熏洗劑的穩(wěn)定性試驗與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

彭志婷 于開紅

【摘 要】 目的：研究熏洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并其考察穩(wěn)定性。方法：運(yùn)用紫外光譜法與傅立葉變換紅外光譜法對該制劑進(jìn)行鑒定。采用初均速法，以紫外光譜的272nm處的最大吸收峰A值為定量指標(biāo)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗。結(jié)果：該制劑25 ℃的有效期約為2.0年，并測定該制劑的相對密度及穩(wěn)定性試驗過程中pH值的變化。結(jié)論：紫外光譜法的吸收度A值可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 熏洗劑;初均速法;穩(wěn)定性;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】R943【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）07-0010-07

Study on the Stability and Quality Standard of Xunxiji

PENG Zhiting YU Kaihong*

Xuzhou Chinese Medicine Hospital，Xuzhou 221009，China

Abstract：Objective To Study the Stability and Quality Standard of Xunxiji. Methods The preparations were identified by Fourier Transform Infrared Spectroscopy （FTIR） and Ultraviolet Spectrum （UV）.The Absorbance Units of Xunxiji were determined with UV spectrophotometry at 272 nm. Results Initial average rate method was applied to test the stability of Xunxiji. It has been shown thatvalidity of the preparation would be 2 years.Conclusion The Absorbance Units of Xunxiji can be used for the quality control of preparation.

Keywords：Xunxiji; Initial Average Rate Method; Stability; Quality Standard

中藥制劑大多為復(fù)方制劑，所含化學(xué)成分極為復(fù)雜，其中多種成分的準(zhǔn)確分析及含量測定問題至今仍是國際難題[1]。目前多以某一、兩個已知的有效成分控制制劑的質(zhì)量，但此法不能全面控制制劑的質(zhì)量，也不能全面體現(xiàn)中醫(yī)的基本理論。目前我國對中藥制劑的色譜指紋圖譜研究已有許多報道。但對醫(yī)院制劑室來說，用色譜指紋圖譜控制藥品質(zhì)量不易實施。而利用光譜法建立中藥指紋圖譜則較易推廣，且符合中醫(yī)學(xué)的基本理論。熏洗劑為我院制劑，具有活血止痛，消腫止痛，清熱解毒，促進(jìn)傷口愈合之功效。已在臨床應(yīng)用多年，療效顯著。但質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)仍不完善，為了保證臨床用藥安全、有效與質(zhì)量可控，本實驗運(yùn)用UV光譜法、紫外一階導(dǎo)數(shù)光譜法和傅立葉變換紅外分光光度法對熏洗劑樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

經(jīng)典恒溫法預(yù)測藥物有效期需要在若干個較高溫度下測定各個溫度下的速度常數(shù)K，按Arrhenius指數(shù)規(guī)律推算室溫的速度常數(shù)K25，進(jìn)而計算室溫貯存期[2]。這種方法測定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，但操作繁瑣，費(fèi)時費(fèi)力。文獻(xiàn)[3-4]報道用初均速法預(yù)測藥物的有效期，以藥物分解初始階段的平均速度（Voi）的對數(shù)代替反應(yīng)的速度常數(shù)（K）的對數(shù)，對開氏溫度的倒數(shù)進(jìn)行線性回歸，得到符合Arrhenius指數(shù)規(guī)律的直線方程，由此可計算反應(yīng)的活化能及室溫的貯存期。初均速法在實驗中不用求速度常數(shù)（K），不必知道反應(yīng)級數(shù)，且所等結(jié)果與經(jīng)典恒溫法有很好的相關(guān)性。故5批熏洗劑的穩(wěn)定性試驗采用初均速法，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1201紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）;Tensor27傅立葉變換紅外分光光度計（德國BRURER公司）;DK-S28型恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），pH-2C型精密pH計（上海雷磁儀器廠產(chǎn)品），F(xiàn)A2004N電子天平（上海雷磁儀器廠）。

