Foretinib衍生物L(fēng)WK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性研究

王忠元 楊華麗 崔杏 朱高峰 湯磊 廖偉科

中圖分類號(hào) 969.1;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）11-1325-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.11.08

摘 要 目的：建立測(cè)定肝微粒體中Foretinib衍生物L(fēng)WK-126質(zhì)量濃度的方法，研究其在大鼠、比格犬、人肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性。方法：采用體外肝微粒體孵育體系，將LWK-126分別溶于由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸溶液?jiǎn)?dòng)的大鼠、比格犬、人肝微粒體孵育體系中，于37 ℃水浴下分別孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)加入含內(nèi)標(biāo)（1 μg/mL甲苯磺丁脲）的乙腈終止反應(yīng)，并采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)各孵育體系中LWK-126的質(zhì)量濃度。以Waters BEH C18為色譜柱，以水（含0.01%甲酸）-乙腈（含0.01%甲酸）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.4 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為2 μL;離子源為電噴霧電離源，采用正離子模式采集，掃描范圍為m/z 50→1 200。以孵育0 min時(shí)LWK-126的質(zhì)量濃度為參照，計(jì)算其在不同孵育體系中的剩余百分率與酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果：LWK-126檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.05～15 μg/mL（R 2=0.999 2），定量下限為0.05 μg/mL，最低檢測(cè)限為0.01 μg/mL，精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)均符合生物樣品定量分析的要求。LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中孵育60 min后的剩余百分率分別為（33.17±4.52）%、（3.14±6.73）%、（1.38±5.85）%，半衰期分別為33.15、11.76、5.62 min，清除率分別為38.45、118.81、245.76 μL/（min·mg）。結(jié)論：成功建立了肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的測(cè)定方法。LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性排序依次為人>大鼠>比格犬。

關(guān)鍵詞 LWK-126;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;肝微粒體;代謝穩(wěn)定性

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the method for the concentration determination of foretinib derivative LWK-126 in liver microsomes， and to study its metabolism stability in liver microsomes of rats， Beagle dogs and human. METHODS： In the in vitro incubation system of liver microsomes， LWK-126 was dissolved in liver microsomal incubation systems of rats， Beagle dog and human initiated by reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate solution. After incubation in water at 37 ℃ for 0，5，10，20，30 and 60 min， the reaction was terminated with acetonitrile containing internal standard （1 μg/mL tolbutamide）. UPLC-MS/MS method was applied to determine the concentration of LWK-126 in the incubation systems. The determination was performed on Waters BEH C18 column with mobile phase consisted of water （containing 0.1% formic acid）-acetonitrile （containing 0.1% formic acid） by gradient elution at the flow rate of 0.4 mL/min. The column temperature was 30 ℃， and the sample size was 2 μL. The mass spectral analysis was performed in a positive electrospray ionization mode，and the full MS experiment was run with the selective reaction monitoring mode with a scanning range of m/z 50→1 200. Taking the concentration of LWK-126 at 0 min as reference，the remaining percentage and the enzyme kinetic parameters were calculated. RESULTS： The linear range of LWK-126 was 0.05-15 μg/mL （R 2=0.999 2）; the lower limit of quantification was 0.05 μg/mL， and the lowest detection limit was 0.01? ? ? ?μg/mL. The precision， accuracy， extraction recovery and matrix effect all met the analysis requirements of biological samples. The remaining percentage of LWK-126 in liver microsomes of human， rats and Beagle dogs for 60 min were （33.17±4.52）%，（3.14±6.73）%，（1.38±5.85）%; t1/2 of them were 33.15， 11.76， 5.62 min; the clearance rates were 38.45， 118.81， 245.76 μL/（min·mg）， respectively. CONCLUSIONS： The method for the content determination of LWK-126 in liver microsomes is established successfully. The order of metabolic stability of LWK-126 in liver microsomes of different species is human>rats>Beagle dogs.

