產(chǎn)前O型血孕婦抗體效價及IgG亞型分型聯(lián)合檢測對ABO-HDN診斷價值研究

錢永生 楊 勁 何安華

ABO血型抗體效價是指自身為O型血其丈夫?yàn)榉荗型血的孕婦，在孕期16周以上針對預(yù)防新生兒ABO新生兒溶血病（ABO-HDN）發(fā)生的一種檢測，可以用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞或者丈夫的紅細(xì)胞進(jìn)行檢測。大多數(shù)文獻(xiàn)[1-2]認(rèn)為產(chǎn)前抗體效價≥1:64為異常，異常的產(chǎn)前抗體效價可能對胎兒造成傷害[3-4]。國內(nèi)外均有文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道IgG亞型分型中的IgG1和IgG3抗體存在抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性效應(yīng)（ADCC）與IgG2和IgG4存在補(bǔ)體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性效應(yīng)（CDC）新生兒溶血病發(fā)生上有明顯的差異，可能是因?yàn)镮gG1和IgG3可以通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，發(fā)揮ADCC導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂溶血。本次研究通過用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體聯(lián)合 ABO血型抗體效價進(jìn)行綜合分析，為臨床預(yù)防、診治ABO-HDN提供參考依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月-2019年4月在本醫(yī)院產(chǎn)科門診檢測產(chǎn)前抗體效價O型血其丈夫?yàn)榉荗型血孕婦388例（本次研究使用的是丈夫紅細(xì)胞），符合入組標(biāo)準(zhǔn)的84例。84例孕婦年齡21~40歲，檢測時孕期16~30周，胎次1~2次，孕次1~4次。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) ①孕婦16~30周在我院門診產(chǎn)科檢測抗丈夫紅細(xì)胞抗體效價，同時檢測IgG1、IgG3抗體。②在我院產(chǎn)科住院生育新生兒。③孕婦在孕產(chǎn)期無重大疾?。ㄈ缒[瘤、自身免疫性疾病等），新生兒無早產(chǎn)或其他遺傳疾病。④孕婦RhD抗原為陽性，其不規(guī)則抗體為陰性。⑤孕婦產(chǎn)前24 h檢測抗丈夫效價與孕期效價變化不大于2個滴度。⑥孕期內(nèi)無服用降效價中藥。

1.3 試劑與儀器 ①試劑：抗A抗B血型正定型試劑、人ABO血型反定型紅細(xì)胞、抗體篩查紅細(xì)胞、RhD-IgM定型試劑和樣品釋放劑（2-巰基乙醇）來自上海血液生物醫(yī)藥有限公司；IgG1、IgG3抗體微柱凝膠法檢測卡、新生兒溶血檢測試劑、HDN母體IgG效價檢測卡和相關(guān)檢測質(zhì)控試劑來自長春博迅生物技術(shù)有限公司。所有試劑均在生產(chǎn)效期內(nèi)使用。②儀器：LC-10C型血庫專用離心機(jī)來自于安徽中科中佳醫(yī)用儀器公司；TD-A型卡式醫(yī)用離心機(jī)和FYQ型試劑卡孵育器來自于長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司。

1.4 方法

1.4.1 ABO血型正反定型、RhD抗原檢測、不規(guī)則抗體檢測、新生兒溶血病檢測（直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)）均嚴(yán)格按照說明書與相關(guān)規(guī)范和文獻(xiàn)進(jìn)行[7]。

1.4.2 抗丈夫紅細(xì)胞效價檢測 首先用樣本釋放劑對孕婦血漿進(jìn)行IgM滅活，滅活后用中性膠檢測IgM是否被完全滅活。再用生理鹽水將丈夫紅細(xì)胞稀釋到0.8%取50 μL，與滅活后的孕婦血漿（1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128及1:256）50 μL，加入到HDN母體IgG效價檢測卡中孵育15分鐘，離心判讀結(jié)果。

1.4.3 孕婦IgG1、IgG3抗體檢測 首先用樣本釋放劑對孕婦血漿進(jìn)行IgM滅活，滅活后用中性膠檢測IgM是否被完全滅活。在IgG分型卡中每孔分別加入濃度0.8%父親或與父親同型紅細(xì)胞懸液50 μL，再每孔分別加入滅活后血漿50 μL，用微柱凝膠孵育器37 ℃孵育15分鐘，孵育完成后用血型血清學(xué)專用離心機(jī)離心，判讀結(jié)果。

1.5 結(jié)果判讀 上述試驗(yàn)按照《免疫血液學(xué)》[8]、《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[9]進(jìn)行判讀結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（中文版）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在在診斷新生兒ABO-HDN的診斷價值 以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在分組：同時存在組47例重發(fā)生ABOHDN17例，發(fā)生率為36.2%；剩余組37例重發(fā)生ABO-HDN 3例，發(fā)生率為8.1%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.987，P=0.003），見表1。