1.2 試藥與試劑 五批熏洗劑[熏洗劑（Ⅰ）批準(zhǔn)文號：蘇藥制字Z04001626;批號分別為：190105、190505、190725、191009、191212，以下分別簡稱為：樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5]為我院制劑室產(chǎn)品。熏洗劑模擬樣品（自制）。95%乙醇（徐州市科翔化學(xué)試劑有限責(zé)任公司），氯仿（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）均為分析純（AR）。

2 方法與結(jié)果

2.1 穩(wěn)定性試驗

2.1.1 紫外光譜測定方法[5] 分別將各批熏洗劑搖勻后，用移液管移取1 mL置10 mL容量瓶中，用95%的乙醇稀釋至刻度，搖勻后過濾。用移液管移取濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用95%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液，于紫外分光光度計上進(jìn)行光譜掃描，測定紫外光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜。掃描條件為：設(shè)定帶寬為2.0 nm， 采樣間隔為0.5 nm，掃描范圍為200～400 nm，最大吸收度A值為0～3.0，中速掃描。并記錄吸收峰λ值與吸收度A值。5批樣品的紫外光譜數(shù)據(jù)見表1。據(jù)此，確定供試品溶液吸收度的測定波長為272 nm。

2.1.2 恒溫加速試驗[4-7] 取五批樣品（規(guī)格為每瓶200 mL），分裝于10mL玻璃瓶中，封口，置恒溫水浴鍋中，按預(yù)先設(shè)定的溫度和時間（50、60、68、73、76、83 ℃，分別加熱12、11、10、9、8、7 h）進(jìn)行加速試驗，定時取出樣品，放入冷水盆中迅速冷至室溫以終止反應(yīng)，將樣品藥液充分混合，按2.1.1項下的方法進(jìn)行紫外光譜掃描，并記錄吸收度A值。將數(shù)據(jù)輸入Excel工作表中，按公式Voi=（CO%- Ci%）/ti（i=1，2，3…n）計算不同溫度下樣品反應(yīng)的初始平均速度Voi（即反應(yīng)開始階段單位時間的相對百分含量Ci%的變化）和lgVoi。其中A0為室溫下的吸收度，At為不同溫度下對應(yīng)時間恒溫加熱后樣品的吸收度值，Ci%=At/A0*100%，ti為與溫度相對應(yīng)的時間（h）。結(jié)果見表2。

2.1.3 貯存期的預(yù)測[8-9] 將表2中的數(shù)據(jù)利用Excel工作表的數(shù)據(jù)分析程序，以lgVoi對1/Ti×103進(jìn)行線性回歸處理，得各實驗溫度下的回歸方程、相關(guān)系數(shù)（見表3）。根據(jù)回歸方程的斜率可求出活化能E，E=斜率×2.303R（R為氣體常數(shù)）;將T=25+273=298分別回代入表3中的回歸方程求出室溫25 ℃時的lgVoi，查反對數(shù)表得V25 ℃oi，再將V25 ℃oi代入公式Voi=（CO%- Ci%）/ti，可求出5批制劑室溫25 ℃時的的有效期：t25 ℃oi=C0%-C2%Voi 1025 ℃oi。

2.2 紅外光譜測定[10]

2.2.1 紅外光譜鑒定原理 紅外光譜（FTIR）屬于分子吸收光譜。中藥制劑是多種成分的混合物，其紅外圖譜是中藥所含各成分吸收光譜的疊加，不論中藥內(nèi)存在的不同物質(zhì)是什么，必定在其紅外光譜上有所反映。只要中藥制劑中所含的化學(xué)成分不同，各成分含量的比例不同，就會導(dǎo)致紅外光譜圖的差異。憑借紅外光譜的這些差異特征（峰位、峰強(qiáng)度和峰形狀），即“宏觀指紋性”，可以用來識別中藥的真?zhèn)?。這種識別方法和判別準(zhǔn)則稱為“紅外宏觀指紋法”。本實驗對制劑樣品提取物直接壓片測定紅外光譜，并比較其差異而得到鑒定的目的。

