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    復(fù)合代糖的通便功效及其對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

    2021-07-27 04:07:26李國坤董嘉華肖健海白思曉陳驍熠蘇立杰
    現(xiàn)代食品科技 2021年7期
    關(guān)鍵詞:代糖菊粉墨汁

    李國坤,董嘉華,肖健海,白思曉,陳驍熠,蘇立杰

    (廣州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,廣東廣州 511436)

    慢性便秘(Chronic Constipation, CC)是臨床最常見的胃腸道病癥之一,表現(xiàn)為持續(xù)2周或更長時(shí)間排便困難,在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率為15%[1,2],我國的便秘發(fā)病率大概在3%~17%[3]。慢傳輸型便秘(Slow Transit Constipation,STC)是慢性便秘的一種主要類型,其特點(diǎn)是腸道運(yùn)輸時(shí)間顯著增加、腸道運(yùn)動(dòng)功能障礙[4]。大部分STC患者會(huì)有惡心、腹脹、食欲不振、情緒低落等癥狀,嚴(yán)重者可能還出現(xiàn)結(jié)腸癌、直腸癌等病癥[5]。導(dǎo)致STC的結(jié)腸動(dòng)力障礙的潛在機(jī)制尚不清楚。大量研究表明,STC患者會(huì)發(fā)生多種生理變化,包括結(jié)腸Cajal的間質(zhì)細(xì)胞(Interstitial cells of Cajals,ICC)減少、腸神經(jīng)系統(tǒng)異常、腸道平滑肌收縮功能異常等[6]?,F(xiàn)有的治療方法主要有瀉藥、抗炎藥等藥物治療和結(jié)腸切除術(shù)與回腸直腸吻合術(shù)等手術(shù)治療,但都有著嚴(yán)重的副作用和不良反應(yīng)[7]。

    腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng),在維持宿主的健康和生理功能方面起著關(guān)鍵作用[8]。根據(jù)近些年的研究,STC患者的腸道菌群生態(tài)系統(tǒng)與健康人群相比均出現(xiàn)不同程度的破壞。其中STC患者腸道菌群的組成相較于健康人群出現(xiàn)了較大的不同:糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、腸桿菌等出現(xiàn)了異常變化[9]。在動(dòng)物研究中發(fā)現(xiàn),可以通過增加腸道內(nèi)有益菌、減少腸道內(nèi)有害菌來改善STC小鼠的便秘情況[10-14]。這提示我們可以通過調(diào)節(jié)腸道菌群來干預(yù)STC[15,16]。

    代糖是低熱量的甜味劑,具有甜度高、熱量低、不易發(fā)生齲齒、安全性高等特性。研究不同代糖的功能特性是如今食品研究的熱點(diǎn)之一[17]。一種代糖常存在功能單一、口感不好等缺陷,因此市面上常采用多種代糖復(fù)合。本研究所采用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。研究表明,菊粉、羅漢果苷具有潤腸通便效果[18],菊粉可有效的改善腸道菌群紊亂[19-22],甜菊糖苷可促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌生長[23]。這提示復(fù)合代糖可能有通便作用和調(diào)節(jié)腸道菌群作用。所以本研究擬通過小鼠實(shí)驗(yàn)和菌群體外增殖實(shí)驗(yàn),探究該復(fù)合代糖是否能顯著改善小鼠的便秘情況和探究其對(duì)小鼠腸道菌群的影響。本研究探究復(fù)合代糖的通便效果及其對(duì)腸道菌群的作用,為STC患者的治療和功能型食品的開發(fā)提供了新的思路和方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    復(fù)合代糖,廣州萊品健康科技有限公司(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào):GB26687;生產(chǎn)許可證編號(hào):SC1244419014023);阿拉伯樹膠,天津市福晨化學(xué)試劑廠;酚酞,亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;羧甲基纖維素鈉,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;鹽酸洛哌丁胺膠囊,西安楊森制藥有限公司;氯化鈉,無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SPX-250B微機(jī)生化培養(yǎng)箱,上海悅豐儀器儀表有限公司;FE20pH計(jì),梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;T6773電子天平,普利賽斯科學(xué)儀器有限公司(瑞士);ZHJH-C1106B超凈工作臺(tái),上海智城分析儀器制造有限公司;MULTISKAN GO全自動(dòng)酶標(biāo)儀,廣東丹利科技有限公司;MLS-3750高壓蒸汽滅菌機(jī),日本三洋;純水機(jī),南京貝登醫(yī)療股份有限公司;DZF-6050真空干燥,上海-恒科學(xué)儀器有限公司。

