SPE-HPLC法測定雷公藤半成品及制劑中四種成分的含量

肖安菊，龔達林，劉三波，余 浩，喻 昕

（1.湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 黃石 435003；2.華潤三九（黃石）藥業(yè)有限公司，湖北 黃石 435004）

雷公藤片、雷公藤多苷片為衛(wèi)矛科木質(zhì)藤本植物雷公藤（Tripterygium wilfordiiHook.f.）的根或根的去皮部位經(jīng)醋酸乙酯提取后制成的片劑。原藥品標準采用中性氧化鋁柱純化后［1］，采用HPLC法測定雷公藤片中雷公藤甲素的含量。大多數(shù)有關(guān)雷公藤藥材或制劑中主要成分含量測定也較多采用中性氧化鋁柱或硅膠柱純化方法［2-4］。為有效地控制雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量，建立了SPE-HPLC法同時測定雷公藤片中雷公藤甲素、雷公藤紅素、去甲澤拉木醛和雷公藤內(nèi)酯甲的含量，經(jīng)檢測其分離較好、檢測靈敏度高，可作為雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量控制方法。

1 材料與方法

1.1 藥品

雷公藤半成品（干浸膏、三批）、雷公藤片（批號18080022、19010012、1910001Z）均由華潤三九（黃石）藥業(yè)有限公司提供；雷公藤多苷片購自浙江德恩得制藥有限公司（批號1901114B、1903126B、1903127B），江蘇美通制藥有限公司（批號190202、171201、190403），上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司（批號160703、180803、190102）。

1.2 試劑

甲醇（HPLC級）、乙腈（HPLC級）、磷酸（HPLC級），德國Fisher公司；三乙胺（HPLC級），德國默克公司；雷公藤甲素（111567-201404，ID：H6RJ-8PRY）、雷公藤紅素（111946-201501，ID：YD5C-3WSR），中國食品藥品檢驗研究院；去甲澤拉木醛（CAS：107316-88-1，Lot：AF8121402）、雷公藤內(nèi)酯甲（CAS：84104-71-2，Lot：AF8010505）標準品，成都埃法生物科技有限公司；甲醇（分析純），上海展云化工有限公司。

1.3 儀器

UltiMate3000型高效液相色譜儀（包括四元泵、全自動進樣儀、DAD檢測器，美國Thermo Scientific公司），NAI-FXCQY-24型固相萃取儀（上海那艾精密儀器有限公司），BRP型固相萃取柱（月旭科技（上海）股份有限公司），SB-25-12DT型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司），RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），F(xiàn)A2204C型萬分之一電子天平（上海越平科學(xué)儀器制造有限公司），MS205DU型十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件 色譜柱Kromecil C18柱，柱溫30℃，流速1 mL/min，檢測波長218、410、210 nm，流動相見表1。

表1 雷公藤半成品、制劑使用的流動相

1.4.2 供試品溶液的制備

1）雷公藤半成品供試液的制備。精密稱取干浸膏0.05 g，加甲醇8 mL，30℃超聲20 min使溶解，加100μL三乙胺，加甲醇溶液定容。過BRP柱［5］（預(yù)先用3 mL甲醇溶液和3 mL水活化），用10 mL乙酸乙酯∶甲醇混合液（10∶5）洗脫，洗脫液40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，甲醇溶解，于10 mL容量瓶中定容，即得供試品溶液。

2）雷公藤制劑供試液的制備。取雷公藤制劑20粒，精密稱重，研磨成細粉，取0.5 g，精密稱定，濾紙包裹，置于具塞廣口瓶中，加30 mL甲醇溶液，50 Hz超聲30 min，重復(fù)3次，合并提取液，于80℃水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，并入10 mL容量瓶中，加100μL三乙胺，后同雷公藤半成品供試液的制備步驟，即得供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系結(jié)果

分別取適量4種標準品，置于4個10 mL容量瓶中，加入甲醇溶液分別制成濃度為0.099 0 mg/mL雷公藤甲素、0.995 0 mg/mL雷公藤紅素、0.214 0 mg/mL去甲澤拉木醛、0.158 0 mg/mL內(nèi)酯甲的單標貯備液。分別取各單標貯備液適量，梯度濃度稀釋進樣檢測，回歸方程和線性范圍如表2。對照品及樣品的色譜圖見圖1。

圖1 4種成分對照品圖譜和樣品圖譜

表2 4種成分的標準曲線方程及線性范圍

2.2 精密度試驗結(jié)果

精密稱定雷公藤多苷片粉末0.5 g進行色譜檢測，連續(xù)進樣5次。結(jié)果表明，雷公藤甲素RSD為2.68%、去甲澤拉木醛RSD為1.55%、雷公藤紅素RSD為1.94%、雷公藤內(nèi)酯甲RSD為3.21%。

2.3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

于0、4、8、24、48 h進樣測定5次。結(jié)果表明，雷公藤甲素RSD為5.89%、去甲澤拉木醛RSD為4.36%、雷公藤紅素RSD為2.14%、雷公藤內(nèi)酯甲RSD為3.27%。

2.4 加樣回收試驗結(jié)果

精密稱定6份雷公藤多苷片粉末各0.5 g，按照樣品中雷公藤甲素含量的80%、100%、120%加入4種成分的混合標準溶液（含雷公藤甲素0.100 8 mg/mL、雷公藤紅素0.194 2 mg/mL、去甲澤拉木醛0.195 2 mg/mL、雷公藤內(nèi)酯甲0.051 9 mg/mL）進樣檢測，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗結(jié)果

2.5 樣品含量測定結(jié)果

2.5.1 雷公藤半成品含量測定 精密稱定3份雷公藤干浸膏各0.05 g，進樣檢測，結(jié)果見表4。

表4 雷公藤浸膏中4種成分含量測定結(jié)果（單位：mg/g）

2.5.2 雷公藤制劑含量測定 分別稱取3份雷公藤片、雷公藤多苷片各批號樣品，進樣檢測，結(jié)果見表5。

表5 雷公藤制劑中4種成分含量測定結(jié)果 （單位：mg/g）

3 小結(jié)與討論

雷公藤片、雷公藤多苷片使用藥材部位不同（分別是雷公藤根、去皮根），4種成分的含量差異較大，即使是同種產(chǎn)品，不同廠家的產(chǎn)品4種成分之間也有差異。除去甲澤拉木醛毒性相對較小外［6，7］，其他3種成分都有較強的毒性［8，9］，制劑中僅控制雷公藤甲素的含量，不足以有效控制制劑的不良反應(yīng)。本研究利用固相萃取純化技術(shù)代替了傳統(tǒng)手工純化，重現(xiàn)性更好。省時省力，可作為雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量控制方法。

致謝：特別感謝浙江德恩得制藥有限公司銷售經(jīng)理為本研究提供雷公藤多苷片。