GC法測定留蘭香根莖葉中香芹酮的含量

羅洪蓮 萬紅才 劉曉艷 徐作剛 段萍 任永奇

【摘 要】 目的：明確留蘭香藥材主要有效成分香芹酮的主要分布部位。方法：先采用薄層色譜法初步觀察香芹酮在留蘭香根莖葉中的含量差別，再采用氣相色譜法定量測定留蘭香藥材不同部位中香芹酮的具體含量。結(jié)果：留蘭香藥材葉中香芹酮的含量最高，其次是莖，最后是根。結(jié)論：留蘭香藥材中香芹酮的主要分布部位為葉，根和莖中的含量很低。

【關(guān)鍵詞】 留蘭香;不同部位;香芹酮;薄層色譜法;氣相色譜法

【中圖分類號】R917【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）07-0017-05

Determination of Carvone of Spearmint by TLC Preliminarily and by GC Systematically

LUO Honglian WANHongcai LIU Xiaoyan XU Zuogang DUAN Ping REN Yongqi

Qiannan Food and Drug Inspection Institute， Duyun 558000，China

Abstract：Objective To identify the main distribution sites of varvone-a main effective composition in spearmint and to provide reliable basis for improve spearmint utilization efficiency. Methods The difference of carvone content in roots、stems and leaves of spearmint was preliminarily observed by TLC， and then the specific amount of carvone in different parts of spearmint was quantitatively determined by GC.Result The leaves of spearmint had the most content of carvone， followed by the stems and finally the roots.Conclusion The main distribution of carvone in spearmint is the leaves， and the content of carvone in the stems and the roots was very low.

Keywords：Spearmint; Different Parts; Carvone; Thit-layer Chromatography; Gas Chromatography

留蘭香（Mentha spicata L.）為唇形科薄荷屬（Mentha Linn）植物，又名狗肉香，在我國貴州、云南、四川、新疆等地均有栽培，其味辛、甘，性微溫，具有疏風(fēng)解表、理氣止痛、之功效?，F(xiàn)代藥理研究表明：留蘭香具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗氧化活性[1-4]，常用于治療感冒發(fā)熱、咳嗽、頭痛、咽痛、跌打瘀痛、胃腸脹氣、烏疔、雞窩寒、全身麻木和小兒瘡癤。留蘭香味清新、涼爽、香甜，其嫩葉常做調(diào)味香料食用，其揮發(fā)油廣泛應(yīng)用于牙膏、口香糖、糖果、香皂等物品的加香[5]。根據(jù)文獻(xiàn)報道香芹酮為留蘭香揮發(fā)油的主要有效成分[6]，但其在全草中的含量分布情況尚不明確，為提高留蘭香資源的利用效率，本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法（GC）及薄層色譜法對其根、莖、葉中的香芹酮含量差異進(jìn)行比較。

1 儀器與試藥

Aglient 7890B 氣相色譜儀（美國Aglient公司），SK250LHC超聲波清洗儀（上?？茖?dǎo)儀器有限公司），AG135電子天平（梅特勒托利多）;香芹酮對照品（德國Dr.Ehrenstorfer GmbH 批號： 141713，含量：99.0%），正十一烷對照品（德國Dr.Ehrenstorfer GmbH批號：G169369，含量99.6%），其他試劑均為化學(xué)分析純。10批次留蘭香藥材分別采集于都勻大坪（批號：201901）、都勻邦水（批號：201902）、開陽毛云（批號：201903）、獨(dú)山麻萬（批號：201904）、獨(dú)山影山（批號：201905）、遵義桐梓（批號：201906）、都勻劍江河（批號：201907）、都勻洛邦（批號：201908）、威寧草海（批號：201909）、畢節(jié)清水（批號：201910），均經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所李揚(yáng)主任藥師鑒定為留蘭香藥材。

2 方法與結(jié)果

2.1 留蘭香根莖葉的薄層圖譜 分別稱取3批次留蘭香藥材（批號分別為：201901、201902、201903）根、莖、葉細(xì)粉3.0 g，加乙醇30 mL，水浴回流30 min，濾過，取續(xù)濾液2 mL作為供試品溶液。另取香芹酮對照品約10mg，置10ml量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷：乙酸乙酯：甲酸（10∶1∶0.1）為展開劑，展開后，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。3個批次的留蘭香葉供試品溶液色譜中，在與香芹酮對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，在莖與根的供試品溶液色譜中，幾乎看不見與香芹酮對應(yīng)的斑點(diǎn)。色譜圖如圖1所示。