    1.3 動(dòng)物及動(dòng)物糞便

    SPF級(jí)Balb/c小鼠,雄性,體質(zhì)量22±2 g,合格證號(hào):NO. 44007200049595,許可證號(hào):SCXK(粵)2013-0002,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

    1.4.1 試劑的配制

    取9 g氯化鈉粉末溶于1 L純水,高溫滅菌,即得0.9%的生理鹽水。

    取32 mg洛哌丁胺粉末溶于32 mL生理鹽水,配成1 mg/mL的洛哌丁胺溶液。

    取20 mg酚酞粉末溶于4 mL生理鹽水,配成5 mg/mL的酚酞溶液。

    分別取0.25 g、0.45 g、0.675 g、0.9 g、1.125 g復(fù)合代糖溶于3 mL生理鹽水中,分別配成0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL復(fù)合代糖溶液。分別作為小鼠G1、G2、G3、G4、G5組的干預(yù)試劑。

    取10 g阿拉伯樹膠溶于100 mL純水中,煮沸至透明后,加入5 g碳粉,混勻再煮沸即可得。

    1.4.2 小鼠灌胃實(shí)驗(yàn)

    小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后隨機(jī)分成8組,每組8只,分別為空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組和復(fù)合代糖干預(yù)G1組(0.75 g/kg·BW)、G2組(1.5 g/kg·BW)、G3組(2.25 g/kg·BW)、G4組(3 g/kg·BW)、G5組(3.75 g/kg·BW)。根據(jù)各組小鼠體重按量給藥,模型組、陽性對(duì)照組和G1組(0.75 g/kg·BW)、G2組(1.5 g/kg·BW)、G3組(2.25 g/kg·BW)、G4組(3 g/kg·BW)、G5組(3.75 g/kg·BW)分別給予10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液,空白對(duì)照組給予相應(yīng)的生理鹽水。0.5 h后,按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水,陽性對(duì)照組給予50 mg/kg·BW的酚酞溶液,復(fù)合代糖組給予相應(yīng)濃度的復(fù)合代糖。按時(shí)對(duì)其進(jìn)行14 d的灌胃實(shí)驗(yàn)。

    1.4.3 小鼠黑便實(shí)驗(yàn)

    灌胃實(shí)驗(yàn)進(jìn)行14 d后,各組小鼠禁食不禁水12 h。空白對(duì)照組灌胃給予生理鹽水,陽性對(duì)照組、模型組和復(fù)合代糖組灌胃給予10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液。在0.5 h后,按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水,陽性對(duì)照組給予50 mg/kg·BW的酚酞溶液,復(fù)合代糖組給予不同濃度的代糖溶液,并給予0.2 mL的墨汁。從每只小鼠的墨汁灌胃時(shí)間開始,記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、在6 h內(nèi)排糞便粒數(shù)和糞便重量。

    1.4.4 墨汁推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)

    黑便實(shí)驗(yàn)后,各組小鼠禁食不禁水12 h。陽性對(duì)照組、模型組和復(fù)合代糖組給予0.2 g/mL的鹽酸洛哌丁胺溶液,空白對(duì)照組給予蒸餾水灌胃。給予洛哌丁胺0.5 h后,按照體重給予空白對(duì)照組、模型組生理鹽水,陽性對(duì)照組給予3 mg/mL的酚酞溶液,復(fù)合代糖組給予不同濃度的代糖溶液,并給予0.2 mL的墨汁。在每只小鼠灌墨汁30 min后立即脫頸椎處死,用鑷子剪開腹腔,將幽門至盲腸的腸管剪取,置于潔凈實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,將其拉成直線測(cè)量長度,記為小腸總長度,將幽門至墨汁前沿處記為墨汁推進(jìn)長度。按下列公式計(jì)算墨汁推進(jìn)率:

    墨汁推進(jìn)率/%=墨汁推進(jìn)長度(cm)÷小腸總長度(cm)×100%

    1.5 菌群體外增殖實(shí)驗(yàn)方法

    1.5.1 培養(yǎng)基的制備

    分別用TPY瓊脂培養(yǎng)基、EBM培養(yǎng)基、BEA瓊脂培養(yǎng)基、BBL瓊脂培養(yǎng)基作為乳酸桿菌、腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌的選擇培養(yǎng)基。稱取復(fù)合代糖10 g于離心管中,加入10 mL水,混合均勻,紫外線照射30 min滅菌,即得1 g/mL的代糖溶液。用1 g/mL的代糖溶液和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基配制成0.075、0.15、0.225、0.3、0.375 g/mL的代糖培養(yǎng)基。