2.2.2 紅外光譜的測定方法 分別取五批熏洗劑樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5及自制模擬樣品5 mL，于分液漏斗中用10 mL氯仿萃取，靜置，分離下層氯仿液并過濾得供試液。分別取供試液2 mL于瑪瑙乳缽中，用吹風(fēng)機(jī)吹盡溶劑，加KBr適量研細(xì)混勻后，用6～8 Ton的壓力壓成厚度為1～2 mm的薄片，于紅外光譜儀上測定紅外光譜。測定結(jié)果見圖1～6及表4。

2.3 檢查

2.3.1 相對密度測定[11] 分別五批熏洗劑樣品及模擬樣品按《中國藥典》2015年版四部0601相對測定法測定，結(jié)果見表5。

2. 3.2 pH值的測定 分別取五批熏洗劑樣品及模擬樣品制劑按《中國藥典》2015年版四部0631pH值測定法測定其pH，并隨機(jī)抽取恒溫加速實驗后的兩批制劑（樣品2、樣品5）同上法測定其pH，考察恒溫加速對pH的影響，測定結(jié)果見表5。

3 討論

3.1 熏洗劑穩(wěn)定性測試 經(jīng)典恒溫法實驗需在每個溫度下多次取樣分析;而初均速法在每個加速溫度下僅需取樣作一次分析，就可得到平均速度，且取樣點在反應(yīng)初期，可排除反應(yīng)后期副反應(yīng)的干擾。由于增加了加速實驗的溫度數(shù)，因此提高了按Arrhenius指數(shù)定律推算室溫有效期的精確度。但加速實驗是在較高溫度下在短時間內(nèi)獲得反應(yīng)的規(guī)律，與室溫下的反應(yīng)機(jī)制可能有一定偏差，故必須用室溫留樣觀察法加以驗證。

3.2 熏洗劑紫外法鑒定 憑借紫外光譜的峰、谷的差異特征（位置、強(qiáng)度、形狀），即“宏觀指紋性”可分析六個樣品的質(zhì)量。以紫外光譜為基礎(chǔ)的導(dǎo)數(shù)光譜能校正無關(guān)吸收，排除樣品測定中干擾。從表2中的數(shù)據(jù)可以看出：樣品1～6在272 nm，255 nm附近均有兩個吸收峰，但1～6號樣品的最大吸光度值A(chǔ)max和最小吸光度值A(chǔ)min有一定差異。1～6號樣品在272 nm處的吸光度A值分別為：0.9401、1.0078、1.1417、1.1278、1.5123、1.2133。根據(jù)朗伯-比耳定律，Amax越大濃度C越大，有效成分含量愈高，它們的質(zhì)量可排列為：樣品5 > 6> 3> 4> 2> 1。

3.3 熏洗劑紅外法鑒定 從圖1～6中可看出，熏洗劑樣品1、2、3、4、5的紅外光譜的形狀基本相同，均在2922、2851、1688、1454、1326、1289、708cm-1附近有強(qiáng)吸收峰。模擬樣品6的圖譜形狀與樣品有明顯差異，其與五個樣品在2921、2851、1456、1328cm-1處共有吸收峰，但在1715、1269cm-1處的吸收峰位置與樣品差異較大。

3.4 其他質(zhì)量控制 五批制劑及模擬樣品的相對密度分別為：1.0600、1.0820、1.0701、1.0787、1.0755、1.0812?？膳帕袨椋?>6>4>5>3>1。與紫外光譜分析的結(jié)果有一定差異。這表明僅以相對密度作為質(zhì)量控制指標(biāo)準(zhǔn)確度不夠。pH測定結(jié)果表明，該制劑偏酸性，防腐劑在酸性條件下的抑菌效果會更好。但隨著制劑加熱時間的延長，pH值有降低趨勢。

4 結(jié)論

研究結(jié)果表明，五批熏洗劑的室溫貯存期在1.74～2.90年。據(jù)此，確定該制劑的有效期為約2.0年。溫度對該制劑的吸收度A值和pH值均有較大影響，在制劑加熱提取藥材有效成分過程中應(yīng)考慮這些因素。傅立葉變換紅外光譜法能快速、準(zhǔn)確地鑒定該制劑，以紫外光譜吸收度A值作為內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更為有效地控制該熏洗劑的質(zhì)量，且方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)。

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（收稿日期：2020-09-10 編輯：程鵬飛）