接種平滑白蛋巢菌對蒿柳根系分泌物代謝組的影響

馬曉東，李 霞,2，鄒竣竹，白媛媛，孫振元，韓 蕾＊

(1. 中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所國家林業(yè)局林木培育重點實驗室，北京 100091；2. 菏澤學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院（牡丹學(xué)院），山東，菏澤 274000)

多環(huán)芳烴（PAHs）是一類具有致癌、致畸、致突變效應(yīng)的有機污染物，可在水體、土壤或沉積物中積累，被植物吸收而進入食物鏈中，通過生物富集作用對人類健康產(chǎn)生極大威脅[1-2]。在PAHs污染的諸多修復(fù)方法中，生物修復(fù)具有綠色環(huán)保、成本低、大面積應(yīng)用等優(yōu)點[3-4]，是目前最具潛力的方法之一。一般來說，PAHs的環(huán)數(shù)越高，其化學(xué)結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定、疏水性越高，單一利用植物或白腐真菌對PAHs去除能力有限[5-7]。近來的研究表明，植物-白腐真菌聯(lián)合修復(fù)是一種高效的PAHs污染土壤的生物修復(fù)方法，能有效去除高分子量PAHs[8]。但目前植物-白腐真菌聯(lián)合修復(fù)策略的作用機理尚不完全清楚。

雖然植物從土壤中吸收和積累PAHs的能力有限，但植物能促進根際土壤環(huán)境中PAHs的降解，學(xué)者推測可能是植物和根際微生物相互協(xié)作的結(jié)果[9]。據(jù)報道，植物約20%的光合產(chǎn)物用于根部合成有機分子，并以根系分泌物的形式釋放到土壤中[10]。根系分泌物主要成分有低分子量有機酸（LWMOAs）、氨基酸、糖、酰胺、脂族酸、芳香酸、醇、酮和烯烴等，這些代謝物為植物根際土壤微生物提供碳源和氮源，包括PAHs降解菌，增加微生物的生物量和活性[11-13]，從而提高PAHs的降解率。此外，LWMOAs、氨基酸、糖類均在PAHs脫附方面有顯著效果，從而提高了PAHs的溶解度和生物可利用度，加速土壤中PAHs的降解[14-16]。研究表明[17]，低分子量PAHs處理下玉米的光合作用增強，玉米根系分泌物組分及其含量也趨于增加。目前尚不清楚接種平滑白蛋巢菌對蒿柳根系分泌物的影響，后者是影響根際PAHs降解菌生長的重要因素。

近來，在環(huán)境學(xué)科中使用的非靶向代謝組學(xué)引起了生物學(xué)者們的廣泛關(guān)注，代謝組技術(shù)的進步使研究人員能夠在短時間內(nèi)分析一個樣品中的數(shù)百種化合物。植物產(chǎn)生的代謝物范圍比其他任何一類生物體都要廣，代謝組學(xué)在植物科學(xué)中的重要性也相應(yīng)更高[18]。利用非靶向代謝組學(xué)進行植物組織內(nèi)代謝產(chǎn)物的研究日漸增多，但針對植物根系分泌物的代謝組學(xué)研究相對較少[13,19-22]。根際代謝組學(xué)的關(guān)鍵在于如何收集原生狀態(tài)的根系分泌物。大多研究利用霍格蘭營養(yǎng)液、石英砂等基質(zhì)對植物進行培養(yǎng)并收集根系分泌物，這些方法的好處在于有效消除土壤環(huán)境的噪音干擾，但生長介質(zhì)能影響根系形態(tài)、分泌的方式和代謝物組分[23]。同時，由于考慮到污染土壤修復(fù)實際情況，以及需要滿足白腐真菌的定殖、生長和產(chǎn)酶條件時，需選擇土壤作為培養(yǎng)基質(zhì)。

基于此，本研究在溫室中設(shè)置了為期60天的盆栽試驗，選擇蒿柳（Salix viminalisL.）和平滑白蛋巢菌（Crucibulum laeve）作為試驗材料，試驗材料的選擇以及該組合體系的研究價值在先前研究[24]中有詳細表述，利用自然衰減（NA），真菌修復(fù)（M），植物修復(fù)（P）和植物-微生物聯(lián)合修復(fù)（PMR）等4種策略修復(fù)PAHs污染土壤，利用非靶向代謝組學(xué)定性和定量分析蒿柳的根際土壤代謝物，從根系分泌物的角度研究了PAHs污染土壤中蒿柳對平滑白蛋巢菌刺激的應(yīng)答機理，以期為植物-白腐真菌聯(lián)合修復(fù)的作用機理研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 污染土壤、植物與真菌接種物