    1.5.2 試驗(yàn)用菌種分離

    準(zhǔn)備一個(gè)5 mL無菌EP管,使用無菌棉簽接取小鼠排出的新鮮糞便,轉(zhuǎn)入管內(nèi)稱重,記錄下糞便的質(zhì)量為m。加入99倍m的無菌生理鹽水,與小鼠的糞便混勻。得10-2糞便稀釋液,依次用生理鹽水稀釋成10-3、10-4和10-5。將濃度為10-3、10-4和10-5的糞便稀釋液涂布于四種不同的選擇培養(yǎng)基上,放入37 ℃的微生物培養(yǎng)箱里,培養(yǎng)的時(shí)間為24~48 h。參考《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第九版,在單菌落明顯以及菌落數(shù)在20~30 CFU的平板里進(jìn)行菌種鑒定和分離。將密度為108 CFU/mL的目標(biāo)菌接種在0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL的代糖培養(yǎng)基上,37 ℃下培養(yǎng)24 h。在600 nm的波長下,每2 h測(cè)定一次菌液的OD值。

    1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

    所有數(shù)據(jù)均獨(dú)立平行測(cè)定,數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示,采用SPSS 24.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,通過獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差檢驗(yàn)做顯著性分析,p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 復(fù)合代糖對(duì)小鼠體重的影響

    將實(shí)驗(yàn)前各組小鼠的體重與模型組進(jìn)行比較,如表1所示,沒有出現(xiàn)顯著差異(p>0.05),說明實(shí)驗(yàn)前小鼠的分組具有一定的科學(xué)合理性。比較實(shí)驗(yàn)后各組小鼠與空白組的體重,體重沒有出現(xiàn)顯著的差異(p>0.05),說明灌胃10 mg/kg·BW洛哌丁胺14 d對(duì)小鼠來說不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。姚一博等在洛哌丁胺給藥劑量和造模時(shí)間對(duì)小鼠慢傳輸型便秘模型建立的研究中,0.5 mg/kg·BW~50 mg/kg·BW給藥濃度和3 d~14 d的造模時(shí)間都未出現(xiàn)小鼠體重下降的情況[24]。這也與Ren X和Li C等研究中洛哌丁胺對(duì)體重?zé)o太大影響的結(jié)果研究一致[10,12]。

    表1 小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重Table 1 Weight of mice before and after the experiment

    世界衛(wèi)生組織建議蔗糖的攝入量應(yīng)該在總熱量的10%以內(nèi)[25],而美國醫(yī)學(xué)研究所建議蔗糖的能量占總熱量的比應(yīng)小于25%[26]。在美國2003~2006年的流行病學(xué)調(diào)查中,攝入蔗糖的占能比大于25%的人口達(dá)到了13%[27];在南非,攝入蔗糖的占能比大于10%的人口超過了10%[28]。在瑞典,攝入蔗糖的占能比大于15%的人群超過了10.56%[29]。過量蔗糖攝入可能會(huì)導(dǎo)致齲齒、肥胖、2型糖尿病和心血管疾病等健康問題[30,31],因此尋找能夠代替蔗糖的功能性代糖是當(dāng)今食品研究的熱點(diǎn)之一。但一種代糖常存在功能單一、口感不好等缺陷,因此常采用多種代糖復(fù)合。本研究所用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。赤蘚糖醇作為糖替代品廣泛用于各種食品和口腔護(hù)理產(chǎn)品中,具有抗糖尿病、降血糖作用、抗齲齒作用[32];菊粉是一種可溶性膳食纖維,具有促進(jìn)消化,促進(jìn)脂質(zhì)代謝和維持葡萄糖和胰島素水平功效[33];甜菊糖苷是從甜葉菊植物的葉中提取的一種天然甜味劑,在Ili? V的研究中,低劑量甜菊糖苷對(duì)糖尿病小鼠有著維持血糖的功效[34];羅漢果苷是從羅漢果果實(shí)中分離出的天然化合物,具有通便、降血糖、抗炎等功效[35]。由此可知,由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷混合的復(fù)合代糖可能會(huì)具有抗糖尿病、降血糖、通便、抗齲齒作用等功效。而在此次實(shí)驗(yàn)中,復(fù)合代糖干預(yù)組體重實(shí)驗(yàn)前后與空白組前后體重?zé)o顯著性差異(p>0.05),說明0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖在灌胃14 d不會(huì)顯著地引起小鼠的體重變化。