KEYWORDS? ?LWK-126; UPLC-MS/MS; Liver microsomes; Metabolic stability

c-Met是受體酪氨酸激酶（RTK）家族Ron亞族中一個(gè)原型成員，是唯一一個(gè)已知的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）的高親和力受體（HGFR）[1]。已有研究表明，HGF/c-Met活性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和腫瘤細(xì)胞的分裂、血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥性等密切相關(guān)，并在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)異常的高表達(dá)、突變及活性改變[1]。同時(shí)，c-Met編碼基因的異常擴(kuò)增、c-Met或HGF的過表達(dá)、c-Met編碼基因的突變都與腫瘤患者的不良預(yù)后有關(guān)[2]。目前，已有4種小分子Met抑制劑獲批在我國(guó)上市，但大部分僅用于治療攜帶Met外顯子14跳躍突變的非小細(xì)胞肺癌患者[3-5]。因此，開發(fā)新型、高效的小分子c-Met抑制劑是目前的一個(gè)重要研究方向。

化合物L(fēng)WK-126（結(jié)構(gòu)式見圖1）是一個(gè)通過對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和HGF受體抑制劑Foretinib的Linker部分進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾而得到的含咪唑酮酰胺片段的喹啉類衍生物;體外研究表明，LWK-126對(duì)c-Met、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR）、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（c-Kit）等多種激酶均表現(xiàn)出較好的抑制活性，半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為1.42、92.6、38.2 nmol/L[6]。此外，LWK-126對(duì)c-Met依賴性腫瘤細(xì)胞的抑制活性優(yōu)于Foretinib，具有一定的開發(fā)價(jià)值[7]。已有研究表明，在新藥研發(fā)早期，對(duì)先導(dǎo)化合物在不同種屬肝微粒體中的體外代謝穩(wěn)定性進(jìn)行研究，可有助于評(píng)價(jià)其代謝差異[8]。為此，本文參考文獻(xiàn)[9-10]，建立了肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS），比較了LWK-126在比格犬、大鼠、人肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性，一方面為L(zhǎng)WK-126的成藥性評(píng)價(jià)提供參考，另一方面為其后續(xù)的體內(nèi)藥效及毒理學(xué)研究的動(dòng)物選擇提供依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括XevoG2-XS型UPLC-四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（配有MassLynx V4.1型質(zhì)譜工作站、UNIFI 7.0 數(shù)據(jù)庫，美國(guó)Waters公司）、DK-98-Ⅱ型電熱恒濕水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）、X1型高速離心機(jī)（香港基因有限公司）、JN300-2型氮?dú)獯祾邇x（蘇州吉米諾儀器有限公司）、FA805N型十萬分之一電子天平（上海菁海儀器有限公司）、KH-600E型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、DW-86L486型超低溫保存箱（青島海爾股份有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

LWK-126原料藥（批號(hào)20150216，純度>98%）由沈陽藥科大學(xué)提供;甲苯磺丁脲對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，批號(hào)M26M7L15275，純度>98%）購自上海源葉生物科技有限公司;煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二鈉（NADP-Na2，批號(hào)718B0225）、葡萄糖-6-磷酸-二鈉（G-6-P-Na2，批號(hào)116B039）、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-P-DH，批號(hào)20160725）均購自北京索萊寶科技有限公司;甲醇、乙腈均為色譜純，氯化鎂、檸檬酸鈉等均為分析純，其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 肝微粒體

雄性SD大鼠肝微粒體（批號(hào)MIC254034）、雄性比格犬肝微粒體（批號(hào)MIC257015）均購自上海斯信生物科技有限公司，男女混合人肝微粒體（批號(hào)38292）購自美國(guó)Corning Costar公司，質(zhì)量濃度均為20 mg/mL（以蛋白計(jì)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 LWK-126貯備液 精密稱取LWK-126原料藥適量，用甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的LWK-126貯備液。

2.1.2 內(nèi)標(biāo)溶液和終止液 精密稱取甲苯磺丁脲對(duì)照品適量，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備質(zhì)量濃度為1 mg/mL的甲苯磺丁脲內(nèi)標(biāo)溶液。使用前，取上述內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈稀釋成甲苯磺丁脲質(zhì)量濃度為1 μg/mL的終止液。

