投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚生長性能、肌肉粗營養(yǎng)及血清生化指標(biāo)的影響

方可菲，劉鑒毅，王 妤，馮廣朋，鄒 雄，郝長杰，余焱方，孫雪娜

（1.上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心，上海 201306；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，長江口漁業(yè)生態(tài)重點實驗室，上海 200090）

長鰭籃子魚（Siganuscanaliculatus）隸屬于鱸形目（Perciformes），籃子魚科（Siganidae），籃子魚屬，屬暖水性近海魚類，在我國主要分布于東海、南海和臺灣海域［1］。長鰭籃子魚以藻類為食，在養(yǎng)殖過程中可起到清潔網(wǎng)箱網(wǎng)衣的作用，對養(yǎng)殖環(huán)境有正向的生態(tài)價值，因此成為我國重要的海洋經(jīng)濟魚類之一。近年來，海南、廣東、福建沿海的長鰭籃子魚網(wǎng)箱養(yǎng)殖逐漸增多并趨于規(guī)?；?］。實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，常通過以低頻率投喂高營養(yǎng)密度日糧或以高頻率投喂低營養(yǎng)密度日糧的投喂模式來提高經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類的生長效益［3］，但較低的投喂頻率可能會導(dǎo)致養(yǎng)殖動物饑餓、相互攻擊和自相殘殺［4］，而過高的投喂頻率則會在一定程度上影響魚體的健康［5］。

魚類生長通常會受餌料的類型與規(guī)格、投喂頻率、投喂率及魚吸收養(yǎng)分能力等因素影響［6］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，投喂頻率是影響魚類生長性能的關(guān)鍵因素之一［7］。了解投喂頻率對魚類生長的影響，有助于在養(yǎng)殖實踐中提高魚類的生長性能；通過研究魚類各項生理指標(biāo)受投喂頻率的影響情況，還可評估魚體的健康狀況，為防治各種魚類疾病提供參考依據(jù)［8］。因此，設(shè)置科學(xué)的投喂頻率對于魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)至關(guān)重要［9］。

本研究以長鰭籃子魚幼魚為研究對象，對不同投喂頻率下其生長指標(biāo)、肌肉粗營養(yǎng)成分及血清生化指標(biāo)等進行測定，對各投喂頻率下魚的生長效益進行評估，旨在為長鰭籃子魚及同屬其他魚類的生產(chǎn)管理提供相關(guān)參考數(shù)據(jù)和資料。

1 材料與方法

1.1 實驗用魚及飼料

實驗用魚為福建省東山縣近海捕獲的野生樣本，運至中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所福建福鼎基地，在直徑6 m、深2 m（有效容積1 000 L）的圓形暫養(yǎng)池中暫養(yǎng)4周，使其適應(yīng)實驗環(huán)境。暫養(yǎng)期間每天定時定點投喂2次（7∶00和17∶00）實驗飼料。

實驗所用飼料購自福建海大飼料有限公司（飼料名稱：籃子魚膨化配合飼料），暫養(yǎng)期間飼料規(guī)格為1號。飼料粗成分：粗蛋白40.5%、粗脂肪5.2%、粗纖維3.39%、粗灰分15.1%、賴氨酸2.21%、水分10.25%、總磷1.53%。

1.2 實驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理

選擇1 200尾大小一致、魚體外部無明顯損傷、初始平均體質(zhì)量為（4.14±0.74）g的長鰭籃子魚幼魚，隨機分養(yǎng)于12個養(yǎng)殖桶中（桶直徑1.5 m、高0.7 m，有效容積125 L）。實驗期間，采用表觀飽食投喂，設(shè)置4個投喂頻率分別為1次·d－1（F1組）、2次·d－1（F2組）、3次·d－1（F3組）及4次·d－1（F4組），每組設(shè)置3個平行。養(yǎng)殖周期為2019年7—11月共16周。各組投喂頻率和投喂時間見表1。

表1 長鰭籃子魚幼魚投喂時間和投喂頻率Tab.1 Feeding time and frequency of juvenile S.canaliculatus

實驗過程中每次投喂至飽食狀態(tài)，投喂結(jié)束30 min后收集每缸的殘餌，置于烘箱65℃烘干并稱重。實驗期間記錄每次投喂餌料質(zhì)量及殘餌質(zhì)量。養(yǎng)殖用水為經(jīng)過沉淀砂濾的新鮮海水。實驗期間養(yǎng)殖水體各項水質(zhì)指標(biāo)為：鹽度19～21，水溫25～30℃，溶解氧含量＞5 mg·L－1、氨氮濃度＜0.5 mg·L－1，pH值6.8～7.2。整個養(yǎng)殖過程采用微流水并24 h連續(xù)充氣，日換水1次，換水率100%。

