塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)麻痹性貝類毒素能力的研究

汪 宇，張海燕，隋延鳴，湯云瑜，孔 聰，王 媛，劉淑晗，蔡友瓊，沈曉盛

（1.中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090；2.上海海洋大學食品學院，上海 201306）

麻痹性貝類毒素（paralytic shellfish poisoning，PSP）是一類海洋生物毒素的統(tǒng)稱，常被發(fā)現(xiàn)于雙殼貝類中，主要作用于鈉離子的傳輸通道，阻礙神經(jīng)沖動的傳輸，從而產(chǎn)生麻痹作用。人類食用攜帶PSP的貝類后極易引起食物中毒，甚至死亡，死亡率可達1.5%［1］。目前，已發(fā)現(xiàn)的PSP組分至少有24種［2］，主要來源于有毒的海洋甲藻，包括亞歷山大藻屬（Alexandrium）、鏈狀裸甲藻（Gymnodiniumcatenatum）和巴哈馬麥甲藻（Pyrodiniumbahamense）等。而最近的一些研究發(fā)現(xiàn)，某些海洋藍細菌也能夠產(chǎn)生PSP［3］。已有專家探究了溫度、光照、鹽度、養(yǎng)分、pH等對亞歷山大藻屬的微小亞歷山大藻（A.minutum）和塔瑪亞歷山大藻（A.tamarense）生長及毒素組成的影響［4－11］。研究這些地理上廣泛分布的有毒海洋甲藻產(chǎn)PSP的能力，有助于對藻類毒性引起的海洋污染風險進行評估。

就我國來看，PSP污染情況不容樂觀，僅2017—2019年，我國福建漳州和河北秦皇島就發(fā)生多起PSP中毒事件，不僅威脅到人類的生命安全，也造成了海水養(yǎng)殖業(yè)的巨大經(jīng)濟損失。對此，我國政府高度重視，組織開展PSP監(jiān)測項目，完善PSP風險監(jiān)控體系。相關(guān)科研人員也積極投入PSP研究中，比如，研發(fā)更高效的PSP檢測手段、探究PSP在貝類中的代謝規(guī)律、分析產(chǎn)PSP藻類在不同環(huán)境中的生長及產(chǎn)毒能力等［12－13］。有研究表明，全球絕大多數(shù)PSP事件皆由亞歷山大藻屬藻類引起，該屬藻類目前已通過形態(tài)學確定的有30多種，其中一半以上被發(fā)現(xiàn)能夠產(chǎn)生PSP，且毒素成分多樣［1，14］。ZOU等［15］對67株分離自我國沿海的塔瑪亞歷山大藻PSP組分研究發(fā)現(xiàn)，不同藻株P(guān)SP成分存在較大差異，但主要成分基本相似。然而，對于該物種產(chǎn)PSP能力的研究仍然較有限。

塔瑪亞歷山大藻是一種典型的產(chǎn)PSP的甲藻，全球分布廣泛，是造成我國貝類受PSP污染的主要藻類之一。相關(guān)專家對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒情況進行了 研究［5，8，11，16－17］，但對該 藻產(chǎn)PSP能力的研究仍不夠透徹，迄今尚少見外界環(huán)境因素對塔瑪亞歷山大藻中PSP組成影響的研究報道［18］，其毒性強弱對人類生命安全的風險也未見評估。因此，本文選取塔瑪亞歷山大藻作為研究對象，將塔瑪亞歷山大藻置于不同鹽度、生長空間和營養(yǎng)素濃度下培養(yǎng)，分析其總毒素及各毒素組分含量，探究其產(chǎn)PSP能力，以期為PSP的基礎(chǔ)研究以及標準品制備等提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藻株來源

