植物乳桿菌Zhang-LL及其培養(yǎng)上清液對(duì)酒精損傷干預(yù)效果評(píng)價(jià)

馬京升，張紅星，謝遠(yuǎn)紅，金君華

當(dāng)今世界酒文化盛行，飲酒者與飲酒量日益增加，慢性酒精損傷作為一種常見(jiàn)的酒精相關(guān)疾病，主要包括酒精性肝損傷[1]，酒精性神經(jīng)損傷[2]，酒精性胃損傷[3]，酒精性生殖系統(tǒng)損傷[4]，酒精性骨髓及造血系統(tǒng)損傷[5]，酒精性免疫系統(tǒng)損傷，酒精性致癌[6]，對(duì)其治療方面研究很有必要。慢性酒精損傷的成因比較復(fù)雜，盡管大家一直關(guān)注這方面的研究，但其機(jī)理尚未明確[7-8]。近些年來(lái)，不少益生菌表現(xiàn)出對(duì)慢性酒精損傷的治療效果，特別是在胃損傷、肝損傷、腸道損傷方面的治療效果良好，且尚未報(bào)道副作用，受到學(xué)術(shù)界廣泛關(guān)注[8-9]。有確切證據(jù)表明，酒精性肝病與腸上皮頂端交界復(fù)合體被破壞，黏膜屏障功能障礙以及腸道內(nèi)脂多糖或內(nèi)毒素進(jìn)入體循環(huán)有關(guān)[10]。研究表明植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌CCFM1107、發(fā)酵乳桿菌ZYL0401、發(fā)酵乳桿菌LA12、長(zhǎng)雙歧桿菌LC67、長(zhǎng)雙歧桿菌LC27 及長(zhǎng)雙歧桿菌LC67 和LC27 混合物可以通過(guò)降低腸道通透性，增強(qiáng)腸道黏膜屏障功能等途徑來(lái)減輕酒精誘導(dǎo)的腸道上皮損傷及肝臟損傷，然而益生菌對(duì)于酒精損傷的干預(yù)效果及其作用途徑具有菌株特異性[8，11-14]。植物乳桿菌Zhang-LL 具有良好的胃腸道耐受性，易定植于生物胃腸道內(nèi)[15-16]。使用植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的慢性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠進(jìn)行干涉，發(fā)現(xiàn)其可有效改善大鼠的體態(tài)、腸道形態(tài)、通透性、菌群結(jié)構(gòu)以及免疫能力[17]。本研究將低、高劑量植物乳桿菌Zhang-LL 活細(xì)胞及無(wú)細(xì)胞的發(fā)酵上清液與酒精同時(shí)灌胃給ICR 小鼠，在12 周的試驗(yàn)周期結(jié)束后評(píng)價(jià)植物乳桿菌Zhang-LL 在酒精損傷對(duì)機(jī)體負(fù)面影響方面的緩解作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)原材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)菌株 本試驗(yàn)使用的植物乳桿菌Zhang-LL（Lactobacillus plantarum Zhang-LL，CGMCC 6939），北京農(nóng)學(xué)院功能乳品實(shí)驗(yàn)室保藏菌種。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)ICR 小鼠90 只，體重（34±2）g，7 周齡，雄性。小鼠集中在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房喂養(yǎng)，濕度：50%～60%，溫度：20～23 ℃，標(biāo)準(zhǔn)配方桿狀飼料喂養(yǎng)，墊料為玉米芯墊料或木須墊料，完全自由進(jìn)水進(jìn)食。

1.1.3 溶液的配制[18]KHBB 緩沖液：8.4 mmol/L HEPES 緩沖液，119 mmol/L NaCl，4.7 mmol/L KCl，1.2 mmol/L MgSO4，1.2 mmol/L KH2PO4，25 mmol/L NaHCO3，2.5 mmol/L CaCl2，11 mmol/L 葡萄糖pH 7.4。

