異常糖鏈糖蛋白不同截?cái)嘀蹬挪橄滥[瘤的效能

鄭加蓮 黃麗芳 蔣燕飛 邢麗娟 沈霞 許慧青 朱勇

消化道腫瘤（gastrointestinal tumors,GITs）包括結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌等，近年來(lái)發(fā)病率逐漸遞增，極大危害患者的健康和生命，早發(fā)現(xiàn)、早治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵所在[1-2]。異常糖鏈糖蛋白（tumor abnormal protein,TAP）是腫瘤細(xì)胞在新陳代謝過程中釋放的糖蛋白和鈣-組蛋白復(fù)合物的總稱，在甲狀腺、肺部、乳腺癌等多種腫瘤中呈高表達(dá)，逐漸呈現(xiàn)出其在鑒別惡性腫瘤中的作用，但以往的報(bào)道常受限于樣本量不足，可能造成數(shù)據(jù)的偏倚，且關(guān)于不同截?cái)嘀蹬挪橄滥[瘤效能的報(bào)道較少[3-5]。鑒于此，本研究探討TAP不同截?cái)嘀蹬挪镚ITs的效能，并初步形成GITs的排查流程，報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2018年1月至2019年12月嘉興市第一醫(yī)院健康管理中心的1 192例體檢者，男617例，女 575 例，年齡 39～82（51.33±6.10）歲；其中惡性 GITs患者263例，良性消化道疾病患者355例，健康人群574例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）以往無(wú)惡性腫瘤病史者；（2）入組前無(wú)放化療等相關(guān)治療史者；（3）惡性GITs患者均經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷；（4）無(wú)嚴(yán)重凝血功能障礙；（5）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有嚴(yán)重的心、肝、腎功能不全者；（2）精神疾病患者；（3）骨折未愈合患者；（4）妊娠期患者；（5）合并自身免疫性疾病患者；（6）腫瘤復(fù)發(fā)患者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 TAP凝集法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司；TAP檢測(cè)用圖像分析儀購(gòu)自浙江省慈溪市瑞生醫(yī)療儀器廠。

1.2.2 TAP表達(dá)水平檢測(cè) （1）樣本采集：采指端末梢血（第1、2滴），分別滴到兩張載玻片上，推制厚薄均勻、占玻片長(zhǎng)度2/3以上的血片2張，置水平臺(tái)上，自然干燥。將已干燥血片移至恒溫恒濕（溫度18～25℃、相對(duì)濕度45%～60%）工作環(huán)境，約10 min，使血片的溫度和濕度達(dá)到工作條件。將試劑充分搖勻，吸取上層液垂直滴加到血片上，每張間隔均勻滴加3滴（每滴約50 μl），液滴斑點(diǎn)直徑 10～12 mm。放置 1.5～2 h，待血片上試劑自然干燥后（TAP與檢測(cè)試劑充分反應(yīng)），在滴過試劑的地方形成圓形的“斑點(diǎn)”，即標(biāo)本制作完成。（2）檢測(cè)：將標(biāo)本置于集成閱片儀之顯微鏡下，采用4×平場(chǎng)消色差物鏡在顯示屏上依次掃描觀察血片標(biāo)本的3個(gè)斑點(diǎn)，尋找特異形態(tài)的凝聚物，遇可疑圖像轉(zhuǎn)用高倍鏡分辨。（3）質(zhì)控：在同樣實(shí)驗(yàn)環(huán)境和條件下檢測(cè)陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品，確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)條件、儀器和人員處于正常工作狀態(tài)。（4）結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：在6個(gè)色斑中，以40×物鏡放大下，使用TAP檢測(cè)圖文系統(tǒng)拍攝采集顆粒圖片，并使用軟件面積測(cè)量功能測(cè)量顆粒大小，并記錄到《凝聚物面積計(jì)算表》上。

