無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測應(yīng)用于胎兒染色體非整倍體篩查中的價值研究

鄭敏華 謝潤桂 婁季武

胎兒染色體非整倍體是一種染色體異常,是由一個或者多個染色體丟失或者增加導(dǎo)致的疾?。?］。常見的有唐氏綜合征、Turner 綜合征等,臨床上患者的智力、身材、生理功能都會產(chǎn)生異常。因此對于該病主要是預(yù)防為主,進行產(chǎn)前檢查,勸導(dǎo)孕婦對于染色體非整倍體胎兒進行引產(chǎn),從根源上減少遺傳病的發(fā)生率。非整倍體染色體異常產(chǎn)前篩查檢查的目的是通過化驗孕婦的血液,來判斷胎兒患病的危險程度,如果結(jié)果顯示高風險,就應(yīng)進行確診性的檢查。研究表明［2］,NIPT相比較傳統(tǒng)檢測方法,具有無創(chuàng)、高度敏感的優(yōu)點,能夠大大降低侵入性診斷造成的流產(chǎn)、感染等影響,保證檢測結(jié)果的準確率。為研究NIPT 應(yīng)用于胎兒染色體非整倍體篩查中的價值,本院共選取4500 例孕婦進行研究,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～2019 年1 月4500 例于本院行NIPT 的孕婦。年齡23～48 歲,平均年齡(27.56±6.32)歲；體重47～96 kg,平均體重(63.45±10.85)kg；孕周13～35 周,平均孕周(16.23±3.32)周；孕次1～6 次,平均孕次(2.5±1.2)次。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ①年齡23～48 歲；②孕12～32 周；③孕20 周以上,錯過血清學篩查最佳時間,但要求評估21 三體綜合征、18 三體綜合征、13 三體綜合征風險者［3］；④患者及家屬簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 ①孕周<12 周；②夫婦一方有明顯的染色體異常；③1 年內(nèi)接受過異體輸血、移植手術(shù)、異體細胞治療等；④胎兒超聲檢查提示有結(jié)構(gòu)異常須進行產(chǎn)前診斷；⑤有基因遺傳病家族史或提示胎兒罹患遺傳基因高風險；⑥孕期合并惡性腫瘤；⑦醫(yī)師認為有明顯影響結(jié)果準確性的其他情形［3］。

1.3 方法

1.3.1 標本制備 抽取孕婦外周血5 ml 于EDTA-K2抗凝管中,2～8℃環(huán)境下保存,要求8 h 內(nèi)用4℃冷凍離心機H2050R(廈門市寶能科技有限公司)離心10 min分裝分離血漿-20℃保存?zhèn)溆?提取DNA。

1.3.2 NIPT 檢測 用PCR 擴增儀9902(ABI)擴增、BES4000 高通量基因測序儀(博奧生物)通過實時檢測DNA 復(fù)制時產(chǎn)生的H+離子流導(dǎo)致的pH 值變化,從而得到堿基序列,再以無創(chuàng)產(chǎn)前數(shù)據(jù)分析軟件(博奧生物)獲得23 對染色體的Z 值進行結(jié)果判讀。

1.3.3 染色體核型分析 以羊水培養(yǎng)基(廣州和能生物)作細胞培養(yǎng),以英國GSL-120 全自動染色體掃描平臺行染色體核型分析。

1.4 觀察指標 NTPT 檢測、染色體核型分析結(jié)果。染色體異常有T21、T18、T13、性染色體異常、7 號染色體異常、其他染色體異常、微重復(fù)、微缺失。

2 結(jié)果

2.1 NTPT 檢測 共檢出81 例(1.80%)高風險,包括T21 19 例(0.42%),T18 5 例(0.11%),T13 4 例(0.09%),性染色體異常19 例(0.42%),7 號染色體異常5 例(0.11%),其他染色體異常11 例(0.24%),微重復(fù)、微缺失18 例(0.40%)。見表1。

表1 NTPT 檢測［n(%)］

2.2 染色體核型分析 81 例高風險孕婦,其中71 例經(jīng)產(chǎn)前診斷,確診T21 16 例,T18 4 例,T13 3 例,性染色體異常9 例,7 號染色體異常2 例,其他染色體異常3 例,微重復(fù)、微缺失8 例。陽性預(yù)測值分別為T21：88.89%,T18：80.00%,T13：75.00%,性染色體異常：56.25%,7 號染色體異常：50.00%,其他染色體異常：30.00%,微重復(fù)、微缺失：57.14%。見表2。

表2 染色體核型分析(n,%)

3 討論

近些年來外界環(huán)境的變化,輻射、化學物質(zhì)、藥物等因素都會造成胎兒染色體非整倍體的發(fā)生率逐年增高。研究表明［4］,年齡也是其中重要的因素,近年來,隨著高齡產(chǎn)婦的不斷增多,胎兒染色體非整倍體的發(fā)生率在高齡產(chǎn)婦中較高。胎兒出現(xiàn)染色體非整倍數(shù)將會導(dǎo)致各種遺傳病的發(fā)生。常會涉及全身各個系統(tǒng),導(dǎo)致結(jié)構(gòu)畸形、組織和器官功能障礙,病死率和殘疾率均較高［5］。對于胎兒染色體非整倍體,進行產(chǎn)前篩查,及時發(fā)現(xiàn)此病,勸導(dǎo)孕婦進行引產(chǎn),減少畸形胎兒的出生是極其重要的。

產(chǎn)前診斷是指根據(jù)特定的遺傳性疾病或者先天缺陷,可用不同的產(chǎn)前診斷方法進行診斷,篩查出胎兒是否患有染色體異常疾?。?］。NIPT 是應(yīng)用高通量基因測序等分子生物學技術(shù)檢測孕婦外周血中胎兒游離DNA片段,以評估胎兒常見染色體非整倍體(T21、T18、T13)風險的一種產(chǎn)前篩查方式,其對胎兒染色體非整倍體疾病的篩查具有重要意義［7-10］。

本次結(jié)果中陽性預(yù)測值分別是T21：88.89%,T18：80.00%,T13：75.00%,性染色體異常：56.25%,7 號染色體異常：50.00%,其他染色體異常：30.00%,微重復(fù)、微缺失：57.14%。NIPT 對T21、T18、T13 的陽性預(yù)測值較高,對性染色體異常,7 號染色體異常及其他染色體異常,微重復(fù)、微缺失的陽性預(yù)測值偏低,假陽性的例數(shù)較多。與文獻報道相符合［11］。這些數(shù)據(jù)都證明了NTPT 對于染色體非整倍體具有較高的檢出率,可降低患有染色體異常胎兒的出生率,提升新生兒質(zhì)量水平。相關(guān)文獻［12］中也證實了,NTPT 可以有效篩查出染色體非整倍體,減少畸形胎兒、患有染色體異常遺傳病胎兒的出生,減輕其帶給家庭和社會的經(jīng)濟負擔和精神痛苦。因此,NIPT 的應(yīng)用會對產(chǎn)前檢測工作作出極大的貢獻。

綜上所述,NIPT 對于胎兒染色體非整倍體篩查有理想的檢出率,可降低胎兒缺陷性疾病的發(fā)生,值得推廣。