試驗土壤取自北京郊區(qū)的農(nóng)場(40°10′59″ N；116°27′21″ E)，取樣深度為場地0～20 cm內(nèi)。該農(nóng)場常年種植蔬菜和谷物，土壤是中國北方常見的黃褐色土。土壤運送至實驗室后拌勻并室溫下陰干，過2 mm網(wǎng)篩。土壤性質(zhì)按國標(biāo)測定，測得pH：8.7，CEC：23.1 cmol·kg-1，有機質(zhì)：20.1 g·kg-1，總氮：972.0 mg·kg-1，菲：36.6 μg·kg-1，芘：17.4 μg·kg-1，苯并[a]芘：28.5 μg·kg-1，總PAHs：280.3 μg·kg-1。土壤中加入高純度的菲、芘、苯并[a]芘（溶于丙酮，10%土壤質(zhì)量）混合液并置于通風(fēng)柜中，待丙酮完全蒸發(fā)后，將污染土壤和無污染土壤均勻混合，使土壤中菲、芘、苯并[a]芘的初始含量分別為約4 000 μg·kg-1、4 000 μg·kg-1、2 000 μg·kg-1，隨后將污染土裝入塑料箱中置于室溫下老化6周，并再次過2 mm網(wǎng)篩。

植物修復(fù)材料為蒿柳，選取種植于中國林科院苗圃的蒿柳無性系一年生枝條，按直徑1.0 ± 0.3 cm的規(guī)格，在水中剪成長度為12 cm的插條，隨后將插條插入清水中吸足水分，再扦插于φ8 cm × 10 cm的營養(yǎng)缽中，栽培基質(zhì)為草炭土∶珍珠巖=6∶1（v/v），定時澆水。發(fā)芽后在溫室中繼續(xù)培養(yǎng)4周，選擇長勢均勻良好的蒿柳扦插苗用于試驗。

平滑白蛋巢菌（Crucibulum laeve）從中國普通微生物菌種保藏管理中心獲取，將其接種到麥芽提取物培養(yǎng)基上，24℃下靜置培養(yǎng)2周獲取新鮮的接種物。隨后，按照Reina等人[25]描述的方法進行固態(tài)發(fā)酵并做修改：選大麥種子作為纖維素基質(zhì)載體，在1 000 mL錐形瓶中加72 g大麥種子和120 mL無菌水高壓滅菌，然后將4個真菌瓊脂板在80 mL無菌水(55% v/w)中混勻，取40 mL真菌接種物接種到大麥培養(yǎng)基，在24℃下靜置培養(yǎng)4周。接種前將所有真菌接種物置入塑料桶中并混勻。

1.2 有機污染試劑

本試驗中用到的甲醇、乙腈、乙酸銨與氨水購自德國CNW Technologies公司（ANPEL Laboratory Technologies（Shanghai）Inc.），均為LC-MS級別試劑。所用到的水是雙重去離子后的超純水，超純水儀純化系統(tǒng)為Millipore產(chǎn)品（Millipore, Bedford,MA）。內(nèi)標(biāo)：L-2-氯苯丙氨酸（2-Chloro-Lphenylalanine，純度 ≥ 98%），購自上海恒柏生物科技有限公司。菲、芘、苯并[a]芘純品（純度高于分析級）為本試驗的模式PAHs化合物。

1.3 試驗設(shè)計

PAHs污染土壤修復(fù)試驗在中國林業(yè)科學(xué)研究院科研溫室中進行，溫室溫度20～28℃，16/8 h的光/暗周期。取若干相同規(guī)格的聚丙烯盆，總?cè)莘e為5 L，每盆中單獨堆放約5 kg受污染的土壤，4種處理分別為：a. 自然衰減（土壤不額外引入其他生物）（NA）；b. 真菌強化（將大麥種子混入土壤中并移栽蒿柳，接種微量（0.05 g·pot-1）含有大麥培養(yǎng)基的平滑白蛋巢菌接種物）（M）；c. 植物修復(fù)（土壤中種植蒿柳）（P）；d. 植物-微生物聯(lián)合修復(fù)（將大麥種子混入土壤中并移栽蒿柳，接種微量（0.05 g·pot-1）含有大麥培養(yǎng)基的平滑白蛋巢菌接種物（PMR）。應(yīng)用于污染土壤的大麥種子：土壤質(zhì)量比為0.6∶10。土壤水分保持在60%的田間持水量，需要定期稱量，并添加蒸餾水，試驗每周隨機改變聚丙烯盆位置一次。在試驗第60天進行土壤取樣：取P和PMR處理蒿柳的根際土壤，取樣方法是用手大力搖動蒿柳根部，在保持根部完整性的同時除去未附著在根部的外部土壤，留取附著在根部的土壤進行非靶向代謝組學(xué)分析；對NA和M處理的土壤樣本也進行非靶向代謝組學(xué)分析，目的是剔除土壤環(huán)境噪音對根系分泌物分析的干擾，取樣方法是用螺旋狀取土鉆從各處理的土壤剖面中抽取5個小樣本，將小樣本混合后過2 mm網(wǎng)篩。各處理均取6個重復(fù)，樣品保存在-80℃用于代謝物的提取和檢測。