1.3 觀察指標(biāo) （1）將凝聚物面積＜121 μm2定義為TAP-，將凝聚物面積≥121 μm2定義為TAP+[6]，統(tǒng)計(jì)TAP 檢出惡性 GITs情況。（2）分析截?cái)嘀禐?121 μm2時(shí)，TAP診斷惡性GITs的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確率。（3）比較不同類型惡性GITs患者TAP表達(dá)水平。（4）分析TAP鑒別不同類型GITs的截?cái)嘀怠㈧`敏度、特異度。（5）比較不同TAP截?cái)嘀捣秶黝愋蛺盒訥ITs發(fā)生率。（6）比較不同分期惡性GITs患者TAP表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 TAP檢出GITs情況 臨床病理診斷惡性GITs共263例（食管癌82例、胃癌85例、結(jié)直腸癌96例），非惡性GITs共929例（包括良性病變355例與健康人群574例）。當(dāng)截?cái)嘀禐?21 μm2時(shí)，TAP檢出惡性GITs 371例，非惡性GITs 821例，見表1。

表1 TAP檢出GITs情況

2.2 TAP診斷惡性GITs的效能 當(dāng)截?cái)嘀禐?21 μm2時(shí)，TAP診斷惡性GITs的靈敏度為89.35%，特異度為85.36%，準(zhǔn)確率為 86.24%（1028/1192），見圖 1。

圖1 異常糖鏈糖蛋白（TAP）診斷惡性消化道腫瘤（GITs）的ROC曲線

2.3 不同類型惡性GITs患者及健康人群TAP表達(dá)水平比較 食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌患者及健康人群性別、年齡、腫瘤T分期、分化程度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌患者及健康人群TAP表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同惡性GITs類型患者及健康人群TAP表達(dá)水平比較

2.4 TAP鑒別不同類型惡性GITs的效能分析 TAP鑒別食管癌的AUC為0.825，最佳截?cái)嘀禐椋?81.79 μm2（P＜0.05）；TAP鑒別胃癌的AUC為0.816，截?cái)嘀禐椋?40.06 μm2（P＜0.05）；TAP鑒別結(jié)直腸癌的AUC為0.797，最佳截?cái)嘀禐椋?21.88 μm2（P＜0.05）。見圖2、表3。

圖2 異常糖鏈糖蛋白（TAP）鑒別不同類型惡性消化道腫瘤（GITs）的ROC曲線

表3 ROC分析結(jié)果

2.5 不同TAP截?cái)嘀捣秶黝愋蛺盒訥ITs發(fā)生率比較 以ROC分析得到的3個(gè)截?cái)嘀禐榉纸?，劃分入組 者 為 221.88 ～＜240.06 μm2、240.06 ～281.79 μm2、＞281.79 μm2。結(jié)直腸癌患者占比在TAP截?cái)嘀到橛?21.88～＜240.06 μm2時(shí)最高，食管癌患者占比在TAP截?cái)嘀担?81.79 μm2時(shí)最高，胃癌患者占比在TAP截?cái)嘀到橛?240.06～281.79 μm2時(shí)最高（P＜0.05），見表4。不同TAP截?cái)嘀蹬挪镚ITs的流程見圖3。

圖3 不同異常糖鏈糖蛋白（TAP）截?cái)嘀蹬挪橄滥[瘤（GITs）的流程

表4 不同TAP截?cái)嘀捣秶黝愋蛺盒訥ITs發(fā)生率比較[例（%）]

2.6 不同分期惡性GITs患者TAP表達(dá)水平比較 不同分期惡性GITs患者TAP表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨著腫瘤T分期的遞增，TAP表達(dá)水平逐漸升高（P＜0.05）。見表5。

表5 不同分期惡性GITs患者TAP表達(dá)水平比較（μm2）

3 討論

目前我國(guó)惡性GITs的診斷金標(biāo)準(zhǔn)為病理學(xué)檢查，但其具有有創(chuàng)性，適用對(duì)象為高風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象，不適用于大樣本人群排查；內(nèi)窺鏡、影像學(xué)具有直觀、無(wú)創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，但消化道腫瘤種類較多，需進(jìn)行多項(xiàng)檢查，流程繁瑣，成本較高；腫瘤標(biāo)志物是近年來(lái)篩查癌癥的一種重要手段，其價(jià)值已被大量臨床實(shí)踐證實(shí)，如癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原724等，但不同腫瘤類型可能腫瘤標(biāo)志物不同，臨床應(yīng)用受限，因此研究其他有效腫瘤標(biāo)志物意義重大[7-8]。