表1 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體與ABO-HDN發(fā)生關(guān)系

2.2 孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在聯(lián)合紅細(xì)胞抗體效價在新生兒ABO-HDN的診斷價值 ①以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在且紅細(xì)胞效價≥1:64分組，同時存在且效價≥1:64組40例發(fā)生ABOHDN 14例，發(fā)生率35%；剩余組44例，發(fā)生ABOHDN 6例，發(fā)生率13.6%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.271，P=0.022）。②以孕婦IgG1、IgG3抗體同時存在且抗丈夫紅細(xì)胞效價≥1:128分組，同時存在且效價≥1:128組27例中發(fā)生ABO-HDN 7例，發(fā)生率為25.9%；剩余組57例中發(fā)生ABOHDN 13例，發(fā)生率為22.8%，兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.098，P=0.754），見表2和表3。

表2 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體聯(lián)合紅細(xì)胞抗體效價≥1:64與ABO-HDN發(fā)生關(guān)系

表3 孕婦16~30周IgG1、IgG3抗體聯(lián)合紅細(xì)胞抗體效價≥1:128與ABO-HDN發(fā)生關(guān)系

3 討 論

ABO-HDN是一種母嬰不合發(fā)生的胎兒或新生兒的疾病，可以導(dǎo)致新生兒黃疸、貧血及水腫，嚴(yán)重時可以發(fā)展為核黃疸、死胎或者新生兒死亡[10-11]。新生兒溶血病的發(fā)生與許多因素有關(guān)，如新生兒紅細(xì)胞抗原的強(qiáng)弱；孕婦抗A(B)或丈夫紅細(xì)胞抗體效價；血型物質(zhì)通過胎膜屏障的能力；孕婦IgG亞型等。目前在新生兒溶血病的預(yù)估中最多使用的是檢測孕婦抗A（B）或抗丈夫紅細(xì)胞抗體效價[12]，但在2018年7月第八版的婦產(chǎn)科學(xué)[13]的孕婦產(chǎn)前檢查已經(jīng)不在提及孕婦抗A(B)效價，所以孕婦產(chǎn)前檢出高效價未必導(dǎo)致ABO-HDN的發(fā)生。

有文獻(xiàn)報(bào)道[14-15]Rh新生兒溶血?。≧h-HDN）的發(fā)生與IgG亞型IgG1、IgG3抗體含量有關(guān)，IgG1和IgG3容易通過胎膜屏障，進(jìn)入胎兒血液循環(huán)與胎兒的紅細(xì)胞上抗原發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致Rh-HDN并且新生兒病情與IgG1和IgG3抗體的含量呈正相關(guān)。但ABO-HDN發(fā)生與IgG1和IgG3抗體有關(guān)的文獻(xiàn)較少，本次研究使用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體聯(lián)合抗丈夫紅細(xì)胞效價按三種不同的分析方法與ABO-HDN的關(guān)系。

本次研究的84例孕婦中IgG1和IgG3抗體同時存在的48例，發(fā)生ABO-HDN 16例與其他IgG1抗體單獨(dú)存在和無IgG1和IgG3抗體存在有明顯的差異。說明IgG1和IgG3抗體同時存在與ABOHDN密切相關(guān)與馬印圖等[16]報(bào)道用微柱凝膠法檢測IgG亞型結(jié)論一致。本次研究發(fā)現(xiàn)發(fā)生新生兒高膽紅素血癥在與IgG1單獨(dú)存在沒有差別（共發(fā)生18例其中IgG1和IgG3抗體同時存在9例，發(fā)生率為18.8%；IgG1單獨(dú)存在10例，發(fā)生率為28.6%，與夏愛軍等[17]報(bào)道不相符，說明IgG1和IgG3抗體同時存在在診斷ABO-HDN的特異性高于新生兒高膽紅素血癥。

綜上所述，在孕婦產(chǎn)前用微柱凝膠法檢測IgG1和IgG3抗體在預(yù)估ABO-HDN發(fā)生的特異性是產(chǎn)前檢測方法上最高的。IgG1抗體單獨(dú)存在在84例孕婦中有83例，發(fā)病率為24.1%。如果IgG3同時存在發(fā)病率可以增加到36.2%，但I(xiàn)gG3單獨(dú)存在沒有發(fā)現(xiàn)，可能IgG3單獨(dú)存在不會發(fā)生ABO-HDN，致病關(guān)系還是與IgG1有關(guān)，IgG3可以起到介導(dǎo)和遞進(jìn)效應(yīng)。建議ABO血型效價異常的孕婦進(jìn)行IgG1、IgG3抗體檢測，二胎及多胎的孕婦也應(yīng)完善IgG1、IgG3抗體檢測，早發(fā)現(xiàn)早預(yù)防，從而可以減少ABO-HDN的發(fā)生。