基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討芪參益氣滴丸改善心肌缺血再灌注損傷的潛在分子機(jī)制*

王建茹，朱明軍，王永霞，彭廣操

河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000

《中國(guó)心血管病報(bào)告2018》顯示，我國(guó)心血管病患者多達(dá)2.9億，防治心血管病給我國(guó)帶來(lái)了嚴(yán)重的社會(huì)和醫(yī)療資源負(fù)擔(dān)［1］。急性心肌梗死（Acute myocardial infarction，AMI）是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的一種急危重表現(xiàn)。近幾十年來(lái)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和生活方式的巨大變化，AMI急劇增加，已成為我國(guó)居民住院和死亡的主要原因［2］。早期快速恢復(fù)冠狀動(dòng)脈血流可減少心肌梗死的面積，防止進(jìn)一步組織損傷。溶栓、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（percutaneous coronary intervention，PCI）等再灌注策略的發(fā)展，極大降低了AMI后短期的病死率，但卻增加了心肌缺血再灌注損傷（myocardium ischemia-reperfusion injury，MIRI）的發(fā)病率，加重了心臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷，最終可引起多種不良心血管結(jié)局［3］。因此，積極發(fā)掘有效延緩或逆轉(zhuǎn)MIRI的措施，具有十分重要的臨床和社會(huì)意義，一直是心血管領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。

中藥復(fù)方具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑和多效應(yīng)的特點(diǎn)，在治療疾病方面表現(xiàn)出療效確切、不良反應(yīng)小的優(yōu)勢(shì)，但其作用機(jī)制研究是一直以來(lái)的重點(diǎn)和難點(diǎn)［4］?，F(xiàn)階段，研究中藥對(duì)某種疾病的作用機(jī)制，很難進(jìn)行系統(tǒng)全面的研究，大多從單靶點(diǎn)或單一通路切入。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)因具有整體性和系統(tǒng)性的特點(diǎn)，迎合中醫(yī)學(xué)的整體觀(guān)念，能更好地闡釋中藥復(fù)方治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)和潛在作用機(jī)制，已成為研究中藥的新技術(shù)方法，并產(chǎn)生了一系列新的研究數(shù)據(jù)和成果［5］。分子對(duì)接技術(shù)作為一種廣泛使用的虛擬篩選方法，可研究小分子配體與受體間的相互作用，預(yù)測(cè)其結(jié)合模式及親和力［6］?，F(xiàn)階段，多項(xiàng)研究均采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討中藥治療某種疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，并確定了這些技術(shù)方法的科學(xué)性和可行性［7-8］。芪參益氣滴丸包括黃芪、丹參、三七和降香4味藥，具有益氣通脈，活血止痛的作用。目前，芪參益氣滴丸在臨床上已廣泛用于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、心力衰竭、PCI術(shù)后心肌損傷等多種心血管疾病的治療，并表現(xiàn)出了良好的臨床應(yīng)用前景，但其生物分子機(jī)制尚需深入的探索研究［9-11］。

基于以上認(rèn)識(shí)，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)，揭示芪參益氣滴丸改善MIRI的有效活性成分和潛在分子機(jī)制，以期為后續(xù)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究提供新的研究思路，為臨床研究提供一定的客觀(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）；PubChem數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）；Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//swisstargetprediction.ch/）；GenCLiP 3數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//ci.smu.edu.cn/genclip3/analysis.php）；GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）；OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.omim.org/）；Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org/）；STRING數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//string-db.org/）；Veney 2.1軟件；Cytoscape 3.7.2軟件；R 3.6.1軟件；PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.rcsb.org/pdb/）；PyMOL 2.2.0軟件；ChemBioDraw 2014軟件；Discovery Studio 4.5軟件；Autodock vina1.1.2軟件；Autodock Tools 1.5.6軟件等。