塔瑪亞歷山大藻GY-H31于2018年9月購自光語生物科技有限公司，藻株分離自我國東海長江入?？?。

1.1.2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基及海水

藻類培養(yǎng)所需培養(yǎng)基參考GUILLARD和RYTHER［19］的改良f／2培養(yǎng)基，自行配置。

海水由天然海鹽配置，海鹽購自以色列Red Sea公司，按照25.0 g海鹽∶1 L超純水配置成鹽度為25的海水。

1.1.3 化學試劑

冰乙酸（分析純），購自國藥集團化學試劑有限公司；甲酸（色譜純）、甲酸銨（色譜純）、乙腈（色譜純），購自美國J.T.Baker公司。

PSP標準品，包括石房蛤毒素（saxitoxin，STX）、新石房蛤毒素（neosaxitoxin，NEO）、膝溝藻毒素1-4（gonyautoxin 1-4，GTX1-4）、N-磺酰氨甲?；惗舅?-2（N-sulfocarbamoylgonyautoxin 1-2，C1-2）、N-磺 酰 氨 甲 酰 基 類 毒 素5（gonyautoxin 5，GTX5）、脫氨甲酰基石房蛤毒素（decarbamoylsaxitoxin，dcSTX）、脫氨甲?；率扛蚨舅兀╠ecarbamoylneosaxitoxin，dcNEO）、脫氨甲?；显宥舅?2-3（decarbamoylgonyautoxins 2-3，dcGTX2-3）均購自加拿大國家海洋生物研究所（National Research Council Canada）。

1.1.4 主要儀器

Ultimate 3000超高壓液相色譜-Q-Exactive靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，美國Thermo Fisher公司；16RXⅡ高速冷凍離心機，日本HITACHI CF公司；Milli-Q超純水機，美國Millipore公司；VCX500超聲波破碎儀，美國Sonics公司；MGC-300B光照培養(yǎng)箱，上海一恒科學儀器有限公司；XSP-44X9多用途生物顯微鏡，上海光學儀器一廠；超潔凈工作臺，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；LT-CPS80D高壓蒸汽滅菌鍋，澳大利亞LERD-Tech公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 藻株的活化與確認

藻株4℃轉(zhuǎn)移至實驗室后，取出1 mL置于顯微鏡下進行鑒定［20］，其余藻液立即接種于鹽度為25的f／2培養(yǎng)基中，置于25℃、光照4 000 lx、12∶12光暗循環(huán)的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。約十天取出1 mL于顯微鏡下觀察，視野中藻細胞均處于游動狀態(tài)，且存在細胞壁相連的細胞，表明藻種活力良好，可用于實驗。

1.2.2 藻株的保存

塔瑪亞歷山大藻培養(yǎng)二十天左右后，傳代接種，并按照活化條件培養(yǎng)，以保留藻種。

1.2.3 空間效應對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒影響

設(shè)置0.1、0.5、1.0 L共3個生存空間（即f／2培養(yǎng)基體積）梯度，每個梯度3組重復。將指數(shù)生長期的塔瑪亞歷山大藻分別接種于含有以上體積培養(yǎng)基的250 mL、1 L、2 L錐形瓶中，初始密度400個·mL－1、溫度25℃，鹽度25、光照4 000 lx、12∶12光暗循環(huán)。每天定時振蕩錐形瓶。在培養(yǎng)期第18天（以接種日期為第0天計算）收集相同數(shù)量的藻細胞進行PSP測定。

1.2.4 鹽度對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒影響

依據(jù)塔瑪亞歷山大藻能夠存活的鹽度范圍，設(shè)置15、25、35共3個鹽度梯度，每個梯度3組重復。將指數(shù)生長期的塔瑪亞歷山大藻接種于含有1 L f／2培養(yǎng)基的2 L錐形瓶中，初始密度為400個·mL－1、溫度25℃、光照4 000 lx、12∶12光暗循環(huán)。每天定時振蕩錐形瓶。在培養(yǎng)期第18天收集相同數(shù)量的藻細胞進行PSP測定。

1.2.5 營養(yǎng)素濃度對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒影響

設(shè)置1／4倍、1倍、4倍3個營養(yǎng)素濃度梯度，每個梯度3組重復。將指數(shù)生長期的塔瑪亞歷山大藻分別接種于含有1 L的1／4倍、1倍和4倍f／2培養(yǎng)基濃度的2 L錐形瓶中，初始密度為400個·mL－1、溫度25℃、鹽度25、光照4 000 lx，12∶12光暗循環(huán)。每天定時振蕩錐形瓶。在培養(yǎng)期第18天收集相同數(shù)量的藻細胞進行PSP測定。

