新型冠狀病毒肺炎患者康復(fù)后血清抗體水平檢測(cè)結(jié)果分析

張智州 路華敏

湖北省襄陽(yáng)市襄州區(qū)人民醫(yī)院 441100

2019年12月底以來(lái)，一場(chǎng)突如其來(lái)的疫情逐漸在全球蔓延，引起這場(chǎng)疫情的罪魁禍?zhǔn)拙褪呛髞?lái)被命名為2019-nCoV的新型冠狀病毒。該病毒傳染性強(qiáng)，人群普遍易感，故感染者眾多，給人民的生命健康造成巨大威脅，給醫(yī)療單位和公共衛(wèi)生系統(tǒng)帶來(lái)巨大負(fù)擔(dān)。目前臨床上多用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)病毒RNA進(jìn)行診斷，檢測(cè)病毒特異性抗體進(jìn)行輔助診斷?？贵w檢測(cè)不僅可彌補(bǔ)RNA檢測(cè)易造成假陰性的缺陷，還可對(duì)病情進(jìn)行監(jiān)測(cè)，對(duì)患者的恢復(fù)情況進(jìn)行預(yù)判，對(duì)臨床診療具有一定的指導(dǎo)作用。本研究利用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)新型冠狀病毒肺炎康復(fù)者體內(nèi)的特異性IgG、IgM抗體，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)抗體的變化，以了解新型冠狀病毒肺炎患者體內(nèi)特異性抗體的濃度及其變化規(guī)律，以期為臨床診療和流行病學(xué)調(diào)查提供幫助。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選取2020年1—2月在本院住院的新型冠狀病毒肺炎患者，所有患者經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)，新型冠狀病毒RNA均為陽(yáng)性，并符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案》(試行第六版)的診斷要求，共105例，其中男54例，女51例，年齡9～88歲。根據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案》臨床分型，將上述患者分為4型，即普通型12例，輕型85例，重型6例，危重型2例。因重型和危重型患者太少，將此二型患者合并為一組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 儀器試劑 深圳亞輝龍生物科技股份有限公司生產(chǎn)的iFlash3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑。

1.3 抗體檢測(cè) 依患者發(fā)病時(shí)間計(jì)算，分別于患者發(fā)病后2、3、4、6個(gè)月采集血液標(biāo)本，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中的新型冠狀病毒特異性IgG和IgM抗體。當(dāng)樣本中抗體濃度>10.0AU/ml時(shí)，為有反應(yīng)性，判為陽(yáng)性，反之為無(wú)反應(yīng)性，判為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)用SPSSAU分析，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者各階段特異性抗體陽(yáng)性率比較 三組患者IgM抗體陽(yáng)性率較低，至3個(gè)月時(shí)，只有極少數(shù)患者呈陽(yáng)性反應(yīng)，而IgG抗體陽(yáng)性率高，至4個(gè)月時(shí)，各組陽(yáng)性率仍高達(dá)87%以上，但到6個(gè)月時(shí)，也只有個(gè)別患者呈陽(yáng)性。三組患者各階段特異性抗體陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 三組患者各階段特異性抗體陽(yáng)性率比較(%)

2.2 三組患者各階段特異性抗體濃度變化比較 大部分患者在發(fā)病后，都產(chǎn)生針對(duì)病毒的特異性抗體，IgM消失快，濃度逐漸下降，IgG抗體在較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)高濃度狀態(tài)，至6個(gè)月左右，抗體基本消失，三組患者各階段特異性抗體濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 三組患者各階段特異性抗體濃度變化比較

3 討論

病毒侵犯機(jī)體后，一般經(jīng)過(guò)3～7d的潛伏期后出現(xiàn)臨床癥狀，在這個(gè)過(guò)程中，病原體刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生針對(duì)病原體的特異性抗體。在這一過(guò)程中產(chǎn)生最早的是IgM類抗體，一經(jīng)感染，迅速產(chǎn)生，且消失較快，因此IgM抗體可作為近期感染的標(biāo)志。稍晚產(chǎn)生的是IgG抗體，由于IgG抗體的產(chǎn)生晚于IgM抗體，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，因此，IgG抗體一般為感染中晚期或是恢復(fù)期的標(biāo)志。新型冠狀病毒是冠狀病毒家族中的一員，現(xiàn)已證實(shí)，其抗體產(chǎn)生也遵循這一規(guī)律[1]。

目前臨床多采用RT-PCR方法檢測(cè)RNA做為診斷感染的依據(jù)，但是很多因素[2-3]影響核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率，為了彌補(bǔ)這一缺陷，國(guó)家衛(wèi)健委《新型冠狀病毒肺炎防控方案(試行第七版)》[4]將特異性IgM、IgG抗體作為診斷的輔助指標(biāo)，李萍[5]、徐萬(wàn)洲[6]等對(duì)抗體的特異度和敏感度做了研究，其敏感度和特異度均較高，可作為新型冠狀病毒感染的有效篩查和診斷指標(biāo)。