1.4 代謝物的提取與檢測

取超低溫冷凍保存的土壤樣本，對樣本進行真空冷凍干燥。樣本冷凍干燥后稱取 100 mg樣品，加入 1 000 μL提取液（甲醇∶乙腈∶水 = 2∶2∶1（v/v），含同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)混合物）后渦旋混勻30 s，在35 Hz條件下研磨4 min，冰水浴中超聲提取5 min，在-40℃下靜置 1 h。隨后將樣品在4℃下12 000 r·min-1離心15 min，取上清于進樣瓶中用于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）分析。同時，所有樣品另取等量上清混合成QC樣品上機檢測。在分析過程中，每6～10個檢測分析樣本中插入一個質(zhì)控樣本，以監(jiān)測試驗的重復(fù)性。

樣品的檢測使用了Vanquish (Thermo Fisher Scientific)超高效液相色譜儀，方法參照Wang,et al.[26]的描述。通過Waters ACQUITY UPLC BEH Amide (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm)液相色譜柱對目標(biāo)化合物進行色譜分離。液相色譜A相為水相，含25 mmol·L-1乙酸銨和25 mmol·L-1氨水，B相為乙腈。梯度洗脫：0～0.5 min，95% B; 0.5～7 min，95%～65% B；7～8 min, 65%～40% B；8～9 min，40% B；9～9.1 min，40%～95% B；9.1～12 min，95% B。流動相流速：0.5 mL·min-1，柱溫：25℃，樣品盤溫度：4℃，進樣體積3 μL。

Thermo Q Exactive HFX質(zhì)譜儀能夠在控制軟件（Xcalibur，Thermo）控制下進行一級、二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集。詳細參數(shù)如下：鞘氣流速：50 Arb，輔助氣流速：10 Arb，毛細管溫度：320℃，一級分辨率：60 000，二級分辨率：7 500，碰撞能：10/30/60 NCE 模式，噴射電壓：3.5 kV (正離子)或-3.2 kV (負離子)。在進行LC-MS/MS檢測時，同時結(jié)合使用了正離子模式（POS）和負離子模式（NEG）兩種電離方式，這樣可使代謝物覆蓋率更高，檢測效果更好。

1.5 代謝物的定性與定量

原始數(shù)據(jù)經(jīng)ProteoWizard軟件轉(zhuǎn)成mzXML格式后，使用R包XCMS (3.2版本)進行峰識別、峰提取、峰對齊和積分等處理。然后對數(shù)據(jù)進行過濾，在一組樣本（QC樣本也是作為一組樣品）中檢測出該物質(zhì)的樣本數(shù) ≥ 50%，就保留該物質(zhì)（minifrac = 0.5）。對數(shù)據(jù)進行內(nèi)標(biāo)歸一（即每個樣本中，其它物質(zhì)的峰面積除以（內(nèi)標(biāo)的峰面積/所有樣品內(nèi)標(biāo)峰面積均值）[27]。與BiotreeDB（V2.1）自建二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫匹配進行物質(zhì)注釋，對代謝物進行定性，算法打分的Cutoff值設(shè)為0.3。

1.6 數(shù)據(jù)分析

利用主成分分析（PCA）反映各處理間總體代謝物的差異以及組內(nèi)樣本間的變異度大小，對樣品的代謝表型進行聚類。結(jié)合多元統(tǒng)計分析OPLSDA的變量投影重要性（VIP）和單變量統(tǒng)計分析t檢驗、p值來篩選各組樣本間的顯著差異代謝物[28]。顯著差異的閾值設(shè)置為：VIP ≥ 1 且 t檢驗的p＜ 0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 LC-MS分析