1.2 方法

1.2.1 獲取并篩選芪參益氣滴丸中相關(guān)化學(xué)成分及作用靶點(diǎn)在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中收集芪參益氣滴丸中黃芪、丹參、三七、降香的全部化學(xué)成分，收集相應(yīng)化合物的預(yù)測(cè)作用靶點(diǎn)?？诜锢枚龋╫ral bioavailability，OB）是藥物成分毒藥物動(dòng)力學(xué)（absorption and distribution and metabolism and excretion，ADME）屬性中最重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之一，代表口服藥物的有效成分到達(dá)人體循環(huán)系統(tǒng)的速度和程度，是評(píng)價(jià)藥物能否發(fā)揮藥效的重要指標(biāo)。類(lèi)藥性（drug likeness，DL）代表化合物成分與已知化學(xué)藥的相似性，對(duì)確定中藥成分是否對(duì)機(jī)體產(chǎn)生活性具有重要參考價(jià)值，DL值越高提示化合物的理化性質(zhì)越穩(wěn)定，藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)越好。本研究將OB≥30%和DL≥0.18作為條件進(jìn)行篩選［8，12-14］。同時(shí)，在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索獲取的芪參益氣滴丸所有活性成分的Canonical SMILES結(jié)構(gòu)。然后，在Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)芪參益氣滴丸活性成分的作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，并以概率≥0.3為閾值進(jìn)行靶點(diǎn)篩選。

1.2.2 篩選與MIRI相關(guān)作用靶點(diǎn)在Gene-Cards、OMIM、GenCLiP 3數(shù)據(jù)庫(kù)中輸入關(guān)鍵詞心肌缺血再灌注損傷的英文名稱(chēng)即“myocardial ischemic reperfusion injury”；“myocardial ischemic-reperfusion injury”；“myocardial ischemia-reperfusion injury”；“myocardial ischemia reperfusion injury”檢索已報(bào)道的與MIRI相關(guān)的靶點(diǎn)。

1.2.3 獲取芪參益氣滴丸-MIRI共同作用靶點(diǎn)利用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)所有作用靶點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范。將芪參益氣滴丸中所有活性成分的作用靶點(diǎn)與MIRI相關(guān)作用靶點(diǎn)導(dǎo)入Veney 2.1軟件中取交集，獲取芪參益氣滴丸-MIRI共同作用靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖。

1.2.4 構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)并篩選核心靶點(diǎn)將1.2.3項(xiàng)下得到的共同靶點(diǎn)上傳至STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中，互作得分設(shè)置為最高置信度≥0.900，進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）分析，并將結(jié)果保存為tsv格式。將導(dǎo)出的tsv文件中的node1、node2和combined score信息導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件中繪制PPI網(wǎng)絡(luò)，用Network Analyzer工具進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析，利用Generate style from statistics工具對(duì)節(jié)點(diǎn)大小和顏色進(jìn)行設(shè)置用于反映度值的大小，對(duì)邊的粗細(xì)進(jìn)行設(shè)置用于反映Combine score的大小。將select選項(xiàng)下Node：degree的最小值設(shè)置為平均自由度的2倍，篩選核心靶點(diǎn)，最后選取新的核心PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.2.5 核心靶點(diǎn)富集分析利用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)將1.2.4項(xiàng)下篩選出的核心靶點(diǎn)的Uniprot號(hào)轉(zhuǎn)換為entrez號(hào)。在R語(yǔ)言的環(huán)境下，利用org.Hs.eg.db、clusterProfiler、enrichplot等R程序包對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體論（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，并繪制條形圖和氣泡圖進(jìn)行可視化。

1.2.6 中藥-成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)合已報(bào)道的文獻(xiàn)研究，篩選出前30條通路中與MIRI最相關(guān)的通路，并找出富集在這些通路上的核心靶點(diǎn)。在Excel表中分別構(gòu)建芪參益氣滴丸“中藥-活性成分”“活性成分-靶點(diǎn)”“靶點(diǎn)-通路”文件，并將以上文件輸入Cytoscape3.7.2軟件中，構(gòu)建中藥-成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)。

1.2.7 分子對(duì)接將degree排名前5位的核心靶點(diǎn)與其所對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接。首先，從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索人源核心靶點(diǎn)的PDB號(hào)并下載pdb格式的蛋白結(jié)構(gòu)，用PyMOL軟件去除蛋白結(jié)構(gòu)中的水分子、配體等，Auto dock Tools加氫，然后轉(zhuǎn)換成pdbqt格式。其次，從Chempub數(shù)據(jù)庫(kù)中下載各活性成分的分子結(jié)構(gòu)，保存為SDF格式，再用ChemBio3D進(jìn)行優(yōu)化，保存為mol2格式。最后，利用Autodock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接，獲取結(jié)合能值，對(duì)接結(jié)果采用Discovery Studio Visualizer 4.5和PyMOL軟件進(jìn)行可視化。結(jié)合能數(shù)值為負(fù)則提示活性成分與核心作用靶點(diǎn)可自由結(jié)合，數(shù)值越小說(shuō)明兩者的作用關(guān)系越可靠。本研究將＜-5 kcal·mol-1的結(jié)合能數(shù)值作為閾值，來(lái)佐證活性成分與核心靶點(diǎn)之間作用關(guān)系的可信度。

