抗菌肽對仔豬免疫功能和豬瘟疫苗免疫效果的影響

王生梅

（青海省海北州海晏縣三角城鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，青海海晏812299）

飼料“禁抗”“替抗”大勢已定，當(dāng)前研發(fā)并推廣應(yīng)用具有綠色、安全、無毒或低毒、高效、廣譜的抗菌制劑逐步成為飼料行業(yè)乃至整個養(yǎng)殖行業(yè)的熱點與重點?？咕挠址Q抗微生物肽，是生物機(jī)體在抵抗外來致病原過程中產(chǎn)生的一類防御性小肽，其與干擾素、補(bǔ)體等共同組成了機(jī)體的免疫防御系統(tǒng)（鄧贛奇等，2020）?？咕膶?xì)菌、病毒、真菌、支原體、寄生蟲等均有一定的抵抗和殺傷作用，還具有調(diào)節(jié)免疫，抑制腫瘤、信號分子等生物活性功能（陳晨，2020；唐謝芳等，2020）。抗菌肽作為飼料添加劑具有抗菌譜廣、不易產(chǎn)生耐藥性、穩(wěn)定性好、水溶性好、安全環(huán)保等優(yōu)勢，是目前替代抗生素的理想抗菌劑之一（孟德梅等，2019；李云香等2019）。

當(dāng)前抗菌肽在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的研究和應(yīng)用已較多，梁秀麗等（2020）研究表明，抗菌肽的添加提高了初生仔豬的生長性能，降低了腹瀉率，促進(jìn)了小腸形態(tài)發(fā)育，改善了盲腸微生物菌群；李平等（2019）研究表明，抗菌肽能夠提高斷奶仔豬生長性能，提高營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，改善絨毛形態(tài)，降低糞中有害菌含量；陳張華等（2017）研究表明，抗菌肽可增加斷奶仔豬腸道乳酸桿菌的數(shù)量，降低大腸桿菌數(shù)量，提高斷奶仔豬腸道功能；徐雅萍等（2018）研究表明，抗菌肽能夠提高斷奶仔豬生長性能，降低腹瀉率；李瑞等（2018）研究表明，抗菌肽對育肥豬的胴體性狀和肉品質(zhì)均具有明顯的改善效果。目前抗菌肽在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用大多數(shù)集中在提高豬生產(chǎn)性能方面，對仔豬免疫功能和疫苗免疫效果的研究報道較少，故本研究全面探討了抗菌肽不同添加劑量對仔豬免疫功能和豬瘟疫苗免疫效果的影響，為提高仔豬免疫力和健康水平提供一種技術(shù)方法，為抗菌肽在仔豬生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 抗菌肽購自杭州康德權(quán)飼料有限公司；豬瘟抗體正向間接血凝檢測試劑盒購自賽諾利康生物技術(shù)（北京）有限公司；豬IgA、IgG、IgM、C3、C4、IL-2、IL-4、IFN-γELISA測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所有限公司；豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）購自云南生物制藥有限公司。

1.2 試驗分組 將60頭28日齡健康仔豬隨機(jī)分成4個處理組，每組15頭仔豬，分3欄，每欄5頭仔豬。對照組、抗菌肽Ⅰ組、抗菌肽Ⅱ組、抗菌肽Ⅲ組分別在飼糧中添加0%、0.05%、0.1%、0.2%抗菌肽。所有仔豬在28日齡均免疫接種豬瘟活疫苗1.2頭份。試驗期為35 d，試驗期間各欄飼養(yǎng)管理方法均完全一致。

1.3 檢測樣品的采集

1.3.1 血清樣品的采集 試驗結(jié)束時，利用5.0 mL注射器于仔豬的前腔靜脈處采集血液3～4 mL，常規(guī)方法分離血清，所有試驗仔豬均采集血清樣品。

1.3.2 免疫器官的采集 血液采集完成后，從每欄中隨機(jī)選擇2頭仔豬進(jìn)行屠宰，即每組屠宰6頭仔豬。摘取屠宰仔豬的肝臟、脾臟、胸腺，分別稱重。

1.4 指標(biāo)的測定及方法

1.4.1 免疫器官指數(shù)的測定 根據(jù)肝臟、脾臟、胸腺重量，分別計算肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量/仔豬宰前體重。

