HPV感染的CIN和宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1和IgG2抗體表達(dá)的臨床意義

陳娟 宋化雨 程瑤瑤 謝佳

作者單位：1.四川省攀枝花市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川，攀枝花，617000

2.四川省攀枝花市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川，攀枝花，617000

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neopla?sia，CIN）的主要因子［1］。CIN 是病毒性的癌癥前體，也是宮頸癌發(fā)展的必要條件［2］。機(jī)體免疫力很大程度上決定HPV 感染的可能性，T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答在抗HPV 中發(fā)揮了重要的作用主要作用［3?4］?？谷巳轭^瘤病毒樣顆粒（Human papilloma?virus virus?like particles，HPV VLPs）免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）的G1 和G2 抗體是評(píng)價(jià)HPV感染程度的特異性標(biāo)志物，可以反映機(jī)體受HPV進(jìn)攻時(shí)出現(xiàn)的免疫反應(yīng)程度［5?6］。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子?β1（transforming growth factor?β1，TGF?β1）與細(xì)胞增殖、分化密切相關(guān)［7］。本次研究以單純HPV 感染、CIN和宮頸癌患者為研究對(duì)象，對(duì)比分析血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體水平及陽(yáng)性表達(dá)情況，探討其在宮頸病變發(fā)生發(fā)展中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2018年8月在本院接受治療的HPV 感染、CIN 和宮頸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①成年者；②TCT 結(jié)果異常、HPV?DNA陽(yáng)性、EC 及宮頸活檢或術(shù)后病理明確診斷為單純HPV 感染、CIN 和宮頸癌；③無(wú)其他生殖系統(tǒng)疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)腫瘤、全身感染、免疫疾病等患者；②臨床資料不全者；③不愿參與本項(xiàng)研究者。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)150 例，其中HPV 感染者32 例，年齡平均（43.68±11.37）歲；CIN者68 例，年齡平均（45.63±13.02）歲，CINⅠ者30例，CINⅡ～Ⅲ者38 例；宮頸癌者50 例，年齡平均（45.66±12.98）歲；同時(shí)選取同期在本院接受診治的非HPV 感染的子宮肌瘤或?qū)m頸炎者50 例作為對(duì)照組，年齡平均（45.69±13.11）歲。各組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有患者知情同意。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

收集所有受試者外周靜脈血2 mL，靜置2 h 后，常規(guī)離心后分離獲得血清，置-80℃冰箱保存。在HPV?16VLPs 包被的96 孔酶標(biāo)板上，每孔加入80 μL 樣品稀釋液；再加入20 μL 用前述方法檢測(cè)出的IgG 陽(yáng)性的血清，用酶標(biāo)儀測(cè)定在雙波長(zhǎng)450/620 nm下各孔的吸光度A 值，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作最后得到血清HPV VLPs 的IgG1、IgG2 抗體水平。另取所有受試者外周靜脈血5 mL，將血液樣品離心3 000 r/min，20 分鐘分離血清并且儲(chǔ)存在-80℃冰箱中待測(cè)嚴(yán)格按TGF?β1 ELISA 試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

臨界值（C.O）=陰性對(duì)照孔A 值均值＋0.18，參見(jiàn)試劑盒。樣品A 值（S）/C.O<1 者為HPV 抗體陰性，樣品A 值（S）/C.O≥1 者為HPV 抗體陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，用χ2比較，計(jì)量資料用（）表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析，采用Logistic回歸分析法分析影響宮頸癌患者TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體表達(dá)的相關(guān)因素。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體水平及陽(yáng)性表達(dá)情況

HPV 感染、CINⅠ、CIN Ⅱ～Ⅲ、宮頸癌及對(duì)照組患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)率及吸光度A 值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體吸光度A 值及陽(yáng)性表達(dá)的差異［n（%），（±s）］Table 1 The difference of absorbance A value and positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies［n（%），（±s）］

表1 各組血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體吸光度A 值及陽(yáng)性表達(dá)的差異［n（%），（±s）］Table 1 The difference of absorbance A value and positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies［n（%），（±s）］

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與HPV 感染比較，bP<0.05；與CINⅠ比較，cP<0.05；與CINⅡ～Ⅲ比較，dP<0.05。

組別對(duì)照組HPV 感染CINⅠCIN Ⅱ～Ⅲ宮頸癌χ2/F 值P 值HPV16VLPs?IgG1例數(shù)50 32 30 38 50 HPV16VLPs?IgG2 TGF?β1陽(yáng)性表達(dá)4（8.0）8（25.0）a 8（26.7）a 16（42.1）a 42（84.0）abcd 67.466<0.001 A 值0.195±0.028 0.209±0.052 0.517±0.124ab 0.850±0.228ab 1.439±0.303abcd 345.629<0.001陽(yáng)性表達(dá)4（8.0）8（25.0）a 9（30.0）a 16（42.1）a 40（80.0）abcd 59.600<0.001 A 值0.294±0.037 0.308±0.043 1.083±0.126ab 1.799±0.154abc 2.464±0.232abcd 1903.334<0.001陽(yáng)性表達(dá)5（10.0）9（28.1）a 9（30.0）a 15（39.5）a 38（76.0）abcd 49.458<0.001 A 值1.578±0.074 0.568±0.051a 1.613±0.088b 1.761±0.099b 1.999±0.175abcd 855.473<0.001

