高效液相色譜法對食用油中塑化劑含量的測定

在過去很長一段時間內(nèi)，人們對塑化劑都缺乏正確認(rèn)識，以為塑化劑并不具備很強(qiáng)的毒性，因此在實際開展工業(yè)生產(chǎn)中并沒有有效加以限制。但是在最新的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，PAEs在人體中能表現(xiàn)出雌激素的特征，能夠起到抗雄激素生物效應(yīng)，進(jìn)入到人體或動物體內(nèi)后會影響到生物體的內(nèi)分泌功能，造成生物體內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂，如果在人體內(nèi)長期積累，會引起人體畸形甚至引發(fā)癌癥。

作為人們?nèi)粘Ｉ畹谋匦杵?，食用油中是否存在塑化劑污染一直是人們關(guān)注的焦點，目前已經(jīng)有部分單位針對食用油中塑化劑的含量采取國標(biāo)法開展監(jiān)測工作。本文在實驗測量中主要借助甲醇離心萃取、羅里硅土層析柱富集、高效液相色譜檢測的方法對食用油中鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）和鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）含量進(jìn)行具體檢測，目的在于摸索一套成本更低、操作更簡單、適用范圍更廣的塑化劑監(jiān)測方法，切實加強(qiáng)食用油中塑化劑監(jiān)測水平。

一、材料與方法

1.材料與試劑。自超市購買的塑料桶裝大豆食用油；由省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究員提供的純度超過99.0%的鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）和鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）標(biāo)準(zhǔn)品；購于天津康科德科技有限公司的甲醇（色譜純）、無水硫酸鈉、正己烷（已經(jīng)進(jìn)行重蒸處理）、丙酮（均為分析純）；產(chǎn)自德國的德弗羅里硅土，已經(jīng)在630℃高溫下灼燒4-6小時活化處理；試驗用水（超純水）；純度超過99.99%的氮氣；規(guī)格為0.45μm的有機(jī)相微孔濾膜；已經(jīng)在450℃中經(jīng)過4-6小時灼燒后去除結(jié)晶水的無水硫酸鈉。

2.儀器與設(shè)備。產(chǎn)自日本島津公司的配備有SPD-20A型紫外檢測器和工作站的LC一20A高效液相色譜儀；產(chǎn)自美國1hemmFisher公司的DsQⅡ氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀；產(chǎn)自梅特勒一托利多有限公司的A1204分析天平；產(chǎn)自江蘇江東精密儀器有限公司的xw-80A渦旋混合器；產(chǎn)自鹽城凱特儀器有限公司的rGl8G高速離心機(jī)；產(chǎn)自上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司的KuDOS—sl<5200IHC超聲波清洗器；產(chǎn)自上海力新儀器有限公司的m-20-3超純水制備儀；產(chǎn)自上海濟(jì)成分析儀器有限公司的氮氣吹干儀。

3.方法。（1）配制溶液。單標(biāo)儲備液的配置：用量筒準(zhǔn)確量取所需要的標(biāo)準(zhǔn)品，確保精準(zhǔn)到0.01mL，添加適量甲醛，在充分溶解后得到標(biāo)準(zhǔn)儲備液，濃度為20mg/L，將其儲存在4℃的冰箱中留作備用。

混標(biāo)儲備液的配置：用量筒精準(zhǔn)量取所需要的標(biāo)準(zhǔn)品，添加不同劑量的甲醛溶解，濃度分別為5mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，冷藏在4℃冰箱備用。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。用色譜儀分析用量筒分別量取的20mL濃度不同的五種混合標(biāo)準(zhǔn)液，建立坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量濃度作為x軸，以其產(chǎn)生的峰面積作為Y軸，繪制出DEP和DBP的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相關(guān)系數(shù)。

（3）制備弗羅里硅土富集柱。借助玻璃棒將少量脫脂棉注入300mm×10mm的玻璃層析柱，并壓實，再依次將0.59mL無水硫酸鈉、3.59mL弗羅里硅土和0.59mL無水硫酸鈉添加到玻璃層析柱，利用洗耳球敲擊層析柱，確保填裝均勻，再加入10mL含5%丙酮的正己烷溶液淋洗吸附劑，去除其中存在的雜質(zhì)，最后加入30mL的正己烷溶劑進(jìn)行淋洗備用。

