禽肉蛋中氟喹諾酮類獸藥殘留分析

楊水仙

（眉山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 620020）

氟喹諾酮類屬于含氟第三代喹諾酮類化學(xué)合成抗生素，作用機制為抑制細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，阻礙DNA的正常復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)運與重組，從而阻斷細(xì)菌的繁殖，起到抗菌作用。常用的沙星類藥物由于對多種革蘭氏陰性菌均具有良好的抗菌效果，且價格低廉，用藥方便，在畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療感染性疾病，是常用的三大獸藥之一。但是氟喹諾酮類藥物殘留嚴(yán)重，本文主要通過批量監(jiān)測不同區(qū)域、不同養(yǎng)殖規(guī)模點位的禽肉蛋中氟喹諾酮類獸藥殘留情況、為禽肉蛋中氟喹諾酮類獸藥殘留研究提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品來源和采集

抽檢眉山市轄區(qū)范圍內(nèi)規(guī)模養(yǎng)殖場、養(yǎng)殖大戶禽肉蛋樣品共360批次，其中無公害禽肉蛋為必抽點。全部樣品均實行現(xiàn)場抽樣、封樣，抽樣按照《動物及動物產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控抽樣程序》（NY/T 1897-2010）執(zhí)行。

1.2 儀器

液相三重四極桿質(zhì)譜（Ultimate 3000 RSLC TSQ Quantum Ultra, Thermo Fisher scientific）、冷凍離心機（ eppendoff 5804R）、電子天平（美國奧豪斯, SE602F,d=0.01mg ），多功能混勻器（ESSENSCIEN, Vortex Mixer V7 ）、超高速勻漿機（IKA，T18 digital UliRa）、氮空吹掃濃縮儀（北京斯珀特科技有限公司，SPT-24）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（IKA，RV10BS25）、冷卻水循環(huán)系統(tǒng)（北京長流科技儀器有限公司，LX600）。

1.3 耗材、試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

固相萃取中性交換柱（HLB、200mg/6mL，30支/盒，Agilent）、屈臣氏去離子水，甲醇、乙腈、正己烷、甲酸、乙酸均為色譜純，氫氧化鈉、磷酸二氫鉀為分析純。 標(biāo)準(zhǔn)品為氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、洛美沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、達氟沙星混合儲備液，內(nèi)標(biāo)為恩諾沙星 D5 ，均為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，濃度為 100mg/L。

1.4 檢測方法及樣品前處理

實驗前處理均按照《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB21312-2007）進行提取、凈化?；|(zhì)混標(biāo)配制梯度濃度為0ug/L、1ug/L、2ug/L、4ug/L、8ug/L、16ug/L、32ug/L、64ug/L。

1.5 檢測條件

色譜柱： Agela Bonshell C18 2.7um，2.1*100mm，cat.no:s c921002-0

流動相： A 相 0.1%甲酸、4mmol/l 甲酸銨水溶液 ，B 相0.1%甲酸、4mmol/l 甲酸銨甲醇（金標(biāo)）溶液 流速： 0.3mL/min

柱溫：40℃ 進樣體積： 5μL

梯度洗脫程序見下表 1:

時間（min） A(%) B(%)0～0.5 90 10 7.5～9.5 0 100 9.6～12 90 10

離子源及掃描方式：電噴霧離子源（ ESI+ ） , 多反應(yīng)離子監(jiān)測（ MRM ）

離子源溫度： 300℃；噴霧電壓： 3500V；碰撞器壓力mTorr： 1.5；輔助器流速mL/min：10；輔助器流速mL/min：30

1.6 樣品檢測參數(shù)及參考標(biāo)準(zhǔn)：

檢測參數(shù) 檢測方法 殘留限量（ μg/kg） 檢出限（ μg/kg）洛美沙星禽肉、蛋中不得檢出 0.5培氟沙星 禽肉、蛋中不得檢出 1.0氧氟沙星 禽肉、蛋中不得檢出 0.5諾氟沙星 禽肉、蛋中不得檢出 1.0恩諾沙星 禽蛋中不得檢出、禽肉中總量≤100 0.5環(huán)丙沙星 禽蛋中不得檢出、禽肉中總量≤100 1.2沙拉沙星 禽蛋中不得檢出、禽肉中總量≤10 1.0達氟沙星 禽蛋中不得檢出、禽肉中總量≤100 0.5 GB/T 21312-2007