    2.2 小鼠便秘模型的建立結(jié)果

    將實(shí)驗(yàn)后空白對(duì)照組和模型組的各排便指標(biāo)進(jìn)行比較,如表2所示,模型組的首粒黑便時(shí)間(156.63 min)相對(duì)于空白對(duì)照組(63.75 min)顯著增加(p<0.05);6 h排便粒數(shù)(11.75 n)相對(duì)于空白對(duì)照組(21.63 n)顯著減少(p<0.05);6 h糞便重量(0.19 g)相對(duì)于空白對(duì)照組(0.29 g)顯著減少(p<0.05);墨汁推進(jìn)率(38.45%)相對(duì)于空白對(duì)照組(70.58%)顯著減少(p<0.05)。國內(nèi)外研究表明洛哌丁胺劑量在2 mg/kg·BW~20 mg/kg·BW、給藥時(shí)間在4 d~42 d均有成功建立小鼠便秘模型的案例[24,36]。根據(jù)小鼠便秘模型建立的判定:干預(yù)組首粒黑便時(shí)間、6 h排便粒數(shù)、6 h糞便重量、墨汁推進(jìn)率與空白組具有顯著性差異,可說明該小鼠便秘模型成功建立[37,38]。所以可判定此次用10 mg/kg·BW的鹽酸洛哌丁胺溶液灌胃14 d的小鼠便秘模型成功建立。

    表2 洛哌丁胺對(duì)小鼠各排便指標(biāo)的影響Table 2 Effects of loperamide on various defecation indexes in mice

    2.3 復(fù)合代糖對(duì)小鼠小腸墨汁推進(jìn)率、首次黑便時(shí)間、排便粒數(shù)、6 h糞便重量的影響

    比較各組與模型組的墨汁推進(jìn)率,如表3所示,五組復(fù)合代糖干預(yù)組的墨汁推進(jìn)率相對(duì)于模型組均顯著增加(p<0.05)。其中代糖G3組的墨汁推進(jìn)率相對(duì)于模型組(38.45%)增加了49.41%,其次是代糖G5組增加了48.47%、代糖G4組增加了47.77%。將模型組與陽性對(duì)照組、代糖各組的各排便指標(biāo)進(jìn)行比較,如表4所示,發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照組和代糖各組的首粒黑便時(shí)間相對(duì)于模型組均顯著減少,其中代糖G5組的首粒黑便時(shí)間相對(duì)于模型組(156.63 min)減少了67.25 min,其次是代糖G3組減少了57.50 min、代糖G4組減少了50.25 min。比較各組與模型組的6 h排便粒數(shù),發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照組和代糖各組的6 h排便粒數(shù)相對(duì)于模型組均顯著增加,其中代糖G2組的6 h排便粒數(shù)相對(duì)于模型組(11.75 n)增加了9.38 n,其次是代糖G5組增加了8.75 n、代糖G1組增加了8.38 n。比較各組與模型組的6 h糞便重量,發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照組和代糖各組的6 h糞便重量相對(duì)于模型組均顯著增加,其中代糖G5組的6 h糞便重量相對(duì)于模型組(0.19 g)增加了0.20 g,其次是代糖G1組增加了0.14 g、代糖G2組增加了0.12 g。

    表3 復(fù)合代糖對(duì)便秘小鼠小腸推進(jìn)的影響Table 3 Effects of complex substitute sugar on intestinal propulsion in constipated mice

    表4 復(fù)合代糖對(duì)小鼠各排便指標(biāo)的影響Table 4 Influence of complex substitute sugar on various defecation indexes in mice

    根據(jù)保健食品的通便功能檢驗(yàn)方法:6 h排便粒數(shù)和6 h糞便重量任一項(xiàng)結(jié)果顯著,同時(shí)墨汁推進(jìn)率和首粒黑便時(shí)間任一項(xiàng)結(jié)果顯著,可判定該受試樣品對(duì)便秘小鼠具有通便功效[39],所以可判定0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖可顯著的改善小鼠的便秘情況,不同劑量復(fù)合代糖的通便效果無顯著的線性關(guān)系。比較五組復(fù)合代糖干預(yù)組通便結(jié)果,發(fā)現(xiàn)代糖G5組(3.75 g/kg·BW)的通便功效最為顯著,相對(duì)于模型組,墨汁推進(jìn)率增加了48.47%、首粒黑便時(shí)間減少了67.25 min、6 h排便粒數(shù)增加了8.75 n、6 h糞便重量增加了0.20 g。