一般認(rèn)為，隨著病情的好轉(zhuǎn)，IgM逐漸降低直至消失，而IgG抗體濃度會(huì)持續(xù)較長(zhǎng)一段時(shí)間，若恢復(fù)期IgG由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或是濃度較急性期升高4倍以上，可作為復(fù)發(fā)的標(biāo)志。因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清抗體濃度，明確其變化規(guī)律，對(duì)于明確治療效果、評(píng)估患者狀態(tài)及判斷病情轉(zhuǎn)歸具有重要意義，對(duì)于流行病學(xué)調(diào)查也具有重要的意義。

張兵華、謝毓濱等對(duì)新型冠狀病毒肺炎康復(fù)者較短時(shí)期內(nèi)抗體變化做了研究[7-8]。本研究動(dòng)態(tài)觀察新型冠狀病毒肺炎康復(fù)者血清中的抗體情況，分別于患者發(fā)病后2、3、4、6個(gè)月采集血清標(biāo)本檢測(cè)抗體，以觀察較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)抗體的變化。研究發(fā)現(xiàn)，2個(gè)月時(shí)，IgM抗體陽(yáng)性率已較低，三組的陽(yáng)性率分別是25.00%、29.41%、62.50%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3個(gè)月時(shí)，只有極少數(shù)病例呈陽(yáng)性。IgG抗體陽(yáng)性率較高，至4個(gè)月時(shí)，三組的陽(yáng)性率仍高達(dá)91.67%、87.06%、100.00%，但到6個(gè)月時(shí)，只有個(gè)別病例呈陽(yáng)性。這也證實(shí)了IgM和IgG的變化規(guī)律，即隨著病情的好轉(zhuǎn)，IgM快速消失，而IgG持續(xù)較長(zhǎng)一段時(shí)間。對(duì)于那些抗體陰性者，可能是因?yàn)闄z測(cè)時(shí)，已過(guò)了高峰期，抗體濃度下降所致，也可能是有些患者免疫功能較弱，而沒(méi)有產(chǎn)生較高濃度的抗體所致。另外，也可能與試劑本身有關(guān)，李萍、徐萬(wàn)洲等的研究顯示[5-6]，IgM和IgG抗體檢測(cè)的靈敏度分別只能達(dá)到70%左右和90%左右，故而有些患者雖然產(chǎn)生了抗體，但由于試劑靶抗原選擇的原因，而檢測(cè)不出，造成假陰性。

本次研究發(fā)現(xiàn)，大部分患者在發(fā)病后，都產(chǎn)生針對(duì)病毒的特異性抗體，一般IgG濃度高于IgM濃度，但有極少數(shù)患者IgG濃度小于IgM濃度的現(xiàn)象。2個(gè)月時(shí)，IgM一般表現(xiàn)為低濃度，但有2例輕型患者，IgM濃度仍異常增高，分別為495.45AU/ml和365.76AU/ml。IgG在較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)維持較高水平，下降緩慢，至4個(gè)月時(shí)仍有較高濃度，但到6個(gè)月時(shí)，濃度多已降到陰性值以下。張兵華等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，IgG的峰值可能在40d左右，本研究的數(shù)據(jù)可能已過(guò)了峰值，處于緩慢下降期。

對(duì)SARS康復(fù)者的研究表明，重癥患者抗體濃度高于輕癥患者[9]，有學(xué)者[10]推測(cè)，新冠肺炎患者可能也是這樣。本研究發(fā)現(xiàn)，重型和危重型組在各階段的陽(yáng)性率和濃度多高于輕型和普通型組，但經(jīng)檢驗(yàn)各組間比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。每組數(shù)值有高有低。個(gè)體差異較大，可能與個(gè)體的免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱有關(guān)，有人反應(yīng)強(qiáng)，產(chǎn)生的抗體濃度高，反之則低。

通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn)，新型冠狀病毒肺炎患者康復(fù)后，大多能產(chǎn)生針對(duì)病毒的特異性抗體，但并不能產(chǎn)生持久的免疫力，IgM抗體可能在2～3個(gè)月后消失，而IgG抗體在半年左右消失。

本次研究不足之處在于：病例數(shù)太少，特別是重型和危重型患者太少，結(jié)果可能存在片面性；早期沒(méi)有監(jiān)測(cè)抗體，未能監(jiān)測(cè)到抗體達(dá)到峰值的時(shí)間；以及監(jiān)測(cè)間隔時(shí)間太長(zhǎng)，未能明確抗體轉(zhuǎn)陰的具體時(shí)間。