2 結(jié)果

2.1 芪參益氣滴丸化學(xué)成分及其作用靶點(diǎn)在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中以O(shè)B≥30%、DL≥0.18為條件進(jìn)行篩選，丹參獲得65個(gè)活性成分，黃芪為20個(gè)，三七為8個(gè)，降香為37個(gè)。將這130個(gè)活性成分進(jìn)行匯總剔除重復(fù)后共得到125個(gè)活性成分。將125個(gè)活性成分分別在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，剔除重復(fù)項(xiàng)后共獲得350個(gè)靶點(diǎn)。

2.2 疾病作用靶點(diǎn)從GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到1 275個(gè)靶點(diǎn)；OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到21個(gè)靶點(diǎn)；GenCLiP3數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到722個(gè)靶點(diǎn)，剔除重復(fù)項(xiàng)后共獲得1 475個(gè)與MIRI相關(guān)的作用靶點(diǎn)。

2.3 藥物-疾病作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)將芪參益氣滴丸作用靶點(diǎn)與MIRI相關(guān)作用靶點(diǎn)，經(jīng)過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后，導(dǎo)入Veney 2.1軟件中取交集并構(gòu)建韋恩圖（見(jiàn)圖1），最后共獲得181個(gè)共同作用靶點(diǎn)，即芪參益氣滴丸潛在改善MIRI的作用靶點(diǎn)。

圖1 芪參益氣滴丸-MIRI靶點(diǎn)韋恩圖

2.4 蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與核心靶點(diǎn)的篩選將181個(gè)共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行蛋白互作關(guān)系分析，再使用Cytoscape軟件繪制PPI網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)包括157個(gè)節(jié)點(diǎn)、23 260條邊，平均Degree值為10.561，然后再以平均度值的2倍（22）進(jìn)行第2次篩選，得到19個(gè)節(jié)點(diǎn)、342條邊的新的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，顏色越深、節(jié)點(diǎn)越大的圓形靶標(biāo)節(jié)點(diǎn)表示度值越高，說(shuō)明其在芪參益氣滴丸改善MIRI方面的作用越重要，其中19個(gè)節(jié)點(diǎn)即是核心作用靶點(diǎn)（見(jiàn)圖2、表1）。

圖2 芪參益氣滴丸改善MIRI共同作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表1 芪參益氣滴丸“藥物-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)中的核心靶點(diǎn)

2.5 核心靶點(diǎn)富集分析在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)中，將19個(gè)核心靶點(diǎn)的Uniprot號(hào)轉(zhuǎn)換為entrez號(hào)，然后利用R包進(jìn)行富集分析。GO功能富集分析結(jié)果顯示，依據(jù)P≤0.05確定了1 871個(gè)GO條目。生物學(xué)過(guò)程（biological process，BP）條目最多為1 763條，主要涉及DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)控、氧化應(yīng)激反應(yīng)等。分子功能（molecular function，MF）條目為77條，主要涉及磷酸酶結(jié)合、絲裂原活化蛋白激酶活性等。細(xì)胞組分條目（cellular component，CC）為31條，主要涉及核染色質(zhì)、膜筏等。圖3依據(jù)計(jì)算出的p.adjust顯著性列舉了3個(gè)模塊的前10個(gè)條目進(jìn)行可視化。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，依據(jù)P≤0.05共映射出了146條信號(hào)通路，主要有癌癥相關(guān)通路、乙型肝炎、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）信號(hào)通路、Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）信號(hào)通路等。根據(jù)通路所涉及靶點(diǎn)數(shù)目和p.adjust的顯著性選取前30條通路，以氣泡圖的形式進(jìn)行可視化，其中氣泡的大小代表該通路的靶點(diǎn)數(shù)目，氣泡顏色代表富集顯著性（見(jiàn)圖4）。