細(xì)胞惡變過程中，修飾蛋白質(zhì)的糖鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生異常改變，即異常糖基化，主要表現(xiàn)為異位合成、糖鏈合成不全、隱蔽糖鏈的暴露等，從而產(chǎn)生TAP，當(dāng)惡變細(xì)胞接近108個(gè)時(shí)，產(chǎn)生的TAP可釋放入血即被檢測(cè)到，因此能在早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤[9-12]。祁潔等[13]研究結(jié)果顯示，TAP在乳腺癌患者中陽(yáng)性率為83.02%，明顯高于健康人群的0%，提示TAP可能有助于惡性腫瘤的診斷。但關(guān)于TAP不同截?cái)嘀蹬挪镚ITs效能的報(bào)道鮮見，本研究首次對(duì)此進(jìn)行探討顯示，當(dāng)截?cái)嘀禐?21 μm2時(shí)，TAP診斷惡性GITs的靈敏度為89.35%，特異度為85.36%，準(zhǔn)確率為86.24%，可為臨床診斷惡性GITs提供量化參考。Sun等[14]報(bào)道指出，TAP以121 μm2為分界劃分陽(yáng)性與陰性的標(biāo)準(zhǔn)，在結(jié)腸炎、結(jié)腸息肉與結(jié)腸腺癌中，TAP的陽(yáng)性表達(dá)分別為6.76%和92%，可用于篩查消化道癌前病變，從側(cè)面佐證了本研究的觀點(diǎn)。糖基化修飾的改變?cè)谔腔复呋逻M(jìn)行，產(chǎn)生不同的聚糖并分布于細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞表面是細(xì)胞相互接觸的第一環(huán)節(jié)，故癌癥狀態(tài)下糖鏈的改變較蛋白質(zhì)更為顯著，高表達(dá)的TAP與惡性GITs息息相關(guān)，呈現(xiàn)出較高的排查效能[15-18]。且隨著腫瘤T分期的遞增，TAP表達(dá)水平逐漸升高，提示TAP與惡性GITs分期有關(guān)，TAP表達(dá)水平越高，腫瘤T分期越晚。

食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌是惡性GITs的常見類型，現(xiàn)階段關(guān)于TAP排查不同類型GITs截?cái)嘀蹬c效能的價(jià)值尚不明確。本研究結(jié)果顯示，TAP鑒別食管癌的AUC＞胃癌＞結(jié)直腸癌，截?cái)嘀捣謩e為＞281.79、240.06、221.88 μm2，可為臨床區(qū)分不同類型惡性GITs提供循證支持與客觀參考。為驗(yàn)證以上結(jié)果的可靠性，本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者占比在TAP介于221.88～＜240.06 μm2時(shí)最高，食管癌患者占比在TAP＞281.79 μm2時(shí)最高，胃癌患者占比在TAP介于240.06～281.79 μm2時(shí)最高，佐證了ROC分析獲得的截?cái)嘀稻哂锌尚哦扰c臨床實(shí)際參考價(jià)值，但受限于本研究觀點(diǎn)的新穎性，仍需后續(xù)深入研究的進(jìn)一步證實(shí)。此外本研究不足之處在于為回顧性研究，納入的惡性GITs包括常見且整體預(yù)后較差的食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌，雖然初步形成了不同TAP截?cái)嘀蹬挪镚ITs的效能及流程，可為臨床提供重要的參考價(jià)值，但未納入胰腺癌等消化系統(tǒng)腫瘤，排查胰腺癌等腫瘤的截?cái)嘀蹬c效能仍有待后續(xù)的研究；且關(guān)于TAP表達(dá)水平與癌胚抗原、糖類抗原125等常規(guī)血清腫瘤標(biāo)志物等表達(dá)水平的關(guān)系尚不明確，亦有待后續(xù)的進(jìn)一步探討。

綜上所述，本研究結(jié)果提示，當(dāng)截?cái)嘀禐?21 μm2時(shí)，TAP排查惡性GITs的效能較高，且TAP＞281.79、240.06、221.88 μm2時(shí)，可為臨床鑒別不同類型惡性GITs提供量化參考。