FITC-dextran 溶液：用1 mL KHBB 溶液溶解40 mg 異硫氰酸熒光素（FITC，F(xiàn)D-4，Sigma），配制成40 mg/mL 的溶液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 植物乳桿菌的活化及傳代處理 活化：取凍存植物乳桿菌Zhang-LL 保菌液，在液體MRS培養(yǎng)基試管內(nèi)，37 ℃條件下培養(yǎng)活化，并傳代2次，取3 代在4 ℃下6 000 r/min 離心10 min，保留上清液。用滅菌的生理鹽水配制濃度為1.0×108CFU/mL 和1.0×1010CFU/mL 的菌體活細(xì)胞懸液，將離心所得上清液通過(guò)0.22 μm 無(wú)菌濾膜處理，用于灌胃。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理 ICR 小鼠1 籠5 只分籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，定時(shí)更換墊料。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，根據(jù)體重隨機(jī)分成5 組，每組15 只小鼠。分別為空白對(duì)照組、模型組、植物乳桿菌Zhang-LL 低劑量組、植物乳桿菌Zhang-LL 高劑量組、植物乳桿菌Zhang-LL 上清組。

表1 灌喂方法Table 1 The method of feeding

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的檢測(cè)指標(biāo)

1）小鼠體重及一般情況 試驗(yàn)期間，定時(shí)更換墊料，保持飲食飲水條件正常。每天稱(chēng)重飼料剩余質(zhì)量、飼料添加質(zhì)量、剩余水量、添加水量。通過(guò)這些數(shù)據(jù)計(jì)算出每籠小鼠日進(jìn)食量、攝水量，觀察小鼠外觀、行為、傷亡等情況，每周定期集中給每只小鼠稱(chēng)重1 次。

2）小鼠血清及器官采取 血清：12 周末小鼠禁食不禁水12 h 后稱(chēng)重并眼球采血，室溫凝固1 h 后3 500 r/min，15 min 離心后置于-20～-70 ℃低溫貯藏待用。使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定小鼠血清的總甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）指標(biāo)，使用試劑盒測(cè)定天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（南京建成，貨號(hào)C010-2-1）、小鼠血清谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）（南京建成，貨號(hào)C009-2-1）。

臟器：斷頸處死小鼠后立刻采集小腸、肝臟等，4 ℃生理鹽水漂洗后濾紙拭干，稱(chēng)重器官后液氮保存。臟器指數(shù)的計(jì)算方法為內(nèi)臟質(zhì)量/大鼠體重×100%。

3）小鼠肝勻漿制備 解剖后采集小鼠肝臟右葉組織，鹽水漂洗濾紙擦干稱(chēng)重后剪成碎塊，加入9 倍組織體積的生理鹽水（4 ℃），并于玻璃勻漿管勻漿化處理，制備成10%肝勻漿，3 000 g，離心15 min，留上清液待用。肝勻漿-20～-70 ℃低溫保藏[19]。

4）小鼠肝臟勻漿指標(biāo)的測(cè)定 肝臟勻漿中AST 和ALT 活性、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA） 含量及還原性谷胱甘肽（GSH）含量的測(cè)定，使用南京建成生物研究所相應(yīng)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

5）肝臟病理切片制作 將肝臟組織于10%的中性福爾馬林溶液中固定4～6 h；再用85%乙醇溶液浸泡90 min，95%乙醇40 min 2 次，無(wú)水乙醇45 min 3 次，二甲苯10 min 2 次；于54～56 ℃石蠟中浸泡30 min 2 次；用82 ℃硬蠟+蜂蠟包埋，室溫保存；用切片機(jī)制備4 μm 厚切片；70 ℃烤箱烘烤45 min；最后HE 染色并進(jìn)行顯微鏡讀片[20]。

6）腸道切片制作 取2 cm 小腸組織，生理鹽水沖洗后放入福爾馬林溶液固定。經(jīng)修塊水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色、透明、封固等步驟，制成厚5 μm 的HE 染色組織切片，顯微鏡下觀察小腸絨毛形態(tài)[21]。