圖3 芪參益氣滴丸改善MIRI潛在核心靶點(diǎn)的GO富集分析條形圖

圖4 芪參益氣滴丸改善MIRI潛在核心靶點(diǎn)的KEGG通路富集分析氣泡圖

2.6 中藥-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建通過(guò)文獻(xiàn)收集，在富集的前30條通路中篩選出了10條可能與MIRI相關(guān)的通路，即MAPKs信號(hào)通路、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）信號(hào)通路、TLRs信號(hào)通路、低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）信號(hào)通路、ErbB信號(hào)通路、白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）信號(hào)通路、松弛素信號(hào)通路、c型凝集素受體信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、催乳激素信號(hào)通路。此外，KEGG富集分析結(jié)果中細(xì)胞凋亡、磷酸肌醇3激酶（Phosphoinositol 3 kinase，PI3K）-蘇氨酸蛋白激酶（threonine-protein kinases，AKT）信號(hào)通路、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-beta，TGF-β）信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路等雖未據(jù)前30位，但卻與MIRI的病理過(guò)程密切相關(guān)。將這10條通路與芪參益氣滴丸相應(yīng)的活性成分、作用靶點(diǎn)進(jìn)行整合，構(gòu)建中藥-成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)圖（圖5）。如圖5所示，紅色六邊形節(jié)點(diǎn)代表芪參益氣滴丸中的中藥，黃色三角形節(jié)點(diǎn)代表活性成分，藍(lán)色圓形節(jié)點(diǎn)代表潛在作用靶點(diǎn)，綠色V節(jié)點(diǎn)代表與MIRI密切相關(guān)的通路。由圖5可知，芪參益氣滴丸中的黃芪、丹參、三七、降香4味藥中的57個(gè)活性成分通過(guò)干預(yù)19個(gè)作用靶點(diǎn)參與以上10條信號(hào)通路。

圖5 芪參益氣滴丸的中藥-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 分子對(duì)接結(jié)果為了驗(yàn)證芪參益氣滴丸“中藥-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)”的預(yù)測(cè)結(jié)果，將核心作用靶點(diǎn)中度值排名前5位的靶點(diǎn)與其所對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，對(duì)接的參數(shù)設(shè)置及相應(yīng)的計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，提取出的16對(duì)“活性成分-作用靶點(diǎn)”關(guān)系中，芪參益氣滴丸的活性成分與5個(gè)核心作用靶點(diǎn)均存在不同程度的結(jié)合，結(jié)合自由能均＜-5 kcal·mol-1，提示篩選出的核心作用靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的活性成分具有良好的親和力，說(shuō)明結(jié)果具有一定的可信度。圖6為度值排名第2位的核心作用靶點(diǎn)TP53與其對(duì)應(yīng)活性成分的分子對(duì)接結(jié)果模擬圖，其中丹參酮IIA與TP53的結(jié)合能力最強(qiáng)。

圖6 TP53（1tsr）對(duì)接結(jié)果模擬圖

表2 活性成分與作用靶點(diǎn)分子對(duì)接參數(shù)及相應(yīng)計(jì)算結(jié)果

3 討論

西醫(yī)認(rèn)為，MIRI的病理過(guò)程涉及鈣超載、細(xì)胞凋亡、能量代謝障礙、氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)等［15］。近年來(lái)，諸多研究已證實(shí)中藥及其復(fù)方制劑在改善MIRI方面表現(xiàn)出了明顯的臨床優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景，其作用機(jī)制主要包括抗炎、抗氧化、抑制鈣超載、改善心肌能量代謝、抑制細(xì)胞凋亡等［16］。中醫(yī)學(xué)并沒(méi)有MIRI概念的描述和記載，鑒于MIRI為AMI行PCI術(shù)后發(fā)生的重要病理過(guò)程，且臨床常表現(xiàn)為心功能減退和心梗面積擴(kuò)大等，故可將MIRI按中醫(yī)“胸痹心痛”進(jìn)行辨證論治。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為MIRI的病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，且兩者可相兼為病，本虛表現(xiàn)為氣血陰陽(yáng)的虧虛，標(biāo)實(shí)則以血瘀、痰阻、氣滯、寒凝多見(jiàn)，其中醫(yī)辨證分型以氣虛血瘀證最為常見(jiàn)，故可從益氣活血法遣藥組方論治MIRI［17-18］。芪參益氣滴丸作為益氣活血法的代表方劑，可減少PCI術(shù)后心血管事件的發(fā)生率，減輕患者癥狀，提高其活動(dòng)能力和生活質(zhì)量，并被推薦用于冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后再狹窄、再發(fā)心絞痛和心血管事件的治療以及PCI圍手術(shù)期心肌的保護(hù)［19-21］。