試驗第60天時，通過POS模式檢測并鑒定了各處理樣品中881種化合物，通過NEG模式檢測并鑒定了各處理樣品中828種化合物。將所有代謝物進行數(shù)據(jù)min-max標(biāo)準(zhǔn)化后進行聚類分析并繪制熱圖（圖1），可直觀展示各處理樣品的代謝物組成和含量有明顯差別。已鑒定的化合物包括丙酸、琥珀酸、苯甲酸、戊酸、庚酸、癸酸、山楂酸等有機酸，半胱氨酸等氨基酸，松二糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖等糖類，15-棕櫚酸甲酯、5-羥基水楊酸酯等酯類；此外還有醇、酮、腺苷、酰胺、生物堿、醛等小分子代謝物。

2.2 蒿柳潛在根系分泌物組分的模式識別分析

采用主成分分析法（PCA）和正交偏最小二乘判別分析法（OPLS-DA），將已鑒定的代謝物進行聚類，以區(qū)分各處理間代謝物的變化，并鑒定潛在的根系分泌物組分。本研究利用PCA對P處理、NA處理樣品的代謝表型進行了聚類，在PCA評分圖（圖2）中，每個數(shù)據(jù)點代表一個樣品，聚集在一起的點具有比分開的點更相似的生化組成。圖2A顯示POS模式下P處理和NA處理間的樣品能顯著區(qū)分，表明蒿柳顯著影響了根際土壤代謝物的組分和含量。隨后應(yīng)用OPLS-DA最大化各處理樣品間差異，如圖2所示，在POS模式和NEG模式下P處理和NA處理的樣品均有明顯的分離。應(yīng)用OPLS-DA生成的載荷圖和VIP評分（表1）來解釋代謝模式，在POS和NEG模式下總共篩選到18種化合物并將其假定為根系分泌物組分，包括丙二酸、乙醛酸、鄰苯二甲酸、4-甲基-2-氧戊酸、癸酸、十五烷酸、十六烷二酸、蓖麻油酸、棕櫚油酸、反式亞油酸等有機酸，半胱氨酸等氨基酸，葡萄糖、海藻糖、松二糖等糖類，5-羥基水楊酸酯等酯類，此外還有脯氨酸甜菜堿、L-抗壞血酸2-磷酸鈉、5′-甲硫腺苷等小分子代謝物。

表1 NA和P處理條件下土壤樣品間差異顯著的潛在根系分泌物組分Table 1 Potential root exudate components of soil samples between NA and P treatment (n = 6)

圖2 蒿柳根際土壤代謝物的多元分析。POS模式下的（A）PCA評分圖，（C）OPLS-DA評分圖；NEG模式下的（B）PCA評分圖，（D）OPLS-DA評分圖Fig.2 Multivariate analysis of rhizosphere soil metabolites from S. viminalis. (A) PCA scores plots and (C) OPLS-DA scores plots of OPLS-DA under POS mode; (B) PCA scores plots and (D) OPLS-DA scores plots of OPLS-DA under NEG mode

2.3 各處理對土壤代謝物組分和含量的影響

采用PCA對NA、M、P、PMR處理樣品的代謝表型進行分類，圖3顯示POS模式和NEG模式下各處理間的樣品均能明顯區(qū)分，表明各處理對土壤代謝物組分和含量均有不同影響。隨后，采用OPLS-DA對各處理間樣品兩兩比較生成的載荷圖，結(jié)合VIP評分篩選差異代謝物。由圖4可知，在POS模式下M處理、P處理相較于NA處理相對含量上調(diào)和下調(diào)的差異代謝物數(shù)量相當(dāng)（相差 ＜ 15），但在NEG模式下相對含量上調(diào)的代謝物數(shù)量遠大于（相差 ＞ 150）下調(diào)的代謝物數(shù)量；兩種模式下，M處理相較于P處理樣品相對含量上調(diào)的代謝物數(shù)量大于（相差 ≥ 50）下調(diào)的代謝物數(shù)量；兩種模式下，PMR處理相比其它處理樣品相對含量下調(diào)的代謝物數(shù)量都大于（相差32-186）上調(diào)的代謝物數(shù)量。

圖3 各處理土壤樣品代謝物的PCA評分圖。（A）POS模式；（B）NEG模式Fig.3 PCA scores plots of soil metabolites among NA, M, P, and PMR treatments. (A) POS mode; (B) NEG mode

圖4 各處理組間兩兩比較的差異代謝物統(tǒng)計Fig.4 Differential expression metabolites statistics for the pairwise comparison between treatments