1.3 生長數(shù)據(jù)測量方法及計算

每隔4周對每組實驗用魚進行體質(zhì)量與體長的測量。每組隨機選取30尾魚，禁食24 h，用麻醉劑（MS-222，100 mg·L－1）麻醉后進行測量。增重率、體質(zhì)量變異系數(shù)及體長變異系數(shù)根據(jù)每次測量實驗用魚的體質(zhì)量與體長計算可得。特定生長率、餌料系數(shù)、攝食率、成活率在實驗結(jié)束時進行測量計算。

生長指標(biāo)的計算公式如下：

式中：W0、Wt分別為實驗開始和結(jié)束時長鰭籃子魚幼魚的體質(zhì)量（g）；t為實驗天數(shù)（d）；I為實驗期間總攝食量（g）；Nt、N0分別為實驗結(jié)束時魚的尾數(shù)和實驗開始時魚的尾數(shù)；SD為標(biāo)準(zhǔn)差；W、L為魚的體質(zhì)量（g）、體長（cm）。

1.4 形態(tài)指標(biāo)測量方法

每組隨機取10尾實驗用魚稱量體質(zhì)量及內(nèi)臟質(zhì)量，再分別稱取肝胰臟、脾臟及腸的質(zhì)量（精確到0.000 1 g），用于計算臟體比、肝體比、脾體比和腸體比；并測量腸及魚體長度，計算出腸長比。

形態(tài)指標(biāo)計算公式如下：

式中：WV、WH、WS、WI分別為內(nèi)臟質(zhì)量、肝胰臟質(zhì)量、脾臟質(zhì)量及腸道質(zhì)量（g），WB為魚體質(zhì)量（g）；L為魚體長（cm），LI為魚腸道長（cm）。

1.5 體成分指標(biāo)測量方法

內(nèi)臟數(shù)據(jù)測定后，在魚背鰭基部取適量去皮肌肉，保存在－80℃冰箱用于魚體粗營養(yǎng)成分指標(biāo)的測定。采用直接干燥法測定水分含量（GB／T 5009.3-2003）；凱氏定氮法測定粗蛋白質(zhì)含量（GB／T 5009.5-2003）；索氏抽提法測定粗脂肪含量（GB／T 5009.6-2003）；灼燒稱重法測定灰分含量（GB／T 5009.4-2003）。

1.6 血清生化指標(biāo)測定方法

每組隨機取實驗用魚15尾，分成3個平行，用1 mL注射器采集魚尾靜脈血，將每個平行5尾魚尾靜脈血混合后在4℃冰箱內(nèi)靜置2 h，再以3 000 r·min－1冷凍離心15 min，取出上層血清，保存于干冰中用于后續(xù)血清生化指標(biāo)的測定。血清生化指標(biāo)：總蛋白（TP）、球蛋白（ALB）、血糖（GLU）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TGK）、總膽固醇（TCHO）、堿性磷酸酶（ALP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）均采用南京建成試劑盒進行測定。

1.7 統(tǒng)計分析方法

所有實驗數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。采用Excel軟件對數(shù)據(jù)進行常規(guī)計算與統(tǒng)計，用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，用Levene方法進行方差齊性檢測，用單因素方差分析（one-way ANOVA）檢驗實驗處理的影響，用Turkey多重比較檢驗實驗處理均值間的差異顯著性。所有分析取P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚生長的影響

各投喂頻率長鰭籃子魚體質(zhì)量及體長隨養(yǎng)殖時間增加呈線性增長趨勢（圖1）。F3與F4組的體質(zhì)量與體長的增長曲線在整個實驗過程中大致重合。體質(zhì)量變異系數(shù)及體長變異系數(shù)4組魚在4周后總體上均呈下降趨勢（圖2）。增重率各組間在4周時差異顯著（P＜0.05），且隨投喂頻率增加增重率依次增加，而在4～16周各組間則無顯著差異（圖3）。