（4）樣品前處理。用量筒精準(zhǔn)量取l0mL的樣品食用油，將食用油注入10mL離心管后，再加入甲醇5mL作為提取溶劑，將離心管旋渦式旋轉(zhuǎn)確保充分混合后以不低于7000r/min離心力進(jìn)行超聲處理，吸取上清液注入試管。以上述操作重復(fù)提取離心管中殘存物質(zhì)，將提取的上清液進(jìn)行合并，再借助弗羅里硅土制作的固相萃取柱對上清液進(jìn)行富集凈化，再用量筒量取30mL的正己烷溶液進(jìn)行淋洗處理，去掉淋洗液后注入20%的丙酮正己烷混合溶液20mL洗脫柱子，收集洗脫液后置于55℃溫度下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到20mL，再借助氮氣干燥，諸如4mL甲醇定容。

（5）測定食用油中鄰苯二甲酸酯含量。平行5次測定樣品食用油，結(jié)合繪制的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖對樣品中DEP和DBP的含量進(jìn)行定量與定性分析。

二、實驗結(jié)果分析

1.提取劑及提取次數(shù)的選擇。通常借助石油醚、正己烷、甲醇或者乙腈作為溶劑來萃取食用油中含有的塑化劑，在反復(fù)試驗中可以發(fā)現(xiàn)，甲醇和乙腈的萃取效果更好，在對比甲醇與乙腈價格基礎(chǔ)上，考慮到二者萃取效果區(qū)別不大，最終選擇甲醇作為萃取溶劑。用3mL、5mL、10mL的甲醇分別提取1.0mL食用油樣品，在凈化處理后采用高效液相色譜檢測。分析檢測結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，10mL甲醇的提取結(jié)果更好，在綜合考慮后續(xù)檢測需要基礎(chǔ)上，確定5mL甲醇作為萃取劑的用量，萃取次數(shù)為2次。

2.混合標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限。配制好濃度分別為5mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按國家標(biāo)準(zhǔn)色譜條件進(jìn)行分析，平行檢測3次，繪制Y=峰面積、X=質(zhì)量濃度的線性圖表，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性圖標(biāo)的方程式，得到DEP和DBP的最低檢出限、回歸方程、相關(guān)系數(shù)和最低檢出限。實驗中結(jié)果顯示，DEP的檢出限為0.1mg/L，DBP的檢出限為0.05mg/L，比《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》中所規(guī)定的1.5mg/L的國家標(biāo)準(zhǔn)要低，能夠有效滿足檢測食用油中塑化劑含量的檢測需求。

3.精密度測定和回收率。借助甲醛完成測定后，再就樣品食用油中的DEP與DBP含量進(jìn)行精密檢測。選取1mL的樣品食用油，各準(zhǔn)備好3份，分別添加DEP和DBP，其中DEP的添加量分別為為5mg/L、10mg/L和20mg/L；DBP的添加量分別為2mg/L、4mg/L和8mg/L，事先預(yù)留好兩份空白樣品作為對照組。六次測定后進(jìn)行計算，可以發(fā)現(xiàn)樣品食用油中的DEP和DBP都保持著82.2%-90.4%的回收率，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也保持在0.14%左右，可以得出結(jié)論，實驗的準(zhǔn)確度與精密度都很高。

4.測定食用油中DBP和DEP含量?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液在高效液相色譜中不同物質(zhì)的停留時間是不一樣的，DEP能夠停留2.7分鐘，DBP的停留時間則是5.8分鐘。在前面開展的實驗中可以發(fā)現(xiàn)，配置的樣品食用油中同時包含DEP和DBP兩種不同的物質(zhì)，可以借助外表計算法進(jìn)行回歸方程代入：

DEP：y=0.514x+0.512

DBP：y=0.33x+0.268

通過計算可以得出結(jié)果：樣本食用油當(dāng)中DEP含量為8.01mL/L，DBP的含量為0.48mL/L。在與國家頒布的標(biāo)準(zhǔn)對比后可以發(fā)現(xiàn)，這款食用油塑化劑含量超標(biāo)，存在塑化劑污染問題。

三、小結(jié)

經(jīng)過上述實驗檢測分析可以發(fā)現(xiàn)，在檢驗食用油中塑化劑含量時，需要在借助高效液相色譜法測定鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二丁酯的含量基礎(chǔ)上，與國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行數(shù)據(jù)對比，進(jìn)而判斷食用油是否存在塑化劑污染情況。

作者簡介：黃軒（1992.10-），男，本科，質(zhì)量助理工程師；研究方向：質(zhì)量管理及食品安全檢測。