檢測(cè)血清sIL-2R和HBME-1 mRNA的表達(dá)在鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)中的應(yīng)用價(jià)值

崔 含，張秀薇

（廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523000）

甲狀腺結(jié)節(jié)是臨床上發(fā)病率較高的一種內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。根據(jù)病情的性質(zhì)，可將此病分為惡性甲狀腺結(jié)節(jié)和良性甲狀腺結(jié)節(jié)兩種類(lèi)型[1]。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[2]，甲狀腺結(jié)節(jié)在我國(guó)成年人中的發(fā)病率高達(dá)32.4%，其中有5%～10%的患者病情為惡性。在臨床上，如何在無(wú)損傷的情況下對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)的性質(zhì)進(jìn)行鑒別一直是一個(gè)難題。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺結(jié)節(jié)的性質(zhì)與患者體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)的程度密切相關(guān)。在此研究的基礎(chǔ)上，臨床上曾通過(guò)檢測(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清白細(xì)胞介素-35（Interleukin-35,IL-35）和白細(xì)胞介素-17（Interleukin-17,IL-17）的水平來(lái)鑒別其病情的性質(zhì)，但此檢測(cè)方法的敏感性和特異性均不理想[3]。因此，臨床上開(kāi)始考慮通過(guò)檢測(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中溶性白介素-2 受體（oluble interleukin-2 receptor，SIL-2R）mRNA 和人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記 物-1(humanbonemarrowendothelialcell-1，HBME-1)mRNA的表達(dá)來(lái)鑒別其病情的性質(zhì)。本次研究主要探討檢測(cè)血清中SIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA 的表達(dá)在鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對(duì)象為2019 年6 月至2021 年1 月期間廣東省東莞市人民醫(yī)院收治的136 例甲狀腺結(jié)節(jié)患者及同期在該醫(yī)院接受體檢的50 例健康人作為研究對(duì)象。136 例甲狀腺結(jié)節(jié)患者的納入標(biāo)準(zhǔn)為：1）經(jīng)影像學(xué)檢查和病理檢查被確診患有甲狀腺結(jié)節(jié)。2）在參與本次研究前未進(jìn)行過(guò)任何針對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)的治療。3）未患有其他免疫系統(tǒng)疾病或血液系統(tǒng)疾病。4）精神狀態(tài)良好。5）臨床資料完整。6）簽署了自愿參加本次研究的知情同意書(shū)。其排除標(biāo)準(zhǔn)為：1）患有其他惡性腫瘤。2）在參與本次研究前1 個(gè)月內(nèi)使用過(guò)免疫抑制劑或抗生素。3）患有嚴(yán)重的心、肝、腎功能障礙或腦血管疾病。根據(jù)病理檢查的結(jié)果，將136 例甲狀腺結(jié)節(jié)患者分為惡性組（50 例）和良性組（86 例）。將50 例健康人作為對(duì)照組。三組研究對(duì)象的一般資料見(jiàn)表1。三組研究對(duì)象的一般資料相比，P＞0.05，存在可比性。本次研究符合《赫爾辛基宣言》中的相關(guān)內(nèi)容。

表1 三組研究對(duì)象一般資料的比較

1.2 方法

使用qPT-PCR 法檢測(cè)三組研究對(duì)象血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA 的表達(dá)情況。具體的檢測(cè)方法為：在患者入院次日的清晨，使用EDTA 抗凝管（生產(chǎn)廠家：北京科美信生物科技有限公司）采集其空腹?fàn)顟B(tài)下的外周肘靜脈血5 mL。對(duì)取得的血液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞分離處理，提取其中單個(gè)的核細(xì)胞。參考周靜等[4]使用的方法進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，向提取到的核細(xì)胞中滴入1 mL 的 TRLzol （生產(chǎn)廠家：武漢科昊佳生物科技有限公司），然后提取其中的mRNA。使用熒光側(cè)流免疫分析法檢測(cè)136 例甲狀腺結(jié)節(jié)患者IL-35和IL-17 的水平。具體的檢測(cè)方法為：在患者入院次日的清晨，抽取其空腹?fàn)顟B(tài)下的外周肘靜脈血5 mL。對(duì)取得的血液標(biāo)本進(jìn)行離心處理，提取其上層的血清。將取得的血清標(biāo)本放入血液生化分析儀中，檢測(cè)其中IL-35 和IL-17的水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較三組研究對(duì)象血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA 的表達(dá)情況，觀察惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中sIL-2R、HBME-1 mRNA 的表達(dá)與IL-17 水平、IL-35 水平、甲狀腺結(jié)節(jié)病灶個(gè)數(shù)、癌細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和病情分期的相關(guān)性，采用logistics 回歸模型檢測(cè)血清sIL-2R mRNA、HBME-1 mRNA 等指標(biāo)與惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，分類(lèi)變量采用χ2 檢驗(yàn)或Fisher 檢驗(yàn)。采用Pearson 對(duì)獲得數(shù)據(jù)的相關(guān)性進(jìn)行分析，采用多元回歸及l(fā)ogistic 回歸模型進(jìn)行回歸分析。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA表達(dá)情況的比較

