白細(xì)胞介素-22在慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期患者外周血中的變化及其作用機(jī)制

趙娜 冷報(bào)浪 王海燕 徐佳

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一種以持續(xù)呼吸系統(tǒng)癥狀和氣流受限為特征的常見(jiàn)疾病，具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率等臨床特點(diǎn)。香煙煙霧（CS）暴露導(dǎo)致大、小氣道的炎癥［1］，吸煙是慢阻肺發(fā)生和發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素［2］。免疫炎癥介質(zhì)引起持續(xù)的免疫炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及其產(chǎn)生的破壞性蛋白酶在COPD肺損傷中起關(guān)鍵作用［3］。其中，白細(xì)胞介素-22（IL-22）是強(qiáng)效的免疫炎癥介質(zhì)之一，而關(guān)于COPD患者的痰液及氣道中IL-22水平升高的作用機(jī)制尚不明確。本文觀察COPD穩(wěn)定期患者血清IL-22、IL-8和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)性，探討血清中IL-22的水平變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2018年3月至2019年3月在本院住院的COPD穩(wěn)定期患者30例，作為觀察組。其中，男20例、女10例；年齡60～80歲，平均（64.81±7.26）歲。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2018年Gold指南中的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；②年齡≥60歲；③患者及家屬知情同意。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①納入前1個(gè)月內(nèi)有呼吸道感染史；②合并肺部感染、哮喘、支氣管擴(kuò)張、肺纖維化等其他呼吸系統(tǒng)疾病；③合并嚴(yán)重心、肝、腎功能不全，惡性腫瘤。另同期選取本院健康體檢者28例，作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)COPD、哮喘、支氣管擴(kuò)張等慢性呼吸系統(tǒng)病史，無(wú)過(guò)敏史，近1個(gè)月內(nèi)無(wú)呼吸道感染及服用藥物史。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法 （1）抽取研究對(duì)象清晨空腹外周靜脈血5 ml，4℃環(huán)境下靜置30 min，以2500 r/min離心10 min，離心半徑13.5 cm，分離血清后-70 ℃保存。采用IL-22和IL-8試劑盒（天津安諾瑞康生物技術(shù)有限公司，ab119543，ac119442）檢測(cè)血清IL-22和IL-8水平，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。采取雙抗體夾心法，稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和待檢血清，將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢血清加入酶標(biāo)板中，37 ℃孵育30 min，洗板，加入酶標(biāo)試劑，同前再行孵育、洗板，之后加入顯色劑，顯色10 min，加入終止液，450 nm波長(zhǎng)，酶標(biāo)儀（帝肯 Sunrise）測(cè)定OD值。（2）所有研究對(duì)象入院時(shí)常規(guī)抽取外周靜脈血2 ml，置于EDTA-K2抗凝管中充分混勻，分離血清后，用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（希森美康 XN-1000）及配套試劑檢測(cè)外周血白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo) 血清IL-22、IL-8表達(dá)水平，白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用確切概率法或χ2檢驗(yàn)；應(yīng)用Pearson進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n 年齡（歲） 男/女（n）吸煙［n（%）］WBC（×109/L） CRP（mg/L）觀察組 30 48.1±7.26 20/10 12（40） 6.19±1.28* 19.11±5.60*對(duì)照組 28 59.4±8.14 20/8 9（32） 3.44±2.23 14.20±4.08

2.2 兩組血清IL-22、IL-8的表達(dá)水平比較 見(jiàn)表2。

表2 兩組血清IL-22、IL-8的表達(dá)水平比較［ng/ml，（）］

表2 兩組血清IL-22、IL-8的表達(dá)水平比較［ng/ml，（）］

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n IL-22 IL-8觀察組 30 49.5±13.1* 18.26±4.22*對(duì)照組 28 19.2±4.01 4.13±1.04 t值 2.308 2.802 P值 0.000 0.000

2.3 兩組外周血白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 見(jiàn)表3。

表3 兩組外周血白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較［×109/L，（）］

表3 兩組外周血白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較［×109/L，（）］

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n 白細(xì)胞總數(shù) 中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察組 30 6.19±1.28* 4.63±1.57*對(duì)照組 28 3.04±2.23 3.75±1.62 t值 27.391 13.290 P值 0.002 0.003

2.4 Pearson相關(guān)性分析 COPD穩(wěn)定期患者的血清IL-22水平與IL-8水平呈正相關(guān)（r=0.313，P＜0.05）；COPD穩(wěn)定期患者的血清IL-8水平與外周血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（r=0.683，P＜0.05）。見(jiàn)圖1-2。

圖1 血清IL-22與IL-8相關(guān)性分析

圖2 血清IL-8與中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析

3 討論

IL-22是IL-10細(xì)胞因子家族成員之一，主要由Th17細(xì)胞和3型固有免疫細(xì)胞（ILC3s）分泌的細(xì)胞因子，在黏膜炎癥和免疫監(jiān)視方面發(fā)揮重要作用，能夠招募中性粒細(xì)胞至受損部位，并且可以誘導(dǎo)大量趨化因子和炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生［5］，說(shuō)明IL-22具有促炎或致病作用。LIU等［6］研究發(fā)現(xiàn)，吸煙伴肺功能正?；颊吆虲OPD患者血清及痰中的IL-22水平明顯高于不吸煙肺功能正常組。本研究結(jié)果顯示，COPD穩(wěn)定期患者的血清IL-22、IL-8及中性粒細(xì)胞水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），表明IL-22可能在COPD的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。Pearson相關(guān)性分析顯示，IL-22與IL-8水平呈正相關(guān)（P＜0.05），IL-8與中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（P＜0.05），提示IL-22可能獨(dú)立于感染之外促進(jìn)COPD患者中性粒細(xì)胞氣道炎癥。IL-8作為一種重要的中性粒細(xì)胞趨化因子，參與中性粒細(xì)胞氣道炎，也被認(rèn)為對(duì)COPD的發(fā)展具有潛在的作用［7］。LIU等［6］研究發(fā)現(xiàn)，在COPD患者的支氣管上皮細(xì)胞，IL-8具有較高的基線表達(dá)水平，且循環(huán)血中IL-8水平與肺功能呈負(fù)相關(guān)，因此IL-8可能是一個(gè)降低中性粒細(xì)胞募集的靶點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)，COPD患者血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)較對(duì)照組升高，提示COPD患者存在突出的中性粒細(xì)胞氣道炎癥。中性粒細(xì)胞分泌的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、蛋白酶-3、MMP-8、MMP-9可促進(jìn)肺泡的破壞，導(dǎo)致肺氣腫［8］。

本研究尚未解決的問(wèn)題如下：僅對(duì)COPD穩(wěn)定期患者的血清IL-22表達(dá)情況進(jìn)行分析，未明確其在氣道及肺組織中的表達(dá)情況；僅對(duì)IL-22在COPD患者中的病理機(jī)制做初步研究，獲得的結(jié)果尚不能完全證明其在氣道炎癥方面的作用，需阻斷IL-22或基因敲除進(jìn)行進(jìn)一步探討。