1.2.6 PSP測定

1.2.6.1 毒素提取

離心收集相同數(shù)量的藻細胞于50 mL聚丙烯離心管中，加入20 mL 0.05 mol·L－1的乙酸溶液，在冰浴條件下于細胞破碎儀中超聲處理5 min（200 W，超20 s停40 s），隨后超聲波輔助提取15 min。4℃下4 000 r·min－1離心10 min，取上清液1 mL于超濾離心管（10 000 u）中，4℃下10 000 r·min－1離心10 min，取超濾液于進樣小瓶中，4℃下保存待分析。

1.2.6.2 儀器條件

儀器條件參考GB 5009.213-2016中液相色譜-質(zhì)譜條件［21］。樣品分析在Ultimate 3000超高壓液相色譜-Q-Exactive靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)上進行。色譜柱為TSK-gel Amide-80（3μm，2 mm×15 cm）。

色譜條件：柱溫30℃，樣品溫度為4℃，進樣量10μL，流動相A為甲酸銨緩沖溶液（含5 mmol·L－1甲酸銨和0.1%甲酸），B為酸化乙腈（含5 mmol·L－1甲酸銨和0.1%甲酸），梯度洗脫條件：0～3 min，70%B；3～4 min，70%～60%B；4～16 min，60%B；16～19 min，60%～5%B；19～23 min，5%B；23～27 min，5%～70%B；27～35 min，70%B。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI）平行反應監(jiān)測（PRM）模式，噴霧電壓：3 200 V（＋），2 800 V（－）；鞘氣：40氣體流速單位（arb）；輔助氣：10氣體流速單位（arb）；吹掃氣：1氣體流速單位（arb）；氣體加熱溫度：350℃；離子傳輸管溫度：325℃。

1.3 數(shù)據(jù)分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0和Origin Pro 8軟件進行處理。采用單因子方差分析，并進行事后多重比較（Duncan檢驗），P＜0.05表示差異顯著。

試樣中PSP總毒素含量（STXeq）參考如下公式計算：

式中，STXeq為試樣中PSP總毒素含量（μg）；Xi為各種PSP的含量（μg），ri為PSP的毒性因子（表1）。

表1 PSP毒性因子Tab.1 Toxicity factor of PSP

2 結(jié)果與分析

2.1 塔瑪亞歷山大藻中PSP組分分析

表2是塔瑪亞歷山大藻經(jīng)培養(yǎng)后收集獲得的1.0×106個藻細胞中PSP組成及含量。從表2中可以看出，塔瑪亞歷山大藻至少含有13種PSP組分，可以推測塔瑪亞歷山大藻是貝類中PSP的來源之一。ANDERSON等［14］的報道也證實了這一點。從各組分的含量來看，不同組分的含量差異較大，每1.0×106個塔瑪亞歷山大藻細胞能夠檢出17.171μg毒素，GTX1、GTX4、GTX5、C1、C2為主要成分，占毒素總含量的97.2%（質(zhì)量分數(shù)），其中僅GTX1和GTX4為高毒性成分，表明塔瑪亞歷山大藻的毒性強弱主要體現(xiàn)在GTX1和GTX4含量的高低。

表2 塔瑪亞歷山大藻中PSP毒素成分及含量Tab.2 Toxin profile and content of PSP in A.tamarense

2.2 不同PSP組分定量的最低藻細胞數(shù)量分析

塔瑪亞歷山大藻中PSP組分定量與藻細胞數(shù)量關(guān)系如圖1所示。不同毒素組分的定量與藻細胞數(shù)量高低存在明顯差異，當藻細胞數(shù)量低于4.0×103個時，13種組分均不能定量檢出；當藻細胞數(shù)量在4.0×103個至5.9×106個之間時，不能完全定量出13種組分；只有當藻細胞數(shù)高于5.9×106個時，13種組分才均能夠檢出。從PSP各組分定量所需藻細胞數(shù)量表明，GTX1和GTX4檢出定量所需藻細胞量最少，高于4.0×103個藻細胞就可以達到定量分析要求；dcSTX和dcNEO定量所需藻細胞數(shù)量最多，藻細胞數(shù)量必須分別為3.0×106個和5.9×106個以上；STX、NEO、GTX2和GTX3需要至少1.0×105個藻細胞才可被定量；其余組分定量所需藻細胞數(shù)基本處于1.0×104～1.0×105個。該結(jié)果與表2中毒素含量百分比不完全相同，質(zhì)量分數(shù)高的毒素其定量所需藻細胞數(shù)不一定高，說明各組分定量所需藻細胞數(shù)還與毒素本身響應值有關(guān)。為保證13種毒素成分均能夠更方便、快捷地被檢出，本實驗將藻細胞數(shù)均取值在6.0×106個以上。