7）小鼠腸通透性測(cè)定 取10 cm 源于KHBB 緩沖液（pH 7.4）的新鮮回腸組織，結(jié)扎線(xiàn)結(jié)扎一端，灌胃針從另一端注入100 μL FITCdextran 溶液后將另一端結(jié)扎，形成8 cm 的腸管。將其置于2 mL 的KHBB 液體，37 ℃恒溫箱孵化20 min。熒光分光光度法激發(fā)波長(zhǎng)485 nm、發(fā)射波長(zhǎng)530 nm 測(cè)定腸管中滲透至孵化緩沖液中的FD-4 溶液。測(cè)定每分鐘每厘米小腸FD-4 滲透量，得到小腸的通透性數(shù)據(jù)[22]。

8）小鼠腸道菌群分析 根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道方法提取小鼠糞便基因組[17]，利用二/三代測(cè)序平臺(tái)，對(duì)16S rDNA 功能基因等特定區(qū)段PCR 產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序，獲得腸道樣本中的微生物群落結(jié)構(gòu)以及與環(huán)境相關(guān)性等信息。本研究由美吉生物公司對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)序，并通過(guò)I-Sanger 云平臺(tái)進(jìn)行分析。通過(guò)門(mén)水平、屬水平上腸道菌群的改變來(lái)分析各試驗(yàn)組菌群結(jié)構(gòu)的變化，并進(jìn)行相似性聚類(lèi)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0 軟件選用Duncans法進(jìn)行單因素方差分析、顯著性分析，顯著性水平為P<0.05，指標(biāo)結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）。除動(dòng)物試驗(yàn)均做3 次重復(fù)試驗(yàn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般情況

對(duì)照組小鼠皮毛光澤柔順、體態(tài)活潑、體重正常、反應(yīng)靈敏、進(jìn)食飲水正常、無(wú)嗜睡現(xiàn)象。模型組和植物乳桿菌各組小鼠從試驗(yàn)第3 周灌胃酒精開(kāi)始，出現(xiàn)皮毛粗糙無(wú)光、體態(tài)呆板、體重下降、反應(yīng)遲緩、食欲減退、精神萎靡等癥狀，醉酒行為明顯，一般經(jīng)2～3 h 后可緩解。較于模型組，植物乳桿菌各組小鼠醉酒癥狀輕，醒酒時(shí)間短；但與對(duì)照組小鼠相比，植物乳桿菌干預(yù)各組小鼠體態(tài)消瘦、食欲欠佳、持續(xù)死亡?？傮w來(lái)看，植物乳桿菌各組小鼠情況劣于對(duì)照組，優(yōu)于模型組。

2.2 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠體重的影響

酒精對(duì)消化系統(tǒng)的刺激破壞，會(huì)降低動(dòng)物的消化能力使其體重降低。植物乳桿菌通過(guò)磷壁酸與腸黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合形成生理屏障，減少來(lái)自酒精的損傷[11，18]。研究結(jié)果顯示所有分組小鼠體重在第0 到2 周適應(yīng)期內(nèi)呈明顯逐漸上升的趨勢(shì)，從第3 周起給各組加灌生理鹽水或酒精，對(duì)照組小鼠體重呈上升趨勢(shì)且一直為同一時(shí)期各組中最大值。模型組小鼠則體重增長(zhǎng)緩慢，體重一直處于同時(shí)期各試驗(yàn)組中的最小值（圖1a）。體重指標(biāo)表明，長(zhǎng)期攝入酒精已經(jīng)顯著影響小鼠的正常生長(zhǎng)，體重增加減緩。從12 周的體重?cái)?shù)據(jù)分析，模型組的小鼠體重顯著低于其它各試驗(yàn)組，植物乳桿菌各干預(yù)組（低高劑量活細(xì)胞組及無(wú)細(xì)胞上清組）的小鼠體重沒(méi)有顯著性差異，與對(duì)照組也沒(méi)有顯著性差異，表明植物乳桿菌Zhang-LL 可以顯著緩解長(zhǎng)期攝入酒精對(duì)機(jī)體生長(zhǎng)的負(fù)面影響。在已有報(bào)道中，尚未發(fā)現(xiàn)正常食物飼喂情況下酒精攝入后會(huì)引起機(jī)體體重的顯著變化[11，23]，但本研究挑選第12 周作差異顯著性分析，結(jié)果顯示對(duì)照組與各植物乳桿菌Zhang-LL 干預(yù)組之間沒(méi)有顯著性差異，但均顯著高于模型組（P＜0.05）（圖1b）。試驗(yàn)結(jié)果表明，植物乳桿菌Zhang-LL 的低、高劑量及其培養(yǎng)上清液均可以顯著緩解醉酒劑量攝入乙醇帶來(lái)的體重減輕的影響。

