驢人工授精技術(shù)在規(guī)模化驢場的應(yīng)用效果研究

阿依努爾·亞森，帕熱哈提江·吾普爾，張國庭，范洪先，董 紅，王岳強(qiáng)，高雪峰，鄭新寶

（新疆畜牧科學(xué)院，烏魯木齊 830011）

驢全身都是寶，驢皮可熬制阿膠，驢肉是綠色健康食品，驢奶具有清肺功能，對多種疾病有輔助治療作用，驢肝、驢鞭、驢肺等也具有較高的營養(yǎng)價值[1]。驢產(chǎn)業(yè)在我國發(fā)展迅速，已由役用向藥、肉、乳、保健美容及生物制品等多產(chǎn)業(yè)方向發(fā)展，呈現(xiàn)良好勢頭[2]。

驢人工授精技術(shù)推廣緩慢，絕大多數(shù)地區(qū)仍以牽引交配或自然交配為主。據(jù)報道，國外驢精液的低溫保存時間最長可達(dá)48 h，輸精后的情期受胎率為50%～60%；冷凍精液解凍后的直線前進(jìn)運動率為30%～40%，受胎率為20%～40%[3]。從已發(fā)表的研究成果來看，驢精子和母驢對抗凍劑毒性和稀釋液中某些成分的敏感性可能較馬高[4]。另外，有關(guān)母驢發(fā)情和排卵規(guī)律的研究較少，這也是造成輸精后情期受胎率低的原因之一[5]。近幾年，隨著國內(nèi)驢產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，驢精液保存和人工授精技術(shù)也取得了顯著進(jìn)展。驢精液在4 ℃保存4 d后精子直線前進(jìn)運動率維持在60%以上，情期受胎率在50%左右；冷凍精液解凍后的精子直線前進(jìn)運動率為50%～60%，情期受胎率為30%～40%，完全可以在驢產(chǎn)業(yè)中推廣應(yīng)用[2]。

2019—2020 年，在南疆地區(qū)500 頭以上的規(guī)?；H場開展了驢人工授精技術(shù)應(yīng)用推廣，將誘導(dǎo)發(fā)情、B超卵泡監(jiān)測、定時排卵、細(xì)管精液人工授精技術(shù)進(jìn)行了集成應(yīng)用，充分利用了優(yōu)質(zhì)母驢的遺傳潛力和優(yōu)秀種公驢資源，縮短了世代間隔，實現(xiàn)了提高規(guī)?；H場經(jīng)濟(jì)效益的目的。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

在和田地區(qū)、喀什地區(qū)分別選擇2個規(guī)?；H場，存欄量分別為6 000頭、700頭。

選擇3歲以上的健康成年繁殖母驢，品種以德州驢、關(guān)中驢、新疆驢及其雜交驢為主。母驢日糧配方：玉米1.0～1.5 kg，麩皮0.5～1.0 kg，干苜蓿草1.0 kg，小麥秸3.0～4.0 kg。自由飲水。

根據(jù)體型外貌特征，挑選德州驢種公驢8 頭、和田青驢3 頭、新疆驢2 頭作為采精種公驢，年齡均為5～6 歲。配種期間種公驢日糧配方：玉米2.4 kg，燕麥2.4 kg，麩皮1.0 kg，預(yù)混料0.15 kg，干苜蓿草2.0 kg，小麥秸8.0 kg。采精期種公驢每天補飼豆粕1.0 kg，胡蘿卜2.0 kg，雞蛋2個（早、晚各1個）。自由飲水。

采精頻率為每頭種公驢每星期采精2～3 次，間隔1～2 d采精一次。

1.2 藥品和試劑

用于誘導(dǎo)發(fā)情和定時排卵的藥品有注射用前列腺素（PG）、人絨毛膜促性腺激素（hCG）等，均購自寧波三生藥業(yè)有限公司；一次性輸精外套、輸精器，均購自廣西蔣氏公司；驢鮮精保存稀釋液，自配，配方見表1。