    菊粉是一種可溶性膳食纖維,在臨床研究中,每天食用12~20 g的菊粉可通過增加慢性便秘患者的排便頻率、降低糞便稠度有效地改善患者的病情[40-42],而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,1.0 g/kg·BW的菊粉未能有效地改善小鼠便秘情況,其陰性結(jié)果的原因可能是劑量太小[43]。羅漢果苷是羅漢果的主要成分,在陳瑤的研究中,300 mg/kg·BW、900 mg/kg·BW的羅漢果苷可通過減少首次排便時(shí)間和增加6 h糞便重量等來改善小鼠便秘情況[18],其機(jī)制可能是通過減少血液中LPS內(nèi)毒素的含量,從而修復(fù)腸屏障[44]。這提示我們?cè)搹?fù)合代糖中的菊粉和羅漢果苷可能是其通便作用的有效成分。

    2.4 復(fù)合代糖對(duì)小鼠有益菌(雙歧桿菌、乳酸桿菌)的影響

    將小鼠糞便中分離出的雙歧桿菌和乳酸桿菌接種在0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL復(fù)合代糖濃度的培養(yǎng)基,在600 nm的波長下OD值。由圖1可得,對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前8 h內(nèi)雙歧桿菌的數(shù)量相差不大。在8 h之后,0.375 g/mL代糖濃度組呈現(xiàn)近對(duì)數(shù)生長的趨勢(shì)。另外,在8 h后,5組不同濃度的復(fù)合代糖組雙歧桿菌數(shù)量均高于對(duì)照組,并有高濃度的復(fù)合代糖組雙歧桿菌數(shù)量高于低濃度復(fù)合代糖組的趨勢(shì)。由圖2可得,對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前6 h內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量相差不大,在6 h之后,0.375 g/mL和0.3 g/mL代糖濃度組均呈現(xiàn)近對(duì)數(shù)生長的趨勢(shì),且5組不同濃度的復(fù)合代糖組在6 h后乳酸桿菌的數(shù)量均高于對(duì)照組,并有高濃度的復(fù)合代糖組乳酸桿菌的數(shù)量高于低濃度復(fù)合代糖組的趨勢(shì)。這說明0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組均可促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌的增殖,相較于雙歧桿菌,復(fù)合代糖能更早地促進(jìn)乳酸桿菌的增殖。并在0.075 g/mL至0.375 g/mL濃度內(nèi),復(fù)合代糖濃度越大,促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖的趨勢(shì)越明顯。

    圖1 復(fù)合代糖對(duì)雙歧桿菌增殖的影響Fig.1 Effects of complex glucosubstitutes on the proliferation of bifidobacterial

    圖2 復(fù)合代糖對(duì)乳酸桿菌增殖的影響Fig.2 Effects of complex glucose on lactobacillus proliferation

    人類的腸道微生物群非常復(fù)雜,其數(shù)量是宿主細(xì)胞的10倍,可幫助腸道吸收、分解和代謝各類營養(yǎng)物質(zhì),是維持機(jī)體正常運(yùn)轉(zhuǎn)的重要因素[45]。其中雙歧桿菌、乳酸桿菌是人類和動(dòng)物胃腸道中重要的益生菌。目前研究認(rèn)為體內(nèi)雙歧桿菌與保護(hù)腸道粘膜、增加IgA數(shù)量、抑制腫瘤、改善便秘等密切相關(guān)[46]。而乳酸桿菌有著預(yù)防和改善便秘、治療腹瀉等功效,可通過飲食提高腸道內(nèi)數(shù)量[47]。飲食是影響結(jié)腸微生物群組成和代謝的主要因素,飲食中的營養(yǎng)素?cái)?shù)量、種類對(duì)腸道微生物群有很大影響[45]。菊粉是由重復(fù)果糖基單元組成的纖維,易被腸內(nèi)細(xì)菌發(fā)酵,并產(chǎn)生大量短鏈脂肪酸(SCFA)。在每日的飲食外補(bǔ)充5 g~20 g菊粉,可檢測(cè)到腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌的增加[48]。Wu X的研究表明,往小雞的飲食中添加100~3200 mg/kg的甜菊糖苷,可檢測(cè)到其腸道內(nèi)雙歧桿菌顯著增加,并有促進(jìn)乳酸桿菌生長的趨勢(shì)[49]。這提示我們?cè)搹?fù)合代糖中的菊粉和甜菊糖苷可能是其扶植作用的有效成分。