2.1.3 還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）輔酶溶液 稱取NADP-Na2 200 mg、G-6-P-Na2 200 mg、氯化鎂133 mg，用水溶解并定容至同一10 mL量瓶中，于-20 ℃下保存，記為A液。稱取檸檬酸鈉44 mg、G-6-P-DH 1 000 U，用水溶解并定容至同一25 mL量瓶中，于-20 ℃下保存，記為B液。使用前，將A液和B液按體積比5 ∶ 1混合均勻，即得NADPH輔酶溶液，其最終濃度為1 mmol/L（以反應(yīng)產(chǎn)物NADPH計(jì)）。

2.2 孵育體系的建立與處理

取大鼠、比格犬、人肝微粒體各0.1 mg，分別用100 mmol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.4）稀釋至0.5 g/L，隨即加入LWK-126貯備液適量，使最終孵育體系中LWK-126的質(zhì)量濃度為5 μg/mL。將上述溶液于37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min后，立即加入NADPH輔酶溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)。該孵育體系的總體積為200 μL，其中NADPH的終濃度為1 mmol/L，甲醇的體積分?jǐn)?shù)不超過1%，LWK- 126的終質(zhì)量濃度為5 μg/mL，肝微粒體的終質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL。將上述各種屬孵育體系放置在37 ℃恒溫水浴中，分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)加入“2.1.2”項(xiàng)下含內(nèi)標(biāo)的終止液400 μL終止反應(yīng);渦旋均勻，于4 ℃下以16 000 r/min離心10 min，取上清液，用氮?dú)饬鞔蹈?殘?jiān)眉状?00 μL復(fù)溶，再次以16 000 r/min離心10 min，取上清液適量進(jìn)樣分析，考察各個(gè)時(shí)間點(diǎn)LWK-126的質(zhì)量濃度。每個(gè)孵育體系平行操作3次。

2.3 LWK-126質(zhì)量濃度的測(cè)定方法

2.3.1 色譜條件與質(zhì)譜條件 以Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）為色譜柱，Waters VanGuard BEH C18（5 mm×2.1 mm，1.7 μm）為保護(hù)柱;以水（含0.01%甲酸）為流動(dòng)相A、乙腈（含0.01%甲酸）為流動(dòng)相A進(jìn)行梯度洗脫（0～0.5 min，5%A;0.5～4.5 min，5%A→98%A;4.5～5 min，98%A→5%A）;流速為0.4 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為2 μL。離子源為電噴霧電離源（ESI），離子源溫度為100 ℃;毛細(xì)管電壓為1.5 kV，錐孔電壓為30 V，脫溶劑氣溫度為400 ℃，錐孔氣流量為50 L/h，脫溶劑氣流量為800 L/h;采用選擇反應(yīng)檢測(cè)（SRM），采集正離子，掃描范圍為m/z 50→1 200;數(shù)據(jù)采集分析軟件為Masslynx V4.1，采集時(shí)間為5 min。

2.3.2 專屬性考察 分別取適量空白孵育樣品（不含待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)，以高溫滅活的大鼠肝微粒體為介質(zhì)，其余按“2.2”項(xiàng)下方法制得）、LWK-126對(duì)照樣品（含待測(cè)物5 μg/mL和內(nèi)標(biāo)1 μg/mL，以高溫滅活的大鼠肝微粒為介質(zhì)，按“2.2”項(xiàng)下方法制得）和孵育15 min時(shí)的LWK-126樣品（大鼠肝微粒體，按“2.2”項(xiàng)下方法制得）各適量，按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，LWK-126的色譜峰峰形良好，保留時(shí)間約為2.08 min，孵育體系中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾LWK-126的測(cè)定，表明該方法專屬性良好，詳見圖2。