圖1 不同投喂頻率下長鰭籃子魚幼魚體質(zhì)量、體長變化情況Fig.1 Body weight and length dynamics of juvenile S.canaliculatus under different feeding frequencies

圖2 不同投喂頻率下長鰭籃子魚幼魚的體質(zhì)量及體長變異系數(shù)Fig.2 Variation coefficient of body weight and body length of juvenile S.canaliculatus under different feeding frequencies

圖3 不同投喂頻率下長鰭籃子魚幼魚的增重率變化Fig.3 Weight gain rate dynamics of juvenile S.canaliculatus under different feeding frequencies

由表2可知，投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚特定生長率影響顯著（P＜0.05），特定生長率隨投喂頻率增加而增加。F3組餌料系數(shù)和攝食率均為最高，且顯著高于F1組（P＜0.05）。長鰭籃子魚幼魚的存活率受投喂頻率的影響不顯著（P＞0.05）。

表2 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚生長指標(biāo)的影響Tab.2 Effect of feeding frequency on growth indices of juvenile S.canaliculatus

2.2 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚形態(tài)指標(biāo)的影響

由表3可知，F(xiàn)4組肝體比顯著高于F1組（P＜0.05）；F1組腸體比與腸長比顯著高于F4組（P＜0.05）。F3及F4組中長鰭籃子魚幼魚的肥滿度顯著高于F1、F2組（P＜0.05）。

表3 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚形態(tài)指標(biāo)的影響Tab.3 Effect of feeding frequency on morphological indices of juvenile S.canaliculatus

2.3 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚肌肉基本成分的影響

由表4可知，F(xiàn)1組的肌肉水分含量顯著高于其他3組（P＜0.05），但F1組肌肉粗蛋白含量顯著低于其余3組（P＜0.05）；F2、F3組肌肉粗灰分含量顯著高于F1、F4組（P＜0.05）。

表4 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚肌肉基本成分的影響（%，濕重）Tab.4 Effect of feeding frequency on muscle composition of juvenile S.canaliculatus（%，wet weight）

2.4 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，F(xiàn)2、F3組血清總蛋白含量顯著高于F1、F4組（P＜0.05）；而F1、F4組血清白蛋白含量顯著高于F2、F3組（P＜0.05）；甘油三酯的含量隨投喂頻率增加顯著增加（P＜0.05）；F4組高密度脂蛋白膽固醇含量最高，顯著高于F1、F2組（P＜0.05），而F4組低密度脂蛋白膽固醇含量則顯著低于其他3組（P＜0.05）；F3組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于其他3組（P＜0.05）。

表5 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚血清生化指標(biāo)的影響Tab.5 Effect of feeding frequency on serum biochemical indices of juvenile S.canaliculatus

3 討論

3.1 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚生長的影響

投喂頻率是影響魚體生長的重要因素。有研究表明，適當(dāng)增加投喂頻率可顯著提高魚類的特定生長率，但而后繼續(xù)增加投喂頻率，魚類的特定生長率卻趨于穩(wěn)定［10］。本研究中，各組魚特定生長率受投喂頻率影響顯著，表現(xiàn)為隨著投喂頻率的增加而顯著上升，這與對許氏平鲉（Sebastesschlegeli）［11］、大西洋鮭（Salmosalar）［12］及瓦氏黃顙魚（Pelteobagrusvachelli）［13］等的研究結(jié)果一致。同時，本研究中，1～3次·d－1投喂頻率組長鰭籃子魚幼魚的體質(zhì)量、體長變化受投喂頻率影響顯著，但當(dāng)投喂頻率從3次·d－1增加到4次·d－1時，魚體質(zhì)量與體長不再顯著變化，這與劉康和何金釗［14］對長吻鮠（Leiocassis longirostris）的研究結(jié)果相似；且由增重率的變化趨勢可知，前4周長鰭籃子魚幼魚受投喂頻率影響最為顯著。

魚類生長離散程度通常受養(yǎng)殖密度及攝食量的影響；管敏等［15］研究發(fā)現(xiàn)，飽食投喂頻率會顯著影響中華鱘（Acipensersinensis）的生長離散現(xiàn)象。本研究中，前4周時，2～4次·d－1投喂頻率組間長鰭籃子魚的體質(zhì)量、體長變異系數(shù)有顯著差異，而1次·d－1與2次·d－1組間無顯著差異，表明在0～4周魚體處于快速生長狀態(tài)時，飼料投喂量的限制導(dǎo)致魚群內(nèi)部大個體魚生長優(yōu)勢更為明顯，而增加飽食投喂頻率可使不同大小個體魚均能攝入充足能量，減少了魚體生長離散現(xiàn)象的發(fā)生。