2.4 各處理對18種潛在根系分泌物組分的影響

各處理對18種潛在根系分泌物組分的影響如圖5所示。相比NA處理，M處理提高了十六烷二酸、半胱氨酸、5-羥基水楊酸酯、葡萄糖、4-甲基-2-氧戊酸、5′-甲硫腺苷、反式亞油酸、鄰苯二甲酸、十五烷酸、棕櫚油酸、癸酸、乙醛酸、蓖麻油酸、海藻糖、松二糖、L-抗壞血酸2-磷酸鈉等16種代謝物的相對含量；PMR處理提高了十六烷二酸、半胱氨酸、5-羥基水楊酸酯、葡萄糖、4-甲基-2-氧戊酸、5′-甲硫腺苷、反式亞油酸、鄰苯二甲酸、十五烷酸、棕櫚油酸、癸酸等11種代謝物的相對含量，而其它代謝物的相對含量下降或變化不明顯。PMR處理相較于P處理僅提高了葡萄糖和十五烷酸等2種代謝物的相對含量，相較于M處理提高了十六烷二酸、半胱氨酸、5-羥基水楊酸酯、葡萄糖、十五烷酸、棕櫚油酸、癸酸和丙二酸等8種代謝物的相對含量。

圖5 18種根系分泌物組分的箱線圖Fig.5 Box and whisker plot of 18 compounds from root exudates.

3 討論

根際代謝組學(xué)旨在分析根土交互界面的全部代謝物，包括了植物根系分泌的諸如初生代謝物、化學(xué)信號分子等植物天然產(chǎn)物，以及根際土著微生物、外源微生物分泌的代謝產(chǎn)物[23]。本研究利用非靶向代謝組學(xué)對各處理的土壤樣品進行了檢測，在POS模式下鑒定了881種化合物，NEG模式下鑒定了828種化合物，但有許多色譜峰未被鑒定。在此基礎(chǔ)上，本研究采用PCA和OPLS-DA兩種方法對P處理蒿柳根際土壤樣品和NA處理土壤樣品的代謝物組成和含量進行了比較，結(jié)果顯示蒿柳根際土壤的代謝譜發(fā)生明顯變化，并鑒定了18種差異代謝物作為潛在根系分泌物組分。

與其它類似研究一致的是，本研究篩選的18種根系分泌物組分大多為有機酸[13,17]。其中，丙二酸、乙醛酸、鄰苯二甲酸、4-甲基-2-氧戊酸等LMWOAs對釋放固著在有機質(zhì)上的PAHs有積極影響，從而提高PAHs的生物利用度；它們還為微生物提供額外的營養(yǎng)源或改善土壤化學(xué)環(huán)境，從而提高PAHs降解微生物的數(shù)量和活性[29-30]。癸酸、十五烷酸、十六烷二酸、蓖麻油酸、棕櫚油酸、反式亞油酸等脂肪酸是疏水性化合物，它們可通過提高PAHs的溶解度進而提高植物、微生物對PAHs的可利用度[17]。與其它研究不同的是，本研究中測得的氨基酸數(shù)量較少，僅半胱氨酸一種。由于植物根系主要通過擴散等被動形式釋放氨基酸，推測該結(jié)果可能與速生植物的自身生長需要消耗大量氨基酸有關(guān)[31]。氨基酸，葡萄糖、海藻糖、松二糖等糖類同LMWOAs一樣，均為易分解化合物，可作為微生物群落的營養(yǎng)來源，對PAHs降解菌群生長有促進作用[17]。劉世亮等人[32]在研究苯并[a]芘的微生物共代謝修復(fù)時發(fā)現(xiàn)，向土壤中添加水楊酸、鄰苯二甲酸等化合物能縮短微生物馴化期和提高微生物酶活性，從而促進苯并[a]芘的共代謝降解。本研究雖未檢測到水楊酸，但檢測到了鄰苯二甲酸和5-羥基水楊酸酯，這印證了蒿柳根系分泌物可促進苯并[a]芘的生物降解的觀點。此外，在植物的乙烯合成過程中，5′-甲硫腺苷由S-腺苷甲硫氨酸（SAM）經(jīng)酶催化作用合成，SAM參與了植物的逆境生理調(diào)節(jié)[33]；L-抗壞血酸2-磷酸鈉是一種性質(zhì)穩(wěn)定、水溶性的抗壞血酸，后者具有抗氧化能力[34]；脯氨酸甜菜堿作為可配伍溶質(zhì)在鹽脅迫等逆境條件下可參與滲透勢調(diào)節(jié)的過程[35]，因而上述3種代謝物可能參與了蒿柳在PAHs污染逆境環(huán)境中的生理調(diào)節(jié)。