1.4.2 免疫球蛋白含量的測定 采用豬IgG、IgA、IgM ELISA測定試劑盒分別測定仔豬血清樣品中IgG、IgA和IgM含量。

1.4.3 補(bǔ)體含量的測定 采用豬C3、C4 ELISA測定試劑盒分別測定仔豬血清樣品中的C3和C4含量。

1.4.4 細(xì)胞因子含量的測定 采用豬IL-2、IL-4、IFN-γELISA測定試劑盒分別測定仔豬血清樣品中的IL-2、IL-4和IFN-γ含量。

1.4.5 豬瘟抗體效價的測定 采用豬瘟抗體正向間接血凝檢測試劑盒分別測定仔豬血清樣品中的豬瘟抗體效價（Log2）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫器官指數(shù)的測定結(jié)果 如表1所示，抗菌肽Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組脾臟指數(shù)分別較對照組提高7.48%、13.08%、14.49%（P＜0.05），抗菌肽Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組胸腺指數(shù)分別較對照組提高5.42%、6.63%、7.83%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組脾臟指數(shù)分別較抗菌肽Ⅰ組提高5.22%、6.52%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組與Ⅲ組之間各測定指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。仔豬飼糧中添加不同劑量的抗菌肽均能提高免疫器官指數(shù)，0.05%添加劑量的作用效果沒有0.1%和0.2%添加劑量的作用效果顯著，0.1%添加劑量與0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。

表1 免疫器官指數(shù)的測定結(jié)果g/kg

2.2 免疫球蛋白含量的測定結(jié)果 如表2所示，抗菌肽Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IgG含量分別較對照組提高14.27%、24.07%、24.15%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組IgA含量分別較對照組提高10.70%、12.44%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組IgG含量分別較抗菌肽Ⅰ組提高8.57%、8.64%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組與Ⅲ組之間各測定指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。仔豬飼糧中添加不同劑量的抗菌肽均能提高免疫球蛋白含量，0.05%添加劑量的作用效果沒有0.1%和0.2%添加劑量顯著，0.1%添加劑量與0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。

表2 免疫球蛋白含量的測定結(jié)果g/L

2.3 補(bǔ)體含量的測定結(jié)果 如表3所示，抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組C4含量分別較對照組提高10.21%、11.30%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組C4含量分別較抗菌肽Ⅰ組提高9.03%、10.10%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組與Ⅲ組之間各測定指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。仔豬飼糧中添加0.1%和0.2%的抗菌肽均能提高補(bǔ)體含量，0.1%添加劑量與0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。

表3 補(bǔ)體含量的測定結(jié)果mg/L

2.4 細(xì)胞因子含量的測定結(jié)果 如表4所示，抗菌肽Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組IL-2含量分別較對照組提高2.97%、5.75%、7.09%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組IL-4含量分別較對照組提高3.83%、4.35%（P＜0.05），抗菌肽Ⅲ組IFN-γ含量較對照組提高1.86%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組IL-2含量分別較抗菌肽Ⅰ組提高2.71%、4.00%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組與Ⅲ組之間各測定指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。仔豬飼糧中添加不同劑量的抗菌肽均能提高細(xì)胞因子含量，0.05%添加劑量效果沒有0.1%和0.2%添加劑量顯著，0.1%添加劑量與0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。

表4 細(xì)胞因子含量的測定結(jié)果 ng/L

2.5 豬瘟抗體效價的測定結(jié)果 如表5所示，抗菌肽Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組豬瘟抗體效價分別較對照組提高20.66%、34.00%、37.66%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組、Ⅲ組豬瘟抗體效價分別較抗菌肽Ⅰ組提高11.06%、14.09%（P＜0.05），抗菌肽Ⅱ組與抗菌肽Ⅲ組之間豬瘟抗體效價差異不顯著（P＞0.05）。仔豬飼糧中添加不同劑量的抗菌肽均能提高豬瘟抗體效價，0.05%添加劑量的作用效果沒有0.1%和0.2%添加劑量顯著，0.1%添加劑量與0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。

