，溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液樣品處理方法回收率滿足測(cè)定要求。

3.1.5 樣品含量測(cè)定 溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液樣品測(cè)得的平均含量為9.93 mg/ml，RSD=1.39%（n=6）。

3.2 穩(wěn)定性評(píng)價(jià) 試驗(yàn)前、試驗(yàn)第1、2、3 及第6 個(gè)月末取得的樣品考察項(xiàng)目：外觀、膠凝溫度、黏度、pH值及含量見表3。結(jié)果表明，溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度（75±5）%的條件下，6 個(gè)月內(nèi)溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液外觀及含量穩(wěn)定，膠凝溫度、黏度、pH 值稍有變化但都在要求范圍內(nèi)。

4 討論

鹽酸達(dá)克羅寧是一種起效快、毒性小的常用的局部麻醉藥，能阻斷各種神經(jīng)沖動(dòng)或刺激的傳導(dǎo)，抑制觸覺和痛覺。其毒性較利多卡因低，局部麻醉作用迅速且較持久，對(duì)皮膚、黏膜穿透力強(qiáng)，主要應(yīng)用于黏膜麻醉和皮膚麻醉，具有止痛、止癢、殺菌的作用。但是有刺激性，不宜作注射麻醉和浸潤(rùn)麻醉用，只供外用，僅有幾種傳統(tǒng)的外用制劑（如洗劑、乳膏劑等）和口含制劑（如膜劑、口服乳劑、膠漿劑等），多用于臨床上消化道內(nèi)鏡和纖維支氣管鏡檢查時(shí)黏膜表面麻醉及氣管插管操作時(shí)涂抹氣管導(dǎo)管即喉鏡、氣管鏡、胃腸鏡等檢查前的準(zhǔn)備，也用于局部止痛止癢、燒傷、潰瘍、褥瘡等。

鹽酸達(dá)克羅寧經(jīng)典的含量測(cè)定方法有銀量法、中和法。但是隨著制劑技術(shù)的不斷發(fā)展，制劑處方中輔料等成分也越來越復(fù)雜，用上述方法已無法排除制劑中其余成分對(duì)達(dá)克羅寧含量測(cè)定的干擾，且其操作不便、耗時(shí)、可重復(fù)性較差，所以新的檢測(cè)手段應(yīng)運(yùn)而生，如紫外分光光度法、高效液相色譜法，尤其是HPLC 法，該方法操作簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確度高、靈敏度高、選擇性高等特點(diǎn)，且改變流動(dòng)相極性使樣品各組分在最佳條件下能夠分離，可滿足鹽酸達(dá)克羅寧制劑質(zhì)量控制的要求。

本研究制備了溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液，建立了高相液相色譜法，該法操作簡(jiǎn)便、精密度及準(zhǔn)確度高，可進(jìn)行溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究。穩(wěn)定性加速試驗(yàn)證明，溫敏鹽酸達(dá)克羅寧凝膠外觀性狀沒有發(fā)生變化，主藥含量無明顯變化、pH 保持在要求范圍內(nèi)，并且溫敏特性也并未發(fā)生明顯改變，證明了其質(zhì)量穩(wěn)定性，具有成為臨床用藥的特性。

使用泊洛沙姆188 和泊洛沙姆407[15]作為膠液基質(zhì)安全性好，制成的鹽酸達(dá)克羅寧溫敏膠液比膠漿等制劑在腔道內(nèi)表面保留時(shí)間更長(zhǎng)，局部濃度高，麻醉效果明顯。在制備凝膠基質(zhì)時(shí)，應(yīng)將泊洛沙姆188 和泊洛沙姆407 均勻撒在水面，置于4 ℃冰箱使其充分溶脹后攪拌，防止產(chǎn)生不溶性膠團(tuán)。使用苯甲酸鈉為抑菌劑，成本較低，相同抑菌效果下成本低于山梨酸鉀；其次用量少，因此對(duì)人體毒副作用大幅降低；再者其抑菌范圍廣，且隨著酸度的增高其殺菌、抑菌效力增強(qiáng)，綜合考慮其更適合用于溫敏鹽酸達(dá)克羅寧膠液。鹽酸達(dá)克羅寧堿性條件下不穩(wěn)定，在配制供試品溶液時(shí)，溶解及稀釋應(yīng)在弱酸性環(huán)境中進(jìn)行。

本研究制備的溫敏型鹽酸達(dá)克羅寧膠液處方可進(jìn)一步優(yōu)化，加入黏度調(diào)節(jié)劑如羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素改善黏度增加鹽酸達(dá)克羅寧在腔道內(nèi)的滯留時(shí)間以提高麻醉效果，加入醫(yī)用消泡劑如聚氧乙烯聚氧丙烯季戊四醇醚去除腔道內(nèi)泡沫使得腔道檢查更加清晰，加入矯味劑如阿司帕坦、甜菊苷等改善口感提高患者順應(yīng)性，加入助溶劑如聚山梨酯-80（乙醇在制劑中長(zhǎng)期放置易于揮發(fā)）更好的增加鹽酸達(dá)克羅寧的溶解度。

綜上所述，本制劑制備工藝簡(jiǎn)單、所采用的輔料生物相容性良好，用于上消化道內(nèi)窺鏡檢查時(shí)的喉頭麻醉和潤(rùn)滑，在同等給藥體積條件下，滯留時(shí)間和覆蓋面積比大幅增加，具有藥效發(fā)揮快、麻醉效果強(qiáng)等特點(diǎn)，能提高患者的依從性，有望成為新型局部麻醉制劑。