圖1 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠體重的影響Fig.1 The effect of Lactobacillus plantarum Zhang-LL on the body weight of mice

2.3 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠食欲的影響

研究結(jié)果表明，長(zhǎng)期攝入一定量的酒精會(huì)導(dǎo)致胃黏膜出血、潰爛，影響酶活性，減退動(dòng)物食欲和消化能力，使機(jī)體代謝紊亂，影響進(jìn)食[18]。本研究針對(duì)試驗(yàn)周期內(nèi)各組小鼠的飼料攝入量及飲水量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示模型組小鼠的飼料攝入量約為對(duì)照組（1888.0 g）的55.1%（P<0.05）（圖2a），飲水量為對(duì)照組（2 307.7 mL） 的51.6%（P<0.05）（圖2b），表明模型組小鼠體重降低可能由于進(jìn)食量降低引起。另外，數(shù)據(jù)表明植物乳桿菌Zhang-LL 各干預(yù)組的飲水量為1 826.8～1 860.1 mL 顯著低于對(duì)照組，顯著高于模型組（圖2a）；但飼料攝入量為1 492.9～1 671.3 g，與對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異，顯著高于模型組（圖2b）。數(shù)據(jù)結(jié)果表明植物乳桿菌Zheng-LL 可以顯著緩解醉酒劑量攝入乙醇給機(jī)體食欲帶來(lái)的負(fù)面影響，保持機(jī)體的正常食物攝入量。

圖2 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠飲食量的影響Fig.2 The effect of Lactobacillus plantarum Zhang-LL on the diet amount of mice

2.4 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠血脂代謝的影響

慢性酒精損傷會(huì)增高血脂水平，使脂肪變性產(chǎn)生脂肪泡。酒精會(huì)阻礙體內(nèi)脂肪代謝，其代謝產(chǎn)物乙醛等抑制脂肪酸分解。這時(shí)，進(jìn)入氧化代謝途徑的游離脂肪酸減少，TG 合成代謝途徑的增多，血清TG 水平上升[13，23]。由圖3a 可知，試驗(yàn)周期結(jié)束時(shí)模型組血清中TG 含量并未發(fā)生顯著變化，與對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）。但植物乳桿菌高劑量組、上清組的血清TG 含量明顯降低，尤其是上清組的血清TG 含量顯著低于模型組，甚至顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），表明植物乳桿菌Zhang-LL 的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)上清液具有影響機(jī)體脂質(zhì)代謝，減少TG 合成，降低血液中TG 的作用，甚至在酒精損傷情況下，依然具有顯著的作用效果。

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）主要來(lái)自小腸和肝臟。LDL-c 將肝臟中膽固醇運(yùn)輸?shù)狡渌M織器官，當(dāng)血液膽固醇過(guò)量時(shí)，來(lái)自LDL-c 的膽固醇開(kāi)始堵塞血管壁，減小血管內(nèi)徑，嚴(yán)重干擾機(jī)體生化代謝[13]。本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)周期結(jié)束時(shí)，模型組血清中的LDL-c 的含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），模型組較對(duì)照組升高了3 倍。而植物乳桿菌Zhang-LL 低劑量組較模型組降低了75%，高劑量組降低了50%，上清組降低了58.3%，3 組與對(duì)照組差異無(wú)顯著性（P＞0.05），均顯著低于模型組（圖3b），結(jié)果表明植物乳桿菌Zhang-LL 可以緩解酒精損傷增加機(jī)體低密度脂蛋白積累的負(fù)面影響。

圖3 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠血清甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的影響Fig.3 The effect of Lactobacillus plantarum Zhang-LL on triglycerides and low density lipoprotein cholestero in mice serum