表1 驢鮮精保存稀釋液推薦配方

1.3 試驗步驟

1.3.1 種公驢采精 將種公驢牽入保定欄，刷拭體表，用溫水清洗陰莖、包皮。選擇健壯、性情溫順、營養(yǎng)較好、體格大小與公驢相近的發(fā)情母驢做臺驢。保定母驢四肢，清洗后軀和外陰部。技術(shù)人員提前將集精杯、離心管、濾紙（布）、燒杯放置于37 ℃恒溫箱內(nèi)預(yù)熱。安裝好假陰道后，灌入40～43 ℃熱水，視采精公驢陰莖直徑調(diào)整內(nèi)胎壓力，在假陰道口端涂抹適量潤滑劑。

將種公驢牽至采精棚，用發(fā)情臺驢誘情，當(dāng)公驢勃起爬跨時，技術(shù)人員手持假陰道把柄處，站立于臺驢側(cè)后方，將假陰道平放于發(fā)情母驢尻側(cè)，并迅速將陰莖導(dǎo)入假陰道。公驢射精后，順勢使陰莖從假陰道中退出，將假陰道集精杯端緩慢下傾，精液采集完畢送入驗精室。

1.3.2 精液處理 挑除精液中的副性腺膠狀物，讀取精液體積，取樣并迅速置于37 ℃載玻片上，用顯微鏡對精子活力、密度等指標(biāo)進(jìn)行檢測。檢查后的精液過濾后，按1∶1 比例添加經(jīng)37 ℃預(yù)熱過的鮮精稀釋液，混勻后倒入離心管，置于離心機(jī)中，2 500g離心5 min。去除離心后的上清液，將剩余的濃縮精液再次稀釋，稀釋后濃度為有效精子數(shù)為（1～2）×109個/mL。將精液混勻，吸入0.5 mm細(xì)管，備用。

1.3.3 誘導(dǎo)發(fā)情處理 直腸檢查或B 超檢查驢卵巢，如果發(fā)現(xiàn)有黃體存在則肌肉注射PG 4～6 mL。準(zhǔn)確觀察發(fā)情，每日記錄并檢查卵泡。

1.3.4 定時排卵 每天利用B 超監(jiān)測發(fā)情驢卵泡，當(dāng)B 超監(jiān)測到卵泡直徑≥30 mm 時，注射hCG 2a000 單位。在注射hCG 后的24 h 后進(jìn)行第一次人工授精，在36～40 h進(jìn)行第二次人工授精。

1.3.5 人工授精 母驢發(fā)情后，技術(shù)人員通過直腸檢查或B 超檢查確定卵巢上發(fā)情卵泡發(fā)育情況，如果發(fā)情母驢符合輸精要求，用一次性輸精外套，將0.5 mm 細(xì)管精液輸入發(fā)情母驢卵泡側(cè)子宮角；間隔12 h 再次輸精，直至母驢排卵。18 d 后，利用B 超開展早期妊娠檢查，檢查出的空胎驢繼續(xù)進(jìn)行人工授精，懷孕驢在50～60 d 利用直腸檢查或B超檢查再次確定妊娠情況。

1.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

將種公驢采精、誘導(dǎo)發(fā)情、定時排卵、人工授精、妊娠檢查等相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總，采用SPSS 軟件中的卡方檢驗法進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種公驢精液指標(biāo)測定結(jié)果

見表2。

表2 不同品種種公驢精液指標(biāo)測定結(jié)果

由表2 可以看出，采精后原精活力均達(dá)到了0.7 以上，密度均在2 億個/mL 以上，德州驢的采精量極顯著高于和田青驢和新疆驢（P＜0.01）。

2.2 誘導(dǎo)發(fā)情、定時排卵結(jié)果

注射PG 后,73.91%（85/115）的驢在72 h 內(nèi)發(fā)情，16.52%（19/115）的驢在72 h后發(fā)情。

當(dāng)卵泡直徑達(dá)到≥30 mm時注射hCG 2 000 IU，77.6%的驢（1 032/1 330）在24～48 h 內(nèi)排卵；68.0%的驢（904/1 330）通過采用hCG 誘導(dǎo)可以將排卵時間控制在4 h（注射hCG 后36～40 h）內(nèi)；95%的驢（1 264/1 330）通過hCG 誘導(dǎo)可以將排卵時間控制在8 h（注射hCG后28～44 h）內(nèi)。