惡性組患者血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA的表達(dá)顯著高于良性組患者和對(duì)照組健康人，P ＜0.05。良性組患者血清中sIL-2R mRNA、HBME-1 mRNA 的表達(dá)顯著高于對(duì)照組健康人，P＜0.05。詳見(jiàn)表2。

表2 三組研究對(duì)象血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA 表達(dá)情況的比較（U/mL，± s）

表2 三組研究對(duì)象血清中sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA 表達(dá)情況的比較（U/mL，± s）

惡性組（n=50） 2.35±0.52 2.43±0.41良性組（n=86） 1.67±0.32 1.72±0.31對(duì)照組（n=50） 1.01±0.27 1.03±0.21 t 值 7.65 5.56 P 值 0.00 0.00

2.2 惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中sIL-2R mRNA 等指標(biāo)的表達(dá)與IL-17 等指標(biāo)的相關(guān)性

惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中sIL-2R mRNA、HBME-1 mRNA 的表達(dá)與其血清中IL-17 的水平、IL-35 的水平、甲狀腺結(jié)節(jié)病灶的個(gè)數(shù)、癌細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況和病情的分期呈正相關(guān)性。詳見(jiàn)表3。

表3 惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中sIL-2R mRNA 等指標(biāo)的表達(dá)與IL-17 等指標(biāo)的相關(guān)性

2.3 惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者病情嚴(yán)重程度的logistics 回歸分析結(jié)果

血清sIL-2R mRNA、HBME-1 mRNA 呈高表達(dá)狀態(tài)是導(dǎo)致惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者病情加重的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。詳見(jiàn)表4。

表4 甲狀腺結(jié)節(jié)患者病情嚴(yán)重程度的logistics 回歸分析結(jié)果

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)有良性和惡性兩種類(lèi)型。其中良性甲狀腺結(jié)節(jié)主要包括甲狀腺瘤和甲狀腺囊腫，惡性甲狀腺結(jié)節(jié)多為甲狀腺癌。目前，臨床上多使用穿刺抽吸活檢法、甲狀腺彩超、血清促甲狀腺素水平監(jiān)測(cè)等方法鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的性質(zhì)。不過(guò)，上述檢查方法容易受到患者個(gè)體的差異、病灶的大小及部位等因素的影響，因此不適合在甲狀腺結(jié)節(jié)患者發(fā)病的早期使用。周偉清等[5-6]的研究發(fā)現(xiàn)，血清中的IL-35 和IL-17 與惡性甲狀腺結(jié)節(jié)的發(fā)生和發(fā)展存在密切的關(guān)系，因此提出可以通過(guò)檢測(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中IL-35 和IL-17 的水平來(lái)鑒別其病情的性質(zhì)。不過(guò)，大量臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該檢測(cè)方法的效果并不理想。

HBME-1 是一種與間皮瘤有關(guān)的抗體，其在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要的推動(dòng)作用。因此。HBME-1 mRNA 在良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者的血清中處于無(wú)表達(dá)或低表達(dá)的狀態(tài)，在惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者的血清中可出現(xiàn)高表達(dá)的狀態(tài)。許文瓊等[7]的研究結(jié)果顯示，HBME-1 mRNA 在甲狀腺乳頭癌患者血清中的陽(yáng)性率高達(dá)90.60%。張素芳等[8]的研究指出，可以通過(guò)檢測(cè)血清中HBME-1 mRNA 的表達(dá)來(lái)鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的性質(zhì)。SIL-2R 是一種重要的腫瘤標(biāo)志物。它是由腫瘤病灶分泌的，與腫瘤病灶的活動(dòng)存在密切的關(guān)系。大量的研究證實(shí)，SIL-2R 可通過(guò)抑制免疫細(xì)胞的活化使T 淋巴細(xì)胞進(jìn)入休眠期，從而為腫瘤細(xì)胞的惡性增值提供支持。因此，檢測(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中SIL-2R 的表達(dá)有助于鑒別其病情的性質(zhì)。

本次研究的結(jié)果顯示，惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中sIL-2R mRNA、HBME-1 mRNA 的表達(dá)與IL-17 的水平、IL-35 的水平、甲狀腺結(jié)節(jié)病灶的個(gè)數(shù)、癌細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況和病情的分期呈正相關(guān)性。這說(shuō)明，sIL-2R和HBME-1 在惡性甲狀腺結(jié)節(jié)病灶的增值、侵襲和浸潤(rùn)過(guò)程中都具有推動(dòng)的作用。這種推動(dòng)的作用與sIL-2R 和HBME-1 抑制了T 淋巴細(xì)胞的活化作用有關(guān)。

綜上所述，惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者血清中HBME-1 mRNA 和SIL-2R mRNA 的表達(dá)可明顯高于良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者和正常人，而且血清sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA呈高表達(dá)狀態(tài)是導(dǎo)致惡性甲狀腺結(jié)節(jié)患者病情加重的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，血清sIL-2R mRNA 和HBME-1 mRNA可作為臨床上鑒別診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)的重要指標(biāo)。