飼料及飼料添加劑中沙門氏菌的分離鑒定

蘇 華，羅兆飛，洪體玉，麻曉莉，李 娟，吳良萍

（南寧海關(guān)技術(shù)中心 530021）

沙門氏菌屬(salmonella)是一種寄生于人類和動(dòng)物腸道內(nèi)的細(xì)菌，可以引起禽傷寒、豬霍亂、鼠傷寒沙門氏菌病、豬副傷寒、馬流產(chǎn)沙門氏菌等疾病，是一種需氧或兼性厭氧菌。適合的生長(zhǎng)溫度是35℃～37℃，不耐熱，55℃的溫度下1h即可被殺死。在外界的生活力很強(qiáng)，在糞便、土壤、食品中可以存活2個(gè)月，更久的能存活2年之久[1]。沙門氏菌血清型眾多，有2500種以上，在中國(guó)發(fā)現(xiàn)的有500多種。許多血清型的沙門氏菌均能產(chǎn)生毒素尤其是腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌，能致多種動(dòng)物的沙門氏菌病[2]。沙門氏菌是飼料中的主要危害菌群，國(guó)內(nèi)已有多次報(bào)道，因沙門氏菌污染的飼料而導(dǎo)致畜禽大量死亡，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。人的大多數(shù)沙門氏菌感染直接或間接地與動(dòng)物性食品有關(guān)， 而動(dòng)物的沙門氏菌感染和帶菌與所食用的動(dòng)物性飼料中的沙門氏菌污染有直接的關(guān)系[3-4]。沙門氏菌的傳播途徑很廣，食品在加工、運(yùn)輸、出售、烹飪、儲(chǔ)存過(guò)程中被其感染的可能性很大，尤其是動(dòng)物飼料中沙門氏菌的感染情況對(duì)全球的肉類加工廠都是很大的隱患[1]。因此， 檢測(cè)飼料中的沙門氏菌，控制沙門氏菌的安全性非常重要。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品：飼料，來(lái)自飼料生產(chǎn)企業(yè)。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株：沙門氏菌（AB94007），購(gòu)自中國(guó)典型菌種保藏中心，作為檢測(cè)過(guò)程中的陽(yáng)性對(duì)照菌株。

1.1.3 試劑：緩沖蛋白胨水（BPW），氯化鎂孔雀綠（RV）增菌液，亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液，亞硫酸鉍分離培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂，賴氨酸脫羧酶，硫化氫，靛基質(zhì)，pH 7.2尿素，氰化鉀（KCN）生化管，均購(gòu)自北京陸橋，科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，寧波天潤(rùn)沙門氏菌診斷血清（60種）。

1.1.4儀器：德國(guó)美默爾特HCP246恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 前增菌：無(wú)菌稱取25g(mL)飼料樣品，加入裝有225mL BPW的均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍打2～3 min，36℃培養(yǎng)18h。

1.2.2 選擇性增菌：各取1 mL搖勻后的培養(yǎng)物，分別轉(zhuǎn)接于10mL的RV和SC試管中，RV增菌液于42℃培養(yǎng)18～24 h，SC增菌液于36℃培養(yǎng)18～24h。

1.2.3 分離培養(yǎng)：用接種環(huán)從RV和SC試管中各挑取一環(huán)，分別劃線于BS和科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上，BS培養(yǎng)基于36 ℃培養(yǎng)44～48h，科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基則36℃培養(yǎng)18～24h 。沙門氏菌在BS上的典型菌落為黑色，帶金屬光澤，周圍培養(yǎng)基呈黑色或棕色，在科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上則為紫色。

1.2.4 生化試驗(yàn)：挑取2個(gè)以上典型菌落或可疑菌落接種三糖鐵瓊脂，賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分純。

1.2.5 鑒定：沙門氏菌的生化試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 13091-2018 6.4《飼料中沙門氏菌檢測(cè)方法》來(lái)判定[5]。

1.2.6 血清分型，參照4789.4-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》[6]，對(duì)分離株進(jìn)行血清分型。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

從48份飼料及其添加劑樣品中分離得到可疑菌株5株，經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定，以上5株可疑菌株皆為沙門氏菌，5株可疑菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，其中菜籽粕（18份），分離出2株，陽(yáng)性率11.1%；大豆粉（12份），分離出1株，陽(yáng)性率8.3%；大豆片（12份），分離出1株，陽(yáng)性率8.3%；魚(yú)粉（6份），分離出1株，陽(yáng)性率16.7%。并對(duì)以上5株沙門氏菌進(jìn)行血清分型，得到納西沙門氏菌（S.Tennessee）、山夫登堡沙門氏菌（S.Senftenberg）、姆班達(dá)卡沙門氏菌（S.Mbandaka）、布倫登盧普沙門氏菌（S.Braenderup）、布雷登尼沙門氏菌（S.Bredeney）各1株。血清分型結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 飼料及其添加劑中5株可疑分離株生化試驗(yàn)結(jié)果

表2 飼料及其添加劑中沙門氏菌血清分型結(jié)果

3 討論

本次分離得到沙門氏菌5 株，主要分布在C1群，大豆、菜籽粕、魚(yú)粉是常見(jiàn)的飼料及飼料添加劑，營(yíng)養(yǎng)豐富，適于微生物繁殖，污染沙門氏菌的概率也較高，要嚴(yán)格把控飼料的安全性。首先飼料生產(chǎn)企業(yè)要以身作則，立足生命健康安全第一，而不是只圖眼前利益，要有嚴(yán)格的衛(wèi)生控制程序，對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的清潔度把控，對(duì)員工進(jìn)行衛(wèi)生管理、健康檢查和樣品檢驗(yàn)方面的培訓(xùn)，做到從源頭上切斷沙門氏菌的污染，其次監(jiān)督管理部門要加強(qiáng)衛(wèi)生監(jiān)督及各種飼料運(yùn)輸、加工等方面的衛(wèi)生措施，以及在動(dòng)物產(chǎn)品運(yùn)輸、加工、經(jīng)營(yíng)等方面的衛(wèi)生監(jiān)督，要嚴(yán)格控制污染途徑， 切斷肉品運(yùn)輸、加工、經(jīng)營(yíng)環(huán)節(jié)的再次污染，對(duì)不合格樣品生產(chǎn)企業(yè)及經(jīng)營(yíng)企業(yè)加大處罰力度。