還原型谷胱甘肽（GSH）由谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成，是一種低分子清除劑。它通過(guò)巰基與自由基結(jié)合，清除O2-，H2O2，加速自由基排出。它增強(qiáng)含琉基酶穩(wěn)定性，防止血紅蛋白和其它輔因子氧化損傷，GSH 水平用來(lái)衡量機(jī)體抗氧化能力，是肝臟受損傷程度的指標(biāo)[18，24]。如圖4所示，模型組<對(duì)照組<植物乳桿菌Zhang-LL 上清組<植物乳桿菌Zhang-LL 低劑量組<植物乳桿菌Zhang-LL 高劑量組，植物乳桿菌Zhang-LL 高劑量組、低劑量組、上清組GSH 含量是模型組1.77 倍、3.23倍、1.6 倍，模型組小鼠肝臟勻漿GSH 水平與植物乳桿菌Zhang-LL 各組差異均有顯著性（P＜0.05），對(duì)照組與植物乳桿菌Zhang-LL 高劑量組、低劑量組差異均有顯著性。這說(shuō)明植物乳桿菌Zhang-LL可明顯提高鼠肝臟勻漿GSH 水平，提升機(jī)體抵御氧化損傷的能力。

圖4 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠肝臟谷胱甘肽含量的影響Fig.4 The effect of Lactobacillus plantarum Zhang-LL on glutathione content in mice liver

2.5 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠腸道功能的影響

2.5.1 對(duì)小腸組織的影響 小腸是動(dòng)物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所，其功能性依賴(lài)于正常黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)。小腸黏膜上皮的皺襞、絨毛、微絨毛等特殊結(jié)構(gòu)擴(kuò)大了其吸收養(yǎng)分的表面積，其中小腸絨毛作為小腸黏膜主要結(jié)構(gòu)，是衡量小腸吸收功能重要指標(biāo)，酒精會(huì)影響小腸絨毛形態(tài)[10，22]。通過(guò)觀察圖5小腸絨毛組織切片可知，對(duì)照組小腸絨毛致密完整，長(zhǎng)且寬；模型組絨毛密度稀疏，明顯損傷脫落，短且窄；植物乳桿菌Zhang-LL 上清組小腸絨毛粗壯致密，高度較對(duì)照組高。本研究認(rèn)為植物乳桿菌Zhang-LL 上清液在消除酒精對(duì)小腸絨毛的損傷作用的基礎(chǔ)上還能促進(jìn)其生長(zhǎng)。

圖5 小鼠小腸絨毛HE 染色Fig.5 HE staining of mice small intestinal villi

2.5.2 對(duì)小鼠小腸通透性的影響 腸黏膜通透性指某特定物質(zhì)在腸黏膜表面非易化擴(kuò)散的滲透能力。腸道對(duì)大分子物質(zhì)通透性增加說(shuō)明腸道結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可能有腸道內(nèi)細(xì)菌或內(nèi)毒素滲漏，通過(guò)腸道屏障進(jìn)入血液循環(huán)。本研究用腸道對(duì)大分子物質(zhì)通透性來(lái)評(píng)估腸道黏膜屏障功能[22，25]。大量研究顯示，長(zhǎng)期攝入酒精可損傷腸道，增加腸通透性，延遲腸道上皮細(xì)胞遷移更新，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致克羅恩病、糖尿病、乳糜瀉、腸易激綜合征（IBS）、特異性皮炎等疾病[14，22]。由圖6可知，試驗(yàn)周期結(jié)束時(shí)，模型組的小腸通透性與對(duì)照組相比并未產(chǎn)生顯著性變化，但植物乳桿菌Zhang-LL 的高劑量組及上清組可以顯著降低小腸的通透性，尤其是上清組，小腸通透性已經(jīng)顯著低于對(duì)照組。吳思琪等對(duì)植物乳桿菌Zhang-LL 預(yù)防腸炎機(jī)理研究的結(jié)果表明，植物乳桿菌Zhang-LL 可以顯著提高腸道組織中緊密連接蛋白表達(dá)量，從而降低腸道的通透性，阻擋腸道內(nèi)部毒素等物質(zhì)滲透到血液中，緩解腸炎癥狀[11，17，22]。該結(jié)果與本研究結(jié)果相似，表明植物乳桿菌Zhang-LL 的確有降低腸道通透性的作用效果，維持腸道絨毛的完整狀態(tài)，從而減少不利機(jī)體健康物質(zhì)滲入血液，保持機(jī)體的腸道健康功能。