圖1 不同PSP組分定量限與藻細胞數(shù)之間的關(guān)系Fig.1 Relationship between LOQ of each PSP toxin and the number of A.tamarense cells

2.3 空間效應對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力的影響

圖2是3種不同空間效應培養(yǎng)條件下收集的相同數(shù)量的藻細胞的總毒素含量?？梢钥闯?，空間效應對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力的影響存在一定的差異，0.1 L與1.0 L培養(yǎng)條件下的總毒素含量表現(xiàn)出顯著性差異（Duncan檢驗，P＜0.05），說明在相同環(huán)境下，培養(yǎng)空間與PSP的合成存在一定相關(guān)性。圖3的結(jié)果表明，空間效應會影響總毒素含量，但對各組分的定量檢出沒有影響，13種PSP均能檢出。但毒素組分的含量在不同空間效應下存在一定差異，其中dcSTX、STX、GTX2含量均表現(xiàn)出顯著性差異（P＜0.05），dcSTX、STX在0.1 L培養(yǎng)條件下含量最高，分別為0.27、0.33μg，GTX2在1.0 L培養(yǎng)條件下含量最高，為0.12μg。而GTX1、GTX3均未出現(xiàn)由生長空間引起的顯著性差異（P＞0.05），這表明空間效應不會影響塔瑪亞歷山大藻合成GTX1、GTX3，其總毒素含量的差異主要體現(xiàn)在其余毒素成分含量的高低。

圖2 空間效應對塔瑪亞歷山大藻中總毒素含量的影響Fig.2 Impact of spatial effects on the total toxin content in A.tamarense

圖3 空間效應對塔瑪亞歷山大藻中PSP各組分含量的影響Fig.3 Impact of spatial effects on each PSP toxin content in A.tamarense

2.4 鹽度對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力的影響

圖4是3種不同鹽度培養(yǎng)條件下收集的相同數(shù)量藻細胞的總毒素含量，可以看出，鹽度25培養(yǎng)組塔瑪亞歷山大藻總毒素含量與鹽度35培養(yǎng)組無顯著性差異（P＞0.05），但均顯著高于鹽度15培養(yǎng)組（P＜0.05）。說明在相同環(huán)境下，鹽度對毒素的合成具有一定的影響。圖5是鹽度對塔瑪亞歷山大藻中PSP各組分含量影響，觀察到各組分均能夠定量檢出，且單一組分的含量在不同鹽度條件下均存在一定的差異。其中鹽度對STX、NEO、dcGTX2、GTX4、GTX2、GTX3、dcNEO、C1形成均表現(xiàn)出顯著性影響（P＜0.05）。NEO、dcGTX2、GTX2、GTX3、dcNEO、C1含量均在鹽度35培養(yǎng)組達到峰值，分別為2.18、0.31、0.34、0.32、0.06、34.86μg；STX含量在鹽度15培養(yǎng)組最高，為0.20μg；GTX4含量在鹽度25培養(yǎng)組最高，為12.00 μg。但鹽度不影響塔瑪亞歷山大藻dcGTX3的合成（P＞0.05）。GTX1含量在鹽度25培養(yǎng)組與鹽度35培養(yǎng)組無顯著性差異（P＞0.05），這可能是鹽度25培養(yǎng)組和鹽度35培養(yǎng)組總毒素含量無顯著差異的一個原因。

圖4 鹽度對塔瑪亞歷山大藻總毒素含量的影響Fig.4 Impact of salinity on the total toxin content in A.tamarense