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

抽檢眉山市轄區(qū)范圍內(nèi)的360批次樣品（118批次雞肉、230批次雞蛋，12批次鴨蛋，見圖 1）共計來自88個監(jiān)測點，其中龍頭企業(yè)12個，專合社28個，家庭農(nóng)場15個，散戶33個，包括5個無公害養(yǎng)殖場，見圖 2。其中，雞蛋類數(shù)量最多，占63.89%；散戶和專合監(jiān)測點位數(shù)偏多，分別占比37.5%和31.8%。共計有獸藥殘留檢出4批次，均為恩諾沙星檢出。其中雞肉中檢出2批次，未超標(biāo)，見圖3；雞蛋中檢出2批次，均為不合格樣品，見圖4，樣品合格率為 99.44%。

2.2 超標(biāo)批次蛋雞獸藥衰減變化趨勢

對檢出不合格的蛋雞養(yǎng)殖場養(yǎng)殖戶進行監(jiān)控，要求不合格批次的蛋雞40d不能使用獸藥，單獨進行正常飼養(yǎng)，每隔20d抽取所監(jiān)控蛋雞產(chǎn)的雞蛋進行檢測，超標(biāo)1組首次抽檢日期為4月21日，恩諾沙星檢測值為33.53 ug/kg ，二次抽檢樣品日期為5月11日，恩諾沙星檢測值為3.15ug/kg；三次抽檢日期為5月30日恩諾沙星檢測值為0ug/kg。超標(biāo)2組首次抽檢日期為8月7日，恩諾沙星檢測值15.32ug/kg ，二次抽檢日期為8月27日，恩諾沙星檢測值為4.09ug/kg，三次抽檢日期為9月16日，恩諾沙星檢測值0ug/kg。超標(biāo)1組20天恩諾沙星衰減率90.60%，超標(biāo)2組20天恩諾沙星衰減率73.30%.兩組恩諾沙星殘留衰減率略有差異。見圖5。

3 討論

3.1 眉山市禽肉蛋中獸藥殘留檢出情況與四川省除眉山以外省級例行畜禽獸藥殘留整體情況比較。

從2020年四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳省級例行監(jiān)測情況通報來看，全省除眉山以外其他地區(qū)累計抽檢禽肉590批次，合格率98.8%，禽肉樣品中檢出不合格參數(shù)主要為允許使用的恩諾沙星(1次)和停止使用藥物氧氟沙星（6次），眉山市各類任務(wù)抽檢的118批次雞肉樣品中，檢出恩諾沙星2次，均未超標(biāo)。全省除眉山以外省級抽檢禽蛋980批次，合格率98.9%，禽蛋樣品中檢出不合格參數(shù)均為恩諾沙星（以恩諾沙星和環(huán)丙沙星之和計），眉山抽檢的242批次禽蛋樣品中，檢出恩諾沙星2次，均超標(biāo)，合格率99.17%。其次，從全省畜產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)測情況及平時工作中畜產(chǎn)品監(jiān)測情況來看，豬牛羊肉中基本沒有常規(guī)獸藥殘留檢出的情況，禽肉蛋氟喹諾酮類殘留問題更突出。

3.2 兩組超標(biāo)實驗組恩諾沙星獸藥衰減情況比較

兩組超標(biāo)實驗組恩諾沙星獸藥衰減率略有差異，可能跟蛋雞個體差異、季節(jié)性預(yù)防用藥量、水質(zhì)、飼料配方、飼養(yǎng)方式、環(huán)境溫度等因素有關(guān)。整體來看30天以上休藥期較為安全。