體外核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)沙眼衣原體和淋球菌采用不同標(biāo)本的比較分析

吳英

（上饒市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江西 上饒 334000）

沙眼衣原體（CT）和淋球菌（NG）被認(rèn)為是全球引起性傳播疾病（STD）的首位和第二位的病原體，男女均可感染[1-2]。CT、NG具有無癥狀感染的特點(diǎn)，若未經(jīng)治療，女性感染后會(huì)通過母嬰垂直傳播，感染率＞50%，還可能誘發(fā)不孕、異位妊娠、慢性疼痛等并發(fā)癥[3-4]。早期準(zhǔn)確篩查CT/NG并盡早治療，可治愈CT/NG感染。培養(yǎng)法、如膠體金法等傳統(tǒng)的檢測(cè)方法存在操作較繁瑣、敏感性較低、易被雜菌污染、耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)。體外核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAATs）-實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法檢測(cè)CT/NG感染內(nèi)質(zhì)控、雙區(qū)域擴(kuò)增、優(yōu)運(yùn)算能準(zhǔn)確解讀檢測(cè)結(jié)果，以準(zhǔn)確篩查和臨床確診有癥狀或無癥狀的CT/NG感染患者。本研究旨在分析NAATs檢測(cè)不同標(biāo)本中CT和NG效能，為臨床干預(yù)提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2020年6月于本院就診的3 926例疑似STD女性患者為研究對(duì)象，年齡15～79歲，平均年齡（34.26±3.21）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：存在異味、陰道分泌物增多等癥狀，且少數(shù)患者伴有下腹痛、尿頻等；患者或家屬知情同意，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：入組前接受抗生素治療者；處于月經(jīng)期、妊娠期或無性行為者。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 無菌操作采集標(biāo)本。采集入組患者清晨首次尿液1.5 mL，將其與CobasPCR尿液樣本收集于盒中貯存，液體混合，在2～30℃環(huán)境下保存待測(cè)。窺器暴露宮頸后，拭去宮頸表面黏液，在宮頸內(nèi)插入無菌棉拭子，深度約為2 cm，捻動(dòng)拭子，旋轉(zhuǎn)1周，約停留30 s，采集宮頸分泌物。將獲取的標(biāo)本迅速置入CobasPCR尿液樣本收集盒中，在2～30℃環(huán)境下保存待測(cè)。

1.2.2 標(biāo)本處理 在含有無菌0.9%氯化鈉溶液1 mL的一次性試管中加入棉拭子，充分洗脫后貼管壁擠出水分。全部液體吸取至1.5 mL的EP管中，12 000 rmp離心5 min，去除上清液，將DNA提取液50μL加入沉淀，充分振蕩混勻，行10 min左右100℃恒溫處理，12 000 rmp離心5 min，備用。取2μL上清液加入PCR反應(yīng)液中，設(shè)置空白對(duì)照和陰陽性對(duì)照。以NAATs測(cè)定CT、NG，嚴(yán)格按照試劑說明書操作。儀器為美國(guó)ABI公司7500熒光定量PCR儀，試劑盒為羅氏診斷Cobas4800CT/NG檢測(cè)試劑盒。

1.3 觀察指標(biāo) ①分析尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率差異。②分析尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率一致性。③分析CT、NG感染年齡分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT感染率一致性使用Kappa檢驗(yàn)，Kappa值≥0.75表示一致性良好，0.4～0.74表示一致性尚可，＜0.4表示一致性不佳，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率比較 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率比較[n（%）]

2.2 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率一致性分析Kappa檢驗(yàn)顯示，尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染的一致性良好（Kappa=0.814、0.856，P=0.000、0.000），見表2～3。

表2 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT感染情況

表3 尿液和宮頸拭子標(biāo)本中NG感染情況

2.3 CT、NG感染年齡分布情況 CT感染多見于31～40歲人群，其次為41～50歲人群；NG感染多見于＞50歲人群，其次41～50歲人群，見表4。

表4 CT、NG感染年齡分布情況分析[n（%）]

3 討論

STD是一組以性行為為主要傳播途徑的疾病，包括非淋菌性尿道炎、艾滋病、梅毒、淋病等20多種疾病[5]。隨著不潔性行為所致的泌尿生殖道疾病快速蔓延，加上人們自我保護(hù)意識(shí)薄弱，STD感染率逐漸升高。CT、NG是誘發(fā)STD的常見病原體，主要通過性接觸傳播，在人體泌尿生殖道寄生，可誘發(fā)盆腔炎、尿道炎、輸卵管炎等，病情嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致患者出現(xiàn)不孕、自然流產(chǎn)等[6-7]。故早期準(zhǔn)確篩查CT、NG，實(shí)施相應(yīng)的防治措施至關(guān)重要。

NAATs-實(shí)時(shí)定量PCR法是一種實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)與核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)相結(jié)合的新型檢測(cè)方式，具有低污染、高特異性、高敏感性、反應(yīng)穩(wěn)定、操作方便、可定量、檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)，能很大程度上克服培養(yǎng)法、涂片法、免疫法等傳染檢測(cè)方式的可靠性低、敏感性差、檢測(cè)周期長(zhǎng)等不足，便于臨床及時(shí)判斷病情[8-10]。本研究中，尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Kappa檢驗(yàn)顯示，尿液和宮頸拭子標(biāo)本中CT、NG感染的一致性良好（Kappa=0.814、0.856，P=0.000、0.000），提示NAATs-實(shí)時(shí)定量PCR法能準(zhǔn)確、客觀的檢測(cè)CT、NG感染情況，不同標(biāo)本中CT、NG感染率基本一致，可將尿液替代宮頸拭子實(shí)施CT、NG檢查。尿液標(biāo)本取材方便、快捷、簡(jiǎn)單，獲取方式為非侵入性，能有避免宮頸拭子標(biāo)本采集所致的泌尿生殖道損傷，減輕患者取樣時(shí)的痛苦，患者更易于接受。本研究結(jié)果表明，CT感染多發(fā)生于31～40歲人群，其次為41～50歲人群；NG感染多發(fā)生于＞50歲人群，其次為41～50歲人群，分析原因?yàn)?，可能與該年齡段受檢人群平均受教育程度相對(duì)不足、自我保護(hù)意識(shí)淡薄、缺乏性衛(wèi)生知識(shí)等因素有關(guān)。NAATs-實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)時(shí)，1份標(biāo)本能同時(shí)檢測(cè)多種病原體，無需采集多份標(biāo)本，以免因標(biāo)本間差異影響診斷結(jié)果，診斷更為客觀準(zhǔn)確。社區(qū)應(yīng)加強(qiáng)、重視性衛(wèi)生健康教育工作，定期實(shí)施相關(guān)知識(shí)健康宣教，提高認(rèn)知度；臨床鑒別泌尿生殖系統(tǒng)疾病時(shí)，需加強(qiáng)篩查CT、NG病原體無癥狀攜帶者，早發(fā)現(xiàn)、早治療，提高CT、NG感染治愈率。

綜上所述，NAATs-實(shí)時(shí)定量PCR法能準(zhǔn)確、客觀的檢測(cè)CT、NG感染情況，指導(dǎo)臨床制定防治措施，避免STD傳播。