2.5 營養(yǎng)素濃度對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力的影響

圖6是3種營養(yǎng)素濃度培養(yǎng)條件下收集的相同數(shù)量藻細胞的總毒素含量，可以看出，營養(yǎng)素濃度對塔瑪亞歷山大藻的總毒素含量有顯著影響（P＜0.05），總毒素含量在1／4倍營養(yǎng)素濃度下達到最高，為89.15μg；而在4倍營養(yǎng)素濃度時降到最低，僅有42.62μg。表明在相同環(huán)境下，塔瑪亞歷山大藻總毒素含量與營養(yǎng)素濃度呈負相關(guān)。圖7顯示，13種毒素組分均在1／4營養(yǎng)素濃度時達到最高。在本研究中，營養(yǎng)素濃度對dcGTX2、dcGTX3、GTX1、GTX4、GTX5、GTX3、C1、C2的合成均有顯著影響（P＜0.05）。

圖7 營養(yǎng)素濃度對塔瑪亞歷山大藻中PSP各組分含量的影響Fig.7 Impact of medium nutrient rate on each PSP toxin content in A.tamarense

注：不同小寫字母表示有顯著差異（P＜0.05）；總毒素含量由6.0×106個藻細胞計算得出Note：Different lowercase letters denote significant difference（P＜0.05）；total toxin content is calculated from 6.0×106 algal cells

3 討論

3.1 塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力

塔瑪亞歷山大藻是所有能夠產(chǎn)生PSP的甲藻中分布最廣泛、認知度最高的物種之一［14］，而不同地區(qū)的藻株產(chǎn)生的PSP成分不盡相同［15，22］。在本研究中，由于受到標準品數(shù)量的限制，該塔瑪亞歷山大藻種共發(fā)現(xiàn)有13種PSP組分，這與徐金濤等［11］的研究結(jié)果基本一致。DEEDS等［3］、WIESE等［23］以及TAN和RANSANGAN［1］的研究發(fā)現(xiàn)，塔瑪亞歷山大藻中有C4和GTX6存在，這說明該藻種的產(chǎn)毒能力非常強，目前來看至少能夠產(chǎn)生15種毒素。本研究采用的塔瑪亞歷山大藻的毒素成分主要為GTX1、GTX4、GTX2、C1、C2和NEO，其中GTX1含量更是高達40%，并且當藻細胞數(shù)高于4.0×103個時即可用于定量分析，表明GTX1的含量直接決定了該藻株毒性的強弱。由此看來，塔瑪亞歷山大藻種可用于PSP的基礎(chǔ)研究，亦是分離提取GTX1的最佳理論藻株。

3.2 環(huán)境脅迫下塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力差異

在海洋中，單細胞藻類用于生長與代謝的空間資源是有限的，在資源限制下，不僅存在種間競爭，也存在種內(nèi)競爭，而有害藻類的生理條件可隨著時間和空間變化而變化［24－25］。在資源有限的環(huán)境中，塔瑪亞歷山大藻處于種間競爭劣勢［26］，生長及產(chǎn)毒也必然受到抑制；而當環(huán)境中僅存在塔瑪亞歷山大藻時，因為沒有其他物種的競爭壓力，種內(nèi)競爭趨勢逐漸顯現(xiàn)。在本研究中，塔瑪亞歷山大藻的總毒性與生存空間成正相關(guān)，這說明生存空間的增加顯然更有利于塔瑪亞歷山大藻中PSP的合成。較大的生存空間和較低的繁殖速率保證了更多的PSP合成所需前體物質(zhì)（如精氨酸）的積累［27］，同時相對較低的細胞密度意味著單位藻細胞能夠利用相對多的營養(yǎng)素，這種協(xié)同效應最終促進了塔瑪亞歷山大藻的產(chǎn)毒能力差異性的形成。

鹽度主要是通過調(diào)節(jié)細胞與外界的離子交換速率來影響塔瑪亞歷山大藻的產(chǎn)毒能力［28］。塔瑪亞歷山大藻具有廣鹽性的特征，本實驗結(jié)果顯示，該藻株在鹽度15～35均能夠長時間存活，這主要體現(xiàn)在對外界滲透壓的適應性［29］。環(huán)境鹽度越低，細胞內(nèi)部與外界的濃度差越大，細胞需要消耗更多的能量以維持滲透平衡，這導致毒素合成速率較低；而外界環(huán)境過高的滲透壓則會使藻細胞更易丟失水分，不利于塔瑪亞歷山大藻的生長及毒素的合成［30］。在本研究中，塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力在鹽度為25時達到峰值，葉志林等［8］發(fā)現(xiàn)塔瑪亞歷山大藻的產(chǎn)毒能力隨著鹽度增加而提高，在鹽度35時達到最高；而LIM和OGATA［31］的研究表明，塔瑪亞歷山大藻在鹽度25時產(chǎn)毒能力最低。引起這種差異的原因可能是藻株生長的水域不同，環(huán)境的差異加上長時間的適應，使得塔瑪亞歷山大藻對其所處海域的鹽度最為適應，其產(chǎn)毒能力也最高［15］。研究還發(fā)現(xiàn)G.catenatum和A.peruvianum毒素含量均在鹽度30時達到最高［15］，本實驗結(jié)果與其相似。另外，環(huán)境鹽度的差異性也會改變塔瑪亞歷山大藻中GTX的組成，隨著鹽度的上升，毒性強的組分百分比含量增加，如GTX4含量的增加以及GTX5含量的減少［28］。