圖6 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠小腸通透性的影響Fig.6 The effect of Lactobacillus plantarum Zhang-LL on intestinal permeability of mice

2.6 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

利用Illumina 高通量測(cè)序平臺(tái)分析不同乳酸菌菌株對(duì)因長(zhǎng)期酒精攝入改變小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響。初步分析結(jié)果表明：長(zhǎng)期攝入酒精顯著改變小鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)，外源攝入植物乳桿菌菌株Zhang-LL 后小鼠的菌群結(jié)構(gòu)與對(duì)照組小鼠及模型組小鼠的差異具有顯著性（圖7a），但相對(duì)于模型組，對(duì)照組與Zhang-LL 菌株各受試組小鼠菌群結(jié)構(gòu)有更接近的相似性（圖7b）。表明植物乳桿菌Zhang-LL 可以顯著緩解由于長(zhǎng)期攝入酒精引起的腸道菌群紊亂。

圖7 植物乳桿菌菌株Zhang-LL 各組受試物組的小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)相似性樹(shù)狀圖Fig.7 The tree of structural similarity of the intestinal microflora of mice in the Lactobacillus plantarum Zhang-LL test groups

2.7 植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)小鼠其它指標(biāo)的影響

除上述指標(biāo)外，本研究還觀察了各組試驗(yàn)小鼠肝臟組織病理切片，檢測(cè)了肝臟、脾臟及腎臟的臟器指數(shù)，以及血清及肝臟組織中的ALT、AST 酶活、MDA 含量以及GSH-Px 酶活，但模型組、各干預(yù)組及對(duì)照組之間的這些指標(biāo)均未出現(xiàn)顯著性差異，推測(cè)為期12 周的酒精灌胃試驗(yàn)影響了小鼠與機(jī)體健康相關(guān)的部分指數(shù)，但對(duì)肝臟并未產(chǎn)生病理性的改變。有研究報(bào)道顯示，10～14 mL/kg/d 的48%或60%的乙醇灌胃量會(huì)導(dǎo)致小鼠發(fā)生顯著的醉酒行為學(xué)表現(xiàn)[26-27]。本研究中灌胃劑量的后8 周的50%的灌胃劑量為5.7～7.1 mL/kg/d（約0.2～0.25 mL/d/只），少于文獻(xiàn)報(bào)道中的醉酒劑量，然而小鼠已出現(xiàn)醉酒行為，結(jié)果表明，在試驗(yàn)周期內(nèi)，雖然持續(xù)以使小鼠出現(xiàn)醉酒的劑量進(jìn)行灌胃，但是未使小鼠的肝臟出現(xiàn)病理性改變。

3 結(jié)論

植物乳桿菌Zhang-LL 干預(yù)可以顯著緩解酒精損傷引起攝食量減少及體重增長(zhǎng)減緩的負(fù)面影響（P<0.05）。與模型組相比，植物乳桿菌Zhang-LL培養(yǎng)上清液還可以顯著降低酒精損傷的小鼠血清中TG 及LDL-c 的水平，增加肝臟組織中GSH 的含量，降低腸道通透性，保持小腸絨毛的完整性，平衡腸道菌群結(jié)構(gòu)（P<0.05）。在試驗(yàn)周期內(nèi)，攝入酒精小鼠的肝臟組織結(jié)構(gòu)未出現(xiàn)酒精損傷的病理性改變，組織及血液中ALT 酶活、AST 酶活，組織中MDA 含量及GSH-Px 酶活均沒(méi)有顯著變化，植物乳桿菌Zhang-LL 各干預(yù)組對(duì)這些指標(biāo)也沒(méi)有顯著影響（P>0.05）?？傮w來(lái)看，植物乳桿菌Zhang-LL 對(duì)酒精攝入給機(jī)體帶來(lái)的部分負(fù)面影響具有顯著的改善作用，尤其以植物乳桿菌Zhang-LL 培養(yǎng)上清液作用效果最為顯著。