表5 豬瘟抗體效價的測定結(jié)果Log2

3 討論

3.1 抗菌肽對仔豬免疫功能的影響 免疫器官指數(shù)是評價動物機(jī)體免疫器官發(fā)育狀態(tài)及免疫機(jī)能強(qiáng)弱的常用生物學(xué)檢測指標(biāo)（初歡歡等，2016），肝臟是除胸腺以外T細(xì)胞分化的最主要場所，直接參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)，是機(jī)體極其重要的免疫器官；脾臟含有大量的淋巴細(xì)胞，是免疫細(xì)胞產(chǎn)生、分化、成熟的主要場所，是機(jī)體最大的外周免疫器官；胸腺是周圍淋巴器官正常發(fā)育的主要場所，是重要的中樞淋巴器官。免疫球蛋白在機(jī)體的體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮其特有的作用，主要包括IgA、IgG和IgM（陳國福等，2020）。補(bǔ)體直接反映抗體清除病原菌的能力，主要包括C3和C4（雷春龍等，2019）。細(xì)胞因子是一類調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能的小分子多肽（陳麗玲等，2020），IL-2主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長、增殖和分化，對機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)和抵抗致病原感染發(fā)揮重要作用；IL-4能夠促進(jìn)B細(xì)胞分裂增殖，促進(jìn)TC細(xì)胞的活性，刺激巨噬細(xì)胞增殖和增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性；IFN-γ能夠增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，提高巨噬細(xì)胞溶酶體活性。因此，本研究分別選擇肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和IgA、IgG、IgM、C3、C4、IL-2、IL-4、IFN-γ含量，從免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白含量、補(bǔ)體含量、細(xì)胞因子含量方面全面研究抗菌肽不同添加劑量對仔豬免疫功能的影響，結(jié)果顯示，抗菌肽不同添加劑量均能夠提高斷奶仔豬的免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白含量、補(bǔ)體含量和細(xì)胞因子含量。表明抗菌肽不僅能促進(jìn)仔豬免疫器官的發(fā)育，還可以對免疫球蛋白進(jìn)行調(diào)控，促進(jìn)免疫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化激活，對機(jī)體特異性免疫進(jìn)行激活，使免疫細(xì)胞增殖能力、機(jī)體抗感染力和機(jī)體免疫力處于最優(yōu)水平，提高仔豬的免疫功能。

3.2 抗菌肽對豬瘟疫苗免疫效果的影響 豬瘟一直是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一，多年來我國一直采取以疫苗免疫為主的綜合防控措施，有效控制了豬瘟的大規(guī)模流行，但受到斷奶應(yīng)激等因素影響，仔豬的豬瘟疫苗免疫失敗現(xiàn)象時有發(fā)生，嚴(yán)重降低了豬瘟疫苗的免疫效果。疫苗免疫后的免疫抗體水平監(jiān)測是評價疫苗免疫效果最直觀、最有效、最直接的方法（趙霞等，2015）。鑒于此，本研究通過檢測豬瘟抗體效價，探討了抗菌肽不同添加劑量對仔豬豬瘟疫苗免疫效果的影響，旨在為提高豬瘟疫苗的免疫效果找到一種方法。結(jié)果顯示，抗菌肽不同添加劑量均能提高豬瘟疫苗免疫效果，但0.05%添加劑量的作用效果沒有0.1%和0.2%添加劑量的作用效果顯著，0.1%添加劑量的作用效果和0.2%添加劑量的作用效果無顯著性差異。對于抗菌肽能夠提高豬瘟疫苗免疫效果的原因，可能是由于抗菌肽可以有效調(diào)節(jié)仔豬的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，促進(jìn)豬瘟疫苗在仔豬體內(nèi)的免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生大量的豬瘟抗體，因此可以提高豬瘟疫苗免疫抗體水平，同時抗菌肽對仔豬發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用需要的添加劑量具有一個限量，超過這個限量，多余劑量的抗菌肽很難被仔豬吸收，綜合考慮到抗菌肽的添加成本，在本研究中選擇0.1%作為臨床使用劑量。

4 結(jié)論

仔豬飼糧中添加0.1%、0.2%抗菌肽均能夠提高仔豬的免疫功能和豬瘟疫苗免疫效果，綜合考慮，可選擇臨床使用劑量為0.1%。