2.3 輸精技術(shù)對情期受胎率的影響

見表3。

表3 技術(shù)人員對細(xì)管人工授精受胎率的影響

由表3可以看出，不同熟練程度技術(shù)人員人工授精技術(shù)水平差異較大，情期受胎率、平均鮮精量等均有較大差異。

3 討論

本試驗在2 個500 頭以上規(guī)?；H場開展了驢細(xì)管精液人工授精技術(shù)應(yīng)用與推廣，細(xì)管精液人工授精母驢分別為3 260頭、476頭，情期受胎率平均達(dá)到38.12%、47.67%。

隨著冷凍精液和人工授精技術(shù)的廣泛推廣，每頭種公驢可承擔(dān)上千頭母驢的配種，因此種公驢是影響畜群遺傳品質(zhì)的最主要因素之一。而種公驢的精液品質(zhì)與繁殖力是影響其發(fā)揮遺傳潛能的重要因素[6]。在不同品種種公驢的精液品質(zhì)中，德州驢的精子活力和采精量等指標(biāo)均好于和田青驢、新疆驢。張瑞濤等[7]報道，德州驢單次射精量與體高呈正相關(guān)關(guān)系。本試驗結(jié)果與其結(jié)論基本一致，即體格高大健壯的種公驢采精量較大。

國外有研究表明，單獨使用PGF2α 類似物或類固醇類激素與GnRH類似物聯(lián)合處理，都能實現(xiàn)同期發(fā)情，但同期發(fā)情率會有差異[8]。而曾申明[2]研究發(fā)現(xiàn)，通過PGF2α和GnRH類似物聯(lián)合處理，在5 d 內(nèi)約80%左右母驢的優(yōu)勢卵泡直徑超過30amm，可以配種。本試驗中，用PG 處理后72 h內(nèi)母驢發(fā)情率達(dá)到73.91%。該方法相對簡單，便于基層技術(shù)人員掌握。

卵泡直徑是判斷發(fā)情母驢卵泡是否達(dá)到能夠?qū)Υ倥怕鸭に刈龀鰬?yīng)答的依據(jù)。近幾年，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)在驢定時排卵技術(shù)方面取得較大進(jìn)展，母驢優(yōu)勢卵泡直徑達(dá)到30 mm 以上時肌肉注射GnRH 類似物1 mL，85.3%的母驢（295/346）可在注射藥物后的36～44 h 內(nèi)排卵，95.4% (330/346)可在48 h 內(nèi)排卵[2]。本試驗利用B 超監(jiān)測發(fā)情母驢卵泡，卵泡直徑達(dá)到≥30 mm時注射hCG 2 000 IU也取得了較好的促排卵效果。由于B超監(jiān)測是促排卵技術(shù)的重要技術(shù)手段，卵泡直徑的判斷標(biāo)準(zhǔn)就成為促排卵效果好壞的關(guān)鍵。

輸精技術(shù)人員水平對驢細(xì)管精液人工授精受胎率的影響較為明顯。驢細(xì)管精液人工授精對輸精時間要求嚴(yán)格，準(zhǔn)確的發(fā)情觀察或試情顯得尤為重要。而在規(guī)模化驢場無法借助發(fā)情監(jiān)測系統(tǒng)的情況下，技術(shù)人員在發(fā)情觀察或試情過程中的責(zé)任心將決定是否可以準(zhǔn)確判斷母驢發(fā)情開始時間。由于母驢排卵延遲較為常見，在判斷排卵時間上，不同的輸精技術(shù)人員對B 超監(jiān)測的卵泡直徑大小有不同的判別水平，因此經(jīng)常會出現(xiàn)多次輸精但仍未排卵或輸精時間超過排卵時間前后6 h 以上，從而對受胎率有較大影響。此外，營養(yǎng)和飼養(yǎng)管理水平對驢繁殖性能影響也較大，特別是精料水平對驢的排卵過程有較大影響。

4 結(jié)論

細(xì)管精液人工授精技術(shù)對迅速擴(kuò)大良種驢群體、縮短世代間隔、加速品種改良步伐作用巨大。借助B 超卵泡監(jiān)測技術(shù)、定時排卵輸精技術(shù)可以有效提高驢細(xì)管精液人工授精技術(shù)水平。