2.3.3 線性關(guān)系、定量下限與最低檢測(cè)限考察 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量，加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中，制成LWK-126質(zhì)量濃度分別為0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、10、15 μg/mL的系列孵育樣品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法處理后，取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以LWK-126質(zhì)量濃度（x， μg/mL）為橫坐標(biāo)、LWK-126與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為y=11.16x+0.5? ? （R 2=0.999 2），結(jié)果表明LWK-126檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.05～15 μg/mL，定量下限為0.05 μg/mL，最低檢測(cè)限為0.01 μg/mL（按信噪比3 ∶ 1計(jì)）。

2.3.4 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量，加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中，制成定量下限質(zhì)量濃度（0.05 μg/mL）的孵育樣品溶液和低、中、高質(zhì)量濃度（0.1、2.5、10 μg/mL）的質(zhì)控樣品溶液，各5份。各樣品按“2.2”項(xiàng)下方法處理后，取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，考察日內(nèi)精密度;連續(xù)測(cè)定3天，考察日間精密度。以實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較以評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度，結(jié)果以相對(duì)誤差（RE）表示。結(jié)果，定量下限質(zhì)量濃度孵育樣品與各質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間RSD均小于10%，RE均在±6%之內(nèi)，表明方法準(zhǔn)確度和精密度良好，詳見表1。

2.3.5 提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量，加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中，制成低、中、高質(zhì)量濃度（0.1、2.5、10? ?μg/mL）的質(zhì)控樣品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法處理后，取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A1）。將經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系按“2.2”項(xiàng)下方法處理后，加入LWK-126貯備液適量，制成與上述低、中、高質(zhì)量濃度一致的樣品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A2）。以甲醇配制與上述低、中、高質(zhì)量濃度一致的LWK-126溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A3）。每種樣品平行操作5次，計(jì)算提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)：提取回收率（%）=（A1/A2）×100%，基質(zhì)效應(yīng)（%）=（A2/A3）×100%，結(jié)果見表2。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量，加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中，制成低、中、高質(zhì)量濃度的孵育樣品溶液（0.1、2.5、10? ? ? ? ? μg/mL），各5份。各樣品按“2.2”項(xiàng)下方法處理后，分別在室溫放置24 h、4 ℃冰箱中冷藏24 h、常溫至-80 ℃反復(fù)凍融3次后，按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算質(zhì)量濃度。結(jié)果，各孵育樣品溶液質(zhì)量濃度的RSD均小于10%，表明LWK-126孵育樣品溶液在上述條件下穩(wěn)定性良好，詳見表3。

2.4 LWK-126在肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性

2.4.1 肝微粒體孵育體系建立的驗(yàn)證 為考察待測(cè)物是否受到非酶催化降解的影響，本研究按“2.2”項(xiàng)下方法設(shè)立空白組（即肝微粒體孵育體系中加入經(jīng)高溫滅活的肝微粒體）和陰性對(duì)照組（即肝微粒體孵育體系中不加入啟動(dòng)因子NADPH輔酶溶液）人、大鼠、比格犬肝微粒體孵育體系，分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算體系中LWK-126的質(zhì)量濃度。以孵育0 min時(shí)LWK-126的質(zhì)量濃度為參照，以其余各時(shí)間點(diǎn)LWK-126的質(zhì)量濃度與參照的比值計(jì)算剩余百分率。實(shí)驗(yàn)平行操作3次。結(jié)果，LWK-126在空白組和陰性對(duì)照組孵育體系中孵育60 min時(shí)的剩余百分率在101.3%～108.8%（以平均值表示）范圍內(nèi)，表明可用本研究所創(chuàng)建的肝微粒體孵育體系對(duì)LWK-126的代謝特征進(jìn)行探究，詳見表4。

2.4.2 LWK-126在不同種屬肝微粒體中的剩余百分率測(cè)定 按“2.2”項(xiàng)下方法建立人、大鼠、比格犬肝微粒體孵育體系，分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算體系中LWK-126的質(zhì)量濃度，再按“2.4.1”項(xiàng)下方法計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)LWK-126的剩余百分率。實(shí)驗(yàn)平行操作3次。結(jié)果，LWK-126在人、大鼠肝微粒體孵育體系中在5～10 min時(shí)消除最快，而在比格犬肝微粒體孵育體系中則是0～5 min時(shí)消除最快。LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中孵育60 min時(shí)的剩余百分率分別為（33.17±4.52）%、（3.14±6.73）%、（1.38±5.85）%，詳見表5。