2.2 血清TGF?β1 與HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體的相關(guān)性

CIN Ⅱ～Ⅲ及宮頸癌患者血清TGF?β1 與HPV16VLPs?IgG1和IgG2抗體吸光度A值均呈顯著正相關(guān)（CIN Ⅱ～Ⅲ：r=0.661，P<0.001；r=0.529，P=0.001。宮頸癌：r=0.850，P<0.001；r=0.738，P<0.001）。

2.3 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)者組織低、中分化，Ⅱ～Ⅲ期，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所占比例明顯高于陰性表達(dá)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 Correlation between positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies and clinicopathological features of cervical cancer［n（%）］

2.4 宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)影響因素的Logistic 回歸分析

分別以宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)為因變量，以上述單因素分析中P<0.05 的指標(biāo)為自變量，建立Logistic 回歸模型，結(jié)果顯示，組織分化程度、FIGO 分期是宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)影響因素的Logistic 回歸分析Table 4 Logistic regression analysis of the factors affecting the positive expression of TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies in serum of cervical cancer

3 討論

HPV 感染常在一年內(nèi)自然清除，但有一部分難清除的HPV，尤其是HPV16 會(huì)導(dǎo)致CIN 甚至宮頸癌的發(fā)生［8?9］。HPV 感染能否清除或是持續(xù)感染主要取決于機(jī)體的免疫力，因此，可以將血清免疫因子水平作為感染HPV 后機(jī)體病變的評(píng)測(cè)指標(biāo)。

目前已知Th2 細(xì)胞可通過(guò)分泌炎性因子激活I(lǐng)gG1，Th1 細(xì)胞通過(guò)分泌TGF?β1 促進(jìn)其分化為IgG2［10?11］。Wang 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，HPV 感染者血清IgG1 常顯著升高，且是最終進(jìn)展為宮頸癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其宮頸癌相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)隨IgG1 水平的升高而逐漸增加。另有研究發(fā)現(xiàn)，大部分血清IgG 抗體（+），而HPV16?DNA（-）的正常女性，其血清抗體主要以IgG2 為主；而48%的HPV16?DNA（+）的CIN 及5%的HPV16?DNA（+）的宮頸癌女性，也能檢測(cè)出以IgG2 為主的抗體，提示HPV 感染后以HPV16VLPs?IgG2 抗體為主的免疫反應(yīng)可能對(duì)HPV 感染清除及CIN 的逆轉(zhuǎn)具有重要預(yù)測(cè)價(jià)值［13?14］。而楊文靜等［15］的研究發(fā)現(xiàn)，CIN 和宮頸癌患者血清內(nèi)TGF?β1 及其受體的濃度均明顯升高，TGF?β1 與癌細(xì)胞浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和癌癥分期等密切相關(guān)，提示TGF?β1 高表達(dá)是宮頸癌的主要表現(xiàn)之一，并參與宮頸癌變的發(fā)生發(fā)展。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著宮頸病變級(jí)別的升高，血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)率及吸光度A 值也隨之升高，表明各指標(biāo)血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性既代表現(xiàn)存HPV 感染，也可表示既往HPV 感染，是累積HPV 的指標(biāo)而HPV16VLPs?IgG抗體表達(dá)可能通過(guò)對(duì)血清TGF?β1 表達(dá)的調(diào)控而促進(jìn)宮頸病變的發(fā)生發(fā)展。另外，非HPV 感染子宮病變、HPV 感染、CINⅠ患者以IgG2 抗體表達(dá)為主，CIN Ⅱ～Ⅲ及宮頸癌患者則以IgG1 抗體表達(dá)為主，提示病毒清除與Th1 反應(yīng)有關(guān)，而隨宮頸病變程度級(jí)別的升高逐漸向Th2 反應(yīng)轉(zhuǎn)變。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織低、中分化程度以及FIGO 分期為Ⅱ～Ⅲ期是宮頸癌患者TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示檢測(cè)TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽(yáng)性表達(dá)情況可能對(duì)評(píng)估宮頸癌病情及預(yù)后具有一定的參考價(jià)值。

本研究由于HPV 血清檢測(cè)存在時(shí)間差異，HPV 感染后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)才能在血清中檢測(cè)到，許多新近感染HPV 的患者因尚未發(fā)生血清轉(zhuǎn)換而抗體檢測(cè)陰性，在接下來(lái)的研究中需要對(duì)HPV 相關(guān)指標(biāo)作更加準(zhǔn)確的分析，為HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體、TGF?β1 成為HPV 相關(guān)疾病的診斷、治療的有效指標(biāo)提供依據(jù)。