對于塔瑪亞歷山大藻，營養(yǎng)素提供了生長所必需的養(yǎng)分，氮元素決定了PSP的合成。有研究表明［22，28］，在氮元素不足時，塔瑪亞歷山大藻的PSP含量和毒性均較低，但本研究中低營養(yǎng)素濃度組中，氮元素含量仍處于相對較高狀態(tài)，與上述現(xiàn)象不同。在本研究中，營養(yǎng)素濃度對塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒能力存在顯著影響，營養(yǎng)素濃度越高，產(chǎn)毒能力越弱。推測當環(huán)境中營養(yǎng)素含量較低時，塔瑪亞歷山大藻的種內(nèi)競爭增加，而適當?shù)母偁幱欣趥€體的生長和代謝。攝入的能量更多地用于增加自身在環(huán)境中的競爭力，涉及細胞分裂的營養(yǎng)需求減弱，細胞生化反應增加，更多的精氨酸可用于PSP的合成［32］。WANG和HSIEH［28］發(fā)現(xiàn)，增加培養(yǎng)液硝酸鹽濃度，塔瑪亞歷山大藻中GTX1含量比例下降，而GTX5含量比例上升，過低或過高的磷酸鹽濃度均會抑制塔瑪亞歷山大藻產(chǎn)毒；也有研究［28］發(fā)現(xiàn)，氮元素的限制有利于GTX1、GTX4的合成，而磷元素的限制有利于GTX2、GTX3的合成。這說明在一定范圍內(nèi)，低營養(yǎng)環(huán)境中，塔瑪亞歷山大藻高毒性成分含量較高，而低毒性成分含量較低，這使得該藻株在營養(yǎng)限制下仍有較高的毒性。此外，筆者在預實驗中發(fā)現(xiàn)，當營養(yǎng)素濃度低于1／4倍時，塔瑪亞歷山大藻生長速度逐漸降低，這并不利于毒素的提取與分析。

3.3 海洋中高PSP毒性的有害藻華暴發(fā)風險性

海洋生態(tài)系統(tǒng)具有自我調(diào)節(jié)能力，可維持水體環(huán)境在一定的范圍內(nèi)波動。而當氣候驟變或產(chǎn)生人為干預，外力因素超出了海洋自我調(diào)節(jié)的可承受范圍時，水體環(huán)境會發(fā)生較大改變，這將對海洋藻類產(chǎn)生巨大影響［33］。一般情況下，海洋環(huán)境并不適宜塔瑪亞歷山大藻大量繁殖，水體中僅可能存在微量的營養(yǎng)細胞，亦或是以孢囊的形式存在于底泥中［34］。我國是貝類養(yǎng)殖大國，養(yǎng)殖區(qū)遍布沿海各處，水體交換優(yōu)良，利于產(chǎn)毒藻的遷移和養(yǎng)分的補充，且我國近海海水鹽度基本處于25～35，可見我國海洋環(huán)境皆具備滿足塔瑪亞歷山大藻高產(chǎn)毒能力的條件，這提示了高PSP毒性藻類增殖的風險，且該風險在水體富營養(yǎng)化時顯著增加。

本研究結(jié)果表明，具有高PSP毒性的有害藻華可能發(fā)生在鹽度高、空間充足、富營養(yǎng)化程度較高的海洋環(huán)境中。因此，為降低高PSP毒性的有害藻華暴發(fā)的風險，應加大符合以上條件海域的監(jiān)管力度。