    2.5 復(fù)合代糖對(duì)小鼠有害菌(腸桿菌、腸球菌)的影響

    腸桿菌和腸球菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)一類常見的致病菌,具有生殖力強(qiáng)、分布廣等特點(diǎn),常引起各類感染,研究其抑制方法是當(dāng)今研究熱點(diǎn)之一[50,51]。將腸桿菌和腸球菌接種在5種不同復(fù)合代糖濃度的培養(yǎng)基,在600 nm的波長下OD值。由圖3可得,對(duì)照組和5組不同濃度的復(fù)合代糖組在前4 h內(nèi)腸桿菌的數(shù)量相差不大。在4 h之后,0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組腸桿菌的數(shù)量均低于對(duì)照組。由圖4可得,0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組腸球菌數(shù)量在24 h內(nèi)均低于對(duì)照組。

    圖3 復(fù)合代糖對(duì)腸桿菌增殖的影響Fig.3 Effects of complex glucosubstitutes on the proliferation of Enterobacteriaceae

    圖4 復(fù)合代糖對(duì)腸球菌增殖的影響Fig.4 Effects of complex glucosubstitutes on enterococcus proliferation

    腸桿菌適宜pH值在4.5~8.0之間,腸球菌喜在高鹽高堿的環(huán)境生長,而菊粉、甜菊糖苷在進(jìn)入腸道后會(huì)被益生菌分解,進(jìn)而降低腸道內(nèi)的pH值,從而抑制腸桿菌和腸球菌等有害菌的增殖。復(fù)合代糖對(duì)腸球菌的增殖抑制效果比腸桿菌明顯,腸桿菌數(shù)量在4 h后才逐漸呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì),這可能與腸桿菌不能在酸性環(huán)境中長時(shí)間存活,但可以在適度的酸性環(huán)境下生長有關(guān)。這與陳櫻萌研究中槲皮素酸奶對(duì)小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用基本一致[52]。上述結(jié)果說明0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖組均可抑制腸桿菌和腸球菌的增殖的增殖,而菊粉和甜菊糖苷可能是該復(fù)合代糖抑制其增殖作用的有效成分。

    3 結(jié)論

    本研究所采用的復(fù)合代糖由赤蘚糖醇、菊粉、甜菊糖苷、羅漢果苷組成。通過小鼠實(shí)驗(yàn),用洛哌丁胺建立便秘模型,酚酞和復(fù)合代糖進(jìn)行干預(yù),14 d后觀察墨汁推進(jìn)率、首粒黑便時(shí)間、6 h的排便粒數(shù)和6 h糞便重量等指標(biāo),評(píng)價(jià)復(fù)合代糖的通便效果。發(fā)現(xiàn)0.75 g/kg·BW、1.5 g/kg·BW、2.25 g/kg·BW、3 g/kg·BW、3.75 g/kg·BW劑量的復(fù)合代糖具有通便效果,可有效改善小鼠的便秘情況。其中3.75 g/kg·BW的通便功效最為顯著,相對(duì)于模型組,墨汁推進(jìn)率增加了48.47%、首粒黑便時(shí)間減少了67.25 min、6 h排便粒數(shù)增加了8.75 n、6 h糞便重量增加了0.20 g。而復(fù)合代糖中的菊粉和羅漢果苷可能是其通便作用的有效成分。另外,通過體外菌群增殖實(shí)驗(yàn),動(dòng)態(tài)觀察空白組和復(fù)合代糖干預(yù)組雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸桿菌、腸球菌的數(shù)量變化,發(fā)現(xiàn)0.075 g/mL、0.15 g/mL、0.225 g/mL、0.3 g/mL、0.375 g/mL濃度的復(fù)合代糖可促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖和抑制有害菌腸桿菌、腸球菌的增殖。并在0.075 g/mL至0.375 g/mL濃度內(nèi),復(fù)合代糖濃度越大,促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖的趨勢(shì)越明顯。復(fù)合代糖中的菊粉和甜菊糖苷可能是其促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖和抑制有害菌腸桿菌、腸球菌增殖的有效成分。綜上所述,該復(fù)合代糖口感良好,具有通便功效,可調(diào)節(jié)腸道菌群,作為一種新型甜味劑,應(yīng)用前景廣闊。

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