2.2 留蘭香根莖葉中的香芹酮GC含量測定

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正十一烷對照品適量，精密稱定，用正己烷稀釋制成正十一烷濃度為0.2 mg/mL的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 取香芹酮對照品適量，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋制成香芹酮濃度約為0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取留蘭香粉末約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，加塞，超聲30 min，放冷至室溫，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.4 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱HP-5彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25μm）;檢測器氫火焰離子化檢測器;程序升溫條件初始溫度50 ℃，以2 ℃ /min 升溫至 115 ℃，以 5 ℃ /min 升溫至 150 ℃ ;氣化室溫度 250 ℃ ;檢測室溫度 280 ℃;尾吹 20 mL;空氣 400 mL;氫氣 40 mL;進(jìn)樣量 1 μL。在上述試驗(yàn)條件下，樣品中的香芹酮、內(nèi)標(biāo)正十一烷與其他各雜質(zhì)峰的分離度達(dá)到要求且峰形良好，符合《中華人民共和國藥典》2015年版 四部通則0513氣相色譜法項下的規(guī)定。

2.2.5 線性試驗(yàn) 精密稱取32 mg香芹酮對照品置10 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋制成3.2 mg/mL的溶液，作為對照品貯備液，精密量取對照品貯備液適量，用內(nèi)標(biāo)溶液逐級稀釋制成濃度分別為1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL的對照品溶液。分別精密吸取1μL按2.2.4色譜條件測定，記錄色譜圖。以香芹酮對照品溶液與內(nèi)標(biāo)溶液峰面積之比為縱坐標(biāo)（Y），以香芹酮對照品質(zhì)量濃度 C（mg/mL） 為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，得到香芹酮的回歸方程：Y=0.848X -0.0119（R=0.9998），即香芹酮質(zhì)量濃度在 0.05 ～ 3.2 mg/mL間呈良好的線性關(guān)系。見表1、圖5。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，考察系統(tǒng)的精密度。香芹酮峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD為0.04%，符合《中華人民共和國藥典》2015 年版四部通則9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中對精密度的要求（RSD≤2%）。見表2。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別于0、2、4、6、8、10 h精密吸取供試品溶液1μL按2.2.4色譜條件測定，記錄色譜圖。香芹酮峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD為0、06%，表明此條件下香芹酮在10 h內(nèi)穩(wěn)定。見表3。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 平行取批號為201902的留蘭香藥材葉粉末樣品6份，按上述方法制備供試品溶液及對照品溶液，按2.2.4色譜條件測定，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，6份樣品中香芹酮百分含量之間的RSD為1.88%。見表4。

2.2.9 回收試驗(yàn) 精密稱取香芹酮對照品25 mg，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋制成2.5 mg/mL的對照品貯備液。分別精密吸取對照品貯備液1 mL、2 mL、3 mL置50 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋制成香芹酮濃度分別為0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.15 mg/mL的溶液，分別作a、b、c溶液。取9份已知香芹酮含量的留蘭香葉粉末（香芹酮含量為0.384%，見表4）約0.25g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，每三份分別精密加入a、b、c溶液10 mL，加塞，超聲30 min，放冷至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾，分別精密吸取1μL按2.2.4色譜條件測定，記錄色譜圖，考察系統(tǒng)的回收率。平均回收率為96.5%，RSD%為1.3%，符合《中華人民共和國藥典》2015 年版四部通則9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中對回收率的要求。見表5。

2.2.10 留蘭香根莖葉中香芹酮含量的測定結(jié)果 取10個不同批次留蘭香樣品，按上述方法制備供試品溶液及對照品溶液，各精密吸取1μL按2.4色譜條件測定，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，測定結(jié)果見表6。

3 討論

本試驗(yàn)首先選用合適的薄層色譜法[7]，對不同批次留蘭香根、莖、葉中的香芹酮含量進(jìn)行測定，由圖1可見，3個批次的留蘭香葉供試品溶液色譜中，在與香芹酮對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同斑點(diǎn)，在莖與根的供試品溶液色譜中，幾乎看不見與香芹酮對應(yīng)的斑點(diǎn)，表明留蘭香葉中香芹酮的含量較高，能在薄層圖譜中顯清晰斑點(diǎn)，而莖根中香芹酮的含量很低以致此薄層色譜方法未能鑒別出。為進(jìn)一步確定根莖葉中香芹酮的含量，經(jīng)查閱文獻(xiàn)，本試驗(yàn)選用上述氣相色譜條件[8]，建立留蘭香藥材中香芹酮的GC含量測定方法，并對此方法進(jìn)行方法學(xué)考察，確定該方法準(zhǔn)確、可靠。測定結(jié)果表明，留蘭香藥材不同部位中的香芹酮含量差異顯著，含量高低為：葉>莖>根。此次研究明確了留蘭香藥材中香芹酮的主要分布部位，為其藥用部位的選擇提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)依據(jù)，以提高留蘭香資源的利用效率。

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（收稿日期：2020-09-14 編輯：程鵬飛）