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，對(duì)芪參益氣滴丸改善MIRI的藥效物質(zhì)成分和作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。結(jié)果顯示，芪參益氣滴丸中有125個(gè)活性成分分別能與181個(gè)藥物-疾病共同靶點(diǎn)發(fā)生相互作用，經(jīng)PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊蠊埠Y選出19個(gè)核心作用靶點(diǎn)。同時(shí)，利用R程序包對(duì)這些核心作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析和KEGG分析。富集分析結(jié)果顯示，芪參益氣滴丸通過(guò)在核染色質(zhì)、膜筏等部位，調(diào)控DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性、氧化應(yīng)激反應(yīng)等生物過(guò)程，發(fā)揮調(diào)節(jié)磷酸酶結(jié)合、MAP激酶活性等分子功能，達(dá)到改善MIRI的作用，涉及的信號(hào)通路主要包括MAPKs信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、PI3K-AKT信號(hào)通路、mTOR信號(hào)通路、TGF-β信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)所構(gòu)建的“中藥-成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)顯示，芪參益氣滴丸的不同活性成分可對(duì)應(yīng)同一個(gè)靶點(diǎn)，同時(shí)一個(gè)活性成分也可分別對(duì)應(yīng)多個(gè)靶點(diǎn)，繼而引發(fā)不同的生物學(xué)效應(yīng)，這表明芪參益氣滴丸在改善MIRI方面，表現(xiàn)出了多成分、多靶點(diǎn)、多效應(yīng)的特點(diǎn)。分子對(duì)接結(jié)果顯示，5個(gè)核心作用靶點(diǎn)和8個(gè)活性成分，共構(gòu)成了16組對(duì)接關(guān)系對(duì)，關(guān)系對(duì)間親和力良好，對(duì)接體系穩(wěn)定。這些結(jié)果提示，芪參益氣滴丸所含的活性成分具有調(diào)控MIRI相關(guān)靶點(diǎn)的生物活性，從側(cè)面佐證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。

研究顯示，芪參益氣滴丸的多種活性成分可通過(guò)調(diào)控自噬相關(guān)通路改善MIRI，比如丹參素通過(guò)上調(diào)mTOR信號(hào)通路對(duì)MIRI發(fā)揮保護(hù)作用［22］；丹酚酸B防治MIRI的作用機(jī)制與PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控的自噬有關(guān)［23］；人參皂苷Rg1通過(guò)激活PI3K/AKT/mTOR通 路 上 調(diào)HIF-1α改 善MIRI［24］。MAPKs信號(hào)通路介導(dǎo)MIRI病理，而芪參益氣滴丸所含的活性成分黃芪多糖和丹參素，可分別通過(guò)下調(diào)p38MAPK信號(hào)通路，抑制p-JNK的活性來(lái)改善MIRI［25-26］。有研究報(bào)道，芪參益氣滴丸的大量活性成分具有抗氧化應(yīng)激的作用，可通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路的表達(dá)水平和活性，拮抗MIRI導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡；還可降低MIRI過(guò)程中TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB等炎性因子的表達(dá)［27-28］。此外，芪參益氣滴丸能通過(guò)抑制MIRI誘導(dǎo)的TGFβ信號(hào)通路的激活，改善其導(dǎo)致的心肌纖維化程度［29］。上述其他學(xué)者的研究結(jié)果與本研究所預(yù)測(cè)的芪參益氣滴丸改善MIRI作用機(jī)制的部分結(jié)果相一致，這充分說(shuō)明本次研究結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

綜上所述，芪參益氣滴丸改善MIRI是多靶點(diǎn)、多途徑的復(fù)雜過(guò)程，本次研究結(jié)果為進(jìn)一步探討芪參益氣滴丸改善MIRI的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制提供了可能的研究方向。但由于TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和疾病數(shù)據(jù)庫(kù)的不完善以及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究自身局限性等因素的影響，本研究結(jié)果尚不能完全闡釋芪參益氣滴丸改善MIRI的生物學(xué)基礎(chǔ)，仍需后續(xù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)研究的觀(guān)察與佐證。