胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)在病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值

李延新 杜雄 劉永霞

【關(guān)鍵詞】胸腹水細(xì)胞;塊石蠟包埋;免疫組織化學(xué)技術(shù)

胸腹水也叫胸腹腔積液，是臨床上判斷癌癥的主要手段，臨床上嚴(yán)重的胸腹水會(huì)給患者的生命帶來巨大的威脅。進(jìn)行細(xì)胞脫落病檢是各醫(yī)院病理科的重點(diǎn)工作，胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查是臨床上常見的確定腫瘤性疾病的方法，比較細(xì)胞的大小、形狀、內(nèi)部構(gòu)造，可以進(jìn)行定性判斷，這種方法具有簡(jiǎn)單、快捷、痛苦小等特點(diǎn)。臨床上大多對(duì)細(xì)胞進(jìn)行直接離心涂片法做出判斷，但直接涂片法下的細(xì)胞較厚，不能呈現(xiàn)單一的細(xì)胞層，內(nèi)部構(gòu)造不容易觀察，細(xì)胞量較少，陽性的檢出率較低等，不利于臨床上分辨腫瘤細(xì)胞以及間皮細(xì)胞[1]。因此臨床上推出使用塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行切片染色，染色后的細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，切片的薄厚均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整等特點(diǎn)，可以反復(fù)切片，進(jìn)行染色后可以更準(zhǔn)確鑒定腫瘤細(xì)胞分類及原發(fā)地，本文就胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)在病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行如下報(bào)道。

1資料與方法

1.1一般資料

對(duì)在醫(yī)院進(jìn)行治療的患者送檢的胸腹水共60名，其中胸水46名，腹水16名。其中男性36名，女性24名。年齡分布在30歲～76歲，臨床上確診疾病22名，原因待查38名。

1.2試劑

所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB顯色劑均為美國(guó)DaKO試劑，使用DaKO全制動(dòng)免疫組化儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟操作。

1.3方法

①收集患者胸腹水：根據(jù)胸腹水的濃度進(jìn)行取用，取30～90毫升進(jìn)行離心，每分鐘2000轉(zhuǎn)，離心10分鐘。②將胸腹水進(jìn)行離心后，舍棄上清液，取出少量沉淀做細(xì)胞涂片。③取95%乙醇，加入其他沉淀中，加入沉淀至30毫升，震蕩2分鐘，再進(jìn)行離心，每分鐘2000轉(zhuǎn)，離心5分鐘。④離心后放棄上清液，加入15毫升15%福爾馬林固定。⑤靜置3～5小時(shí)，去除福爾馬林液體，用紙將沉淀和其他組織一起包裹，使用全自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水處理。⑥常規(guī)細(xì)胞切片使用蘇木精-伊紅染色后，在使用中性樹膠封固。⑦使用CK7、CAl25、CK20、CK、CDX-2、ME、Calretinin、Vi-mentin、TTF-1等抗體，使用細(xì)胞免疫進(jìn)行染色。胸水加做TTF-1，腹水加做CA125，與提供的對(duì)照物質(zhì)進(jìn)行陽性的比對(duì)，DAB顯色[2]。

2結(jié)果

在60名疑似惡性胸腹水標(biāo)本進(jìn)行塊石蠟包埋后，借助免疫組織化學(xué)染色，診斷結(jié)果如下：惡性胸腹水來源疑似乳腺癌2例，肺癌10例，腺癌12例，鱗癌4例，未發(fā)生原發(fā)性的惡性腫瘤16例，反應(yīng)性間皮細(xì)胞增生為26例。

與常規(guī)涂片方法比較，該方法制片色彩鮮艷，背景清晰，有利于收集到更多的細(xì)胞，且具有一定的組織結(jié)構(gòu)。因抗體不同，切片中所表達(dá)的陽性部位與組織學(xué)相同，所以陽性顆粒呈棕黃色。

3討論

胸腹水是臨床上最常見的特征之一，在臨床上常用于鑒別癌細(xì)胞的類型及來源，以及鑒別腫瘤細(xì)胞是否病變，還可以明確腫瘤的性質(zhì)。但胸腹水易受其他因素的影響，因此在鑒別過程中，會(huì)出現(xiàn)一系列的問題。常規(guī)涂片的缺點(diǎn)很多，如涂片的細(xì)胞數(shù)量較少，常常伴隨著紅細(xì)胞及其他炎癥滲出物及粘液，背景不夠清晰，在涂片時(shí)涂片較厚，多層細(xì)胞重疊，在診斷時(shí)，這些因素給觀察細(xì)胞帶來特別大的困擾。因此在臨床上，經(jīng)常使用福爾馬林浸泡固定胸腹水，可以將胸腹水像組織塊一樣脫水，之后再進(jìn)行包埋切片。

對(duì)胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：①操作簡(jiǎn)單，方法便捷，不需要過多的儀器。②在包埋切片中，細(xì)胞為單層切片，便于觀察。③可以搜集所有細(xì)胞，使碎小的組織也可以完整的切出，利于讀取切片。④將胸腹水制成蠟塊，方便保存，在臨床會(huì)診時(shí)可拿出反復(fù)使用，⑤可以將切片的免疫細(xì)胞進(jìn)行化學(xué)染色，對(duì)腫瘤的類型以及來源進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷，在鑒別時(shí)，可以清晰地觀察到陽性細(xì)胞，利于臨床上的鑒別。⑥通過生物分子標(biāo)記法對(duì)切片組織進(jìn)行標(biāo)記，可以對(duì)臨床上的治療進(jìn)行及時(shí)調(diào)整，也方便對(duì)疾病的確診以及分析。⑦將進(jìn)行切片的細(xì)胞塊進(jìn)行分子檢測(cè)，可以實(shí)施分子靶向治療，對(duì)組織細(xì)胞的耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)。

在炎性胸腹水增生或者退變的過程中，同皮細(xì)胞與某些惡性細(xì)胞從外觀或結(jié)構(gòu)上易混淆，因此臨床上對(duì)胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)，不僅滿足了診斷上的需求，還可以增加陽性細(xì)胞的檢出率：①Calretinin、vimentin、MC，此類陽性細(xì)胞為間皮增生細(xì)胞。②CK-7、TTF-1等陽性細(xì)胞多來源于肺。③CK7、CA125等陽性細(xì)胞來源于卵巢。④CDA2、CK20等陽性細(xì)胞多來源于胃腸道。但是陽性細(xì)胞為非特異性細(xì)胞，抗體的組織特異性也并非絕對(duì)，因此需要進(jìn)一步的觀察。

綜上所述，對(duì)胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)，加強(qiáng)臨床上對(duì)腫瘤的判斷，可以大范圍推廣。