同樣，PCA對NA、M、P、PMR處理樣品的代謝表型進行分類的結(jié)果表明M、P和PMR處理對土壤代謝譜影響顯著。與P處理相同，M處理相較于NA處理也顯著提高了土壤代謝物的組分和含量，該結(jié)果的可能原因如下：首先，平滑白蛋巢菌或土著真菌具備分泌胞外酶的能力，如漆酶、錳過氧化物酶、木質(zhì)素過氧化物酶等，可分解土壤環(huán)境中的木質(zhì)素和PAHs等有機物，從而產(chǎn)生多種中間代謝產(chǎn)物[7]；其次，平滑白蛋巢菌和土著菌群間存在營養(yǎng)競爭或拮抗效應(yīng)，能同時刺激雙方產(chǎn)生代謝物質(zhì)介導(dǎo)微生物間的相互作用[30]。M處理相較于P處理含量上調(diào)代謝物明顯更多，表明平滑白蛋巢菌對土壤代謝組的影響大于蒿柳，因而其對土壤微生物的生物量、活性和群落結(jié)構(gòu)的影響可能更大。PMR處理相比其它處理含量上調(diào)的代謝物明顯更少。上述結(jié)果表明，蒿柳受平滑白蛋巢菌影響加強了對多數(shù)土壤化合物的吸收，致使PMR處理樣品中代謝物的積累量普遍降低。這種促進作用能加速PAHs通過集流和擴散在植物體內(nèi)積累的進程，因而與接種平滑白蛋巢菌能增強蒿柳的吸水動力和PAHs提取能力[24,36]的現(xiàn)象相吻合。此外，蒿柳-平滑白蛋巢菌聯(lián)合體系對土著微生物生長的刺激可能會加速土壤中代謝物的分解[37]，平滑白蛋巢菌對蒿柳生長的抑制效應(yīng)也不容忽視[36]，上述因素均可能導(dǎo)致土壤中代謝物含量的減少。

18種根系分泌物組分中，M處理增加了其中16種組分的含量，這與土壤總代謝物情況相同，表明活性接種物或大麥種子中富含多種根系分泌物組分。PMR處理相較于NA增加了11種組分的含量，相較于M增加了8種組分的含量，該結(jié)果與土壤總代謝物情況不同，表明了蒿柳對根系分泌物的釋放和吸收過程同步發(fā)生。接種平滑白蛋巢菌促進根際土壤中葡萄糖和十五烷酸的積累，由于平滑白蛋巢菌對蒿柳生長有抑制作用，且M處理能提高葡萄糖和十五烷酸的含量，因而這種促進作用可能僅僅是M處理和P處理的加和效應(yīng)。但PMR處理導(dǎo)致了絕大多數(shù)根系分泌物組分含量的減少，部分組分降到NA水平之下，表明平滑白蛋巢菌能促進蒿柳對多數(shù)根系分泌物組分的吸收，然而，這種促進作用弱化了植物的根際降解（植物與微生物協(xié)作降解PAHs）過程。從這個角度看來，接種平滑白蛋巢菌對植物修復(fù)的強化作用可能在于加強了植物提取過程，而非根際降解過程。

4 結(jié)論

本研究重點討論了PAHs污染土壤中接種平滑白蛋巢菌對蒿柳根際土壤代謝組的影響。首先，鑒定了18個潛在根系分泌物組分，討論了它們的功能和在PAHs污染修復(fù)中的潛在作用。接種平滑白蛋巢菌導(dǎo)致根際土壤代謝物組分和含量的明顯減少，其中有16種根系分泌物組分的含量明顯降低，推測這種現(xiàn)象可能是由于平滑白蛋巢菌促進了蒿柳根系對土壤代謝物的吸收，從而降低了根系分泌物在土壤中的積累。本研究中，接種白腐真菌促進了植物根系對多數(shù)土壤代謝物的吸收，進而加速了土壤PAHs通過集流和擴散作用在植物各組織中的積累，這對強化植物對土壤PAHs的修復(fù)效能有重要意義。綜上，本研究從根系分泌物的角度闡明了接種白腐真菌對蒿柳的生理影響，從而為揭示PAHs污染土壤植物-白腐真菌聯(lián)合修復(fù)的作用機理提供了新證據(jù)。