2.4.3 LWK-126在肝微粒體中的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算 在人、大鼠、比格犬肝微粒體中，以LWK-126剩余百分率的自然對(duì)數(shù)（y）與孵育時(shí)間（x）進(jìn)行線性回歸分析，得LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中的回歸方程分別為y人=-0.019 3x人+4.557 1（R 2=0.994 3）、y鼠= -0.059 2x鼠+4.590 0（R 2=0.998 7）、y犬=-0.123 7x犬+4.602 6（R 2=0.992 6）。根據(jù)各線性回歸方程的斜率計(jì)算體外代謝的半衰期（t1/2）與清除率（CLint）：t1/2=-0.693/k（k是消除速率常數(shù)）、CLint=[（0.693/t1/2）×孵育體積（mL）]/肝微粒體質(zhì)量（mg）[11]。結(jié)果顯示，LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中的t1/2分別為33.15、11.76、5.62 min，CLint分別為38.45、118.81、245.76 μL/（min·mg）。

3 討論

本研究成功建立了LWK-126的UPLC-MS/MS定量分析方法，方法的專屬性、線性關(guān)系、定量下限、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)均符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[12]。為防止溶解藥物的有機(jī)溶劑對(duì)肝微粒體起滅活作用，在實(shí)驗(yàn)操作中保證了孵育總體系中有機(jī)溶劑（甲醇）的體積分?jǐn)?shù)不超過1%，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度[11]。在本研究中，LWK-126加入到孵育體系中的終質(zhì)量濃度為5 μg/mL、加入到孵育體系的肝微粒體的終質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL較為合適，因LWK-126的質(zhì)量濃度過高，可能導(dǎo)致肝微粒體中酶系飽和，而質(zhì)量濃度過低又不利于檢測(cè)[11]。

為進(jìn)一步確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)中肝微粒體孵育體系的可靠性，本研究還設(shè)置了空白組與陰性對(duì)照組。結(jié)果顯示，在高溫使酶滅活的空白組以及不加入NADPH輔酶溶液的陰性對(duì)照組中LWK-126的剩余百分率在101.3%～108.8%之間，表明本實(shí)驗(yàn)所建立的肝微粒體孵育體系可靠，可用于對(duì)待測(cè)物L(fēng)WK-126的代謝特征探究。

根據(jù)t1/2可判斷化合物是否穩(wěn)定，參照標(biāo)準(zhǔn)如下：t1/2<30 min，表明受試物代謝不穩(wěn)定;t1/2在30～90 min之間，表明受試物代謝穩(wěn)定性中等;t1/2>90 min，表明受試物代謝穩(wěn)定性良好[13]。本研究結(jié)果顯示，LWK-126在大鼠肝微粒體（t1/2=11.76 min）、比格犬肝微粒體（t1/2= 5.62 min）中的代謝速率相近且代謝不穩(wěn)定，而在人肝微粒體（t1/2=36.15 min）中的代謝速率相對(duì)于前兩種肝微粒體較慢，屬于中等穩(wěn)定。這表明LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝速率存在種屬差異，推測(cè)其體內(nèi)代謝穩(wěn)定性不理想，易被細(xì)胞色素P450酶所代謝[8，11]，需進(jìn)一步對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾以提高代謝穩(wěn)定性。

綜上所述，本研究成功建立了測(cè)定肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的UPLC-MS/MS法;LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性排序依次為人>大鼠>比格犬。后期應(yīng)借助高分辨質(zhì)譜及核磁共振等波譜手段對(duì)肝微粒體代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，明確其體外代謝特征，為設(shè)計(jì)出代謝穩(wěn)定、成藥性好的c-Met抑制劑提供理論依據(jù)。

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（收稿日期：2021-01-15 修回日期：2021-03-16）

（編輯：鄒麗娟）