魚類的生長與其攝食率及餌料系數(shù)息息相關(guān)，攝食率和餌料系數(shù)還能反映魚類對飼料的利用率［16］。投喂頻率對魚類生長的影響常通過3種方式來實現(xiàn)：1）僅提高魚類攝食率；2）僅提高魚類飼料轉(zhuǎn)化率（降低餌料系數(shù)）；3）兩者同時提高［17］。本研究中，攝食率與餌料系數(shù)都隨著投喂頻率的增加而增加，表明長鰭籃子魚幼魚主要通過攝食率的增加來促進生長，與南方鯰（Silurus meridionalis）［18］通過提高投喂頻率來增加魚體攝食率的結(jié)果類似。

3.2 投喂頻率對長鰭籃子魚幼魚生理生化的影響

投喂頻率的改變，在影響魚類生長的同時，也會對魚體的生化組成產(chǎn)生影響［19］。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中蛋白質(zhì)含量較高時，魚體脂肪含量相對穩(wěn)定，同時體內(nèi)蛋白質(zhì)含量隨飼料攝入量的增加而增加［20］。本研究中，各組間魚的肌肉粗脂肪含量無顯著差異，肌肉粗蛋白含量在2～4次·d－1組間無顯著差異，表明在本研究高蛋白飼料的飼喂下，2次·d－1的投喂頻率時飼料中的蛋白質(zhì)已能滿足長鰭籃子魚幼魚所需的營養(yǎng)［21］。

通常情況下，當(dāng)魚體攝入的能量大于自身所需的能量時，會將各種能源物質(zhì)轉(zhuǎn)化為脂肪儲存在體內(nèi)［22－23］。肝臟是進行脂類代謝的重要場所，當(dāng)血液中的游離脂肪酸含量較高時會直接將游離脂肪酸合成脂肪［24－25］，因此，血液生化指標(biāo)可以反映其營養(yǎng)代謝狀況，有助于研究機體的新陳代謝及生理狀況［26］。本研究中，甘油三酯含量隨著投喂頻率的增加而顯著增加，且4次·d－1組血清中高密度脂蛋白含量顯著增加，低密度脂蛋白含量顯著降低，表明在4次·d－1投喂頻率下，長鰭籃子魚攝入的營養(yǎng)物質(zhì)過多，肝臟內(nèi)脂肪開 始 大 量 累 積［27］，王 偉 等［28］在 對 花 鱸（Lateolabraxmaculatus）幼魚的研究中也得到了相同結(jié)果。

肝臟是血清蛋白與血脂的重要合成器官，血清蛋白濃度的變化可以反映機體肝臟的健康程度［29］。在本研究中，4次·d－1組的總蛋白及白蛋白的含量相對于3次·d－1組顯著下降，表明該投喂頻率下魚體肝臟存在一定損傷。肝臟細(xì)胞損傷會引起細(xì)胞通透性增強，從而釋放出大量轉(zhuǎn)氨酶進入血液，導(dǎo)致血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高［30］。在本研究中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在4次·d－1組中顯著增加，表明當(dāng)投喂頻率達(dá)到4次·d－1時，魚體的肝臟細(xì)胞因攝取過量的營養(yǎng)物質(zhì)而導(dǎo)致代謝異常和細(xì)胞損傷，從而使血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高，這與劉偉等［31］對吉富羅非魚（Oreochromisniloticus）幼魚的研究結(jié)果相似。血清中堿性磷酸酶通常由骨骼或者肝臟釋放，通過其活性也可以判斷魚類肝臟功能［32］。血清中堿性磷酸酶過高與機體營養(yǎng)不良等原因相關(guān)［33］，而在本研究中，1次·d－1組的堿性磷酸酶活性顯著高于其余3組，也可能與上述營養(yǎng)不良等原因有關(guān)。

綜合各項指標(biāo)，投喂頻率3～4次·d－1兩組表現(xiàn)出更佳的生長狀況及營養(yǎng)指標(biāo)，再結(jié)合血液生化指標(biāo)，可知4次·d－1組魚的肝臟健康處于劣勢。因此，建議科學(xué)投喂頻率為3次·d－1。