孤雌產(chǎn)雌生殖品系松毛蟲赤眼蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)Wolbachia誘導(dǎo)的其生殖表型的影響

霍梁霄, 李媛媛, 張 丹, 于 茜, 寧素芳,趙 旭, 周金成,*, 董 輝,*

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 沈陽(yáng) 110866; 2.遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心, 沈陽(yáng) 110034)

沃爾巴克氏體Wolbachia是一類廣泛存在于節(jié)肢動(dòng)物中并能夠隨母系遺傳的胞內(nèi)共生菌(Werrenetal., 2008; Gerthetal., 2014)，可調(diào)控宿主的生殖表型，如細(xì)胞質(zhì)不親和(cytoplasmic incompatibility, CI)、雌性化(feminization)、殺雄(male-killing, MK)、孤雌產(chǎn)雌生殖(parthenogenesis, PI)等(Werrenetal., 2008)。此外，Wolbachia還參與到宿主卵子的形成過(guò)程(Kremeretal., 2009)，增強(qiáng)宿主的免疫反應(yīng)(Chrosteketal., 2013)，阻斷病原物感染宿主，以及為宿主提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(Moriyamaetal., 2015)。開展Wolbachia對(duì)宿主生殖及其他表型的調(diào)控研究和揭示共生菌與宿主間的互作關(guān)系具有重要意義，相關(guān)理論和方法對(duì)控制害蟲種群和各類蟲媒傳播疾病也具有重要的應(yīng)用價(jià)值(Hoffmannetal., 2015; 張艷凱等, 2015; Lopezmadrigal and Duarte, 2019)。

Wolbachia誘導(dǎo)宿主的生殖表型受Wolbachia滴度影響(Zchorifeinetal., 2000; Stouthamer and Mak, 2002; Uncklessetal., 2009; Osbomeetal., 2012; Bai?oetal., 2019)。例如，在寄生蜂中，當(dāng)卵內(nèi)的Wolbachia滴度足夠高時(shí)才發(fā)生孤雌產(chǎn)雌生殖的兩步機(jī)制(未受精卵先二倍化后雌性化的過(guò)程)(Maetal., 2015)。然而，宿主生殖表型與Wolbachia滴度之間的分子機(jī)制目前還不明確。

據(jù)報(bào)道，Wolbachia誘導(dǎo)多種膜翅目蜂類發(fā)生孤雌產(chǎn)雌生殖(張海燕, 2009; Ma and Schwander, 2017)。研究發(fā)現(xiàn)，前人通過(guò)抗生素或高溫去除或降低孤雌產(chǎn)雌生殖宿主體內(nèi)的Wolbachia滴度，導(dǎo)致子代雄性個(gè)體或間性個(gè)體增多(Stouthamer and Mak, 2002; De Almeidaetal., 2010; Ningetal., 2019; 霍梁霄等, 2020)。這類研究發(fā)現(xiàn)Wolbachia滴度隨溫度(25～31℃)的升高或抗生素濃度的增加而降低(童蕾蕾等, 2012; 陳茜等, 2016; 寧素芳, 2017; Wangetal., 2017; Zhouetal., 2019)。這表明Wolbachia感染存在一個(gè)“閾值”對(duì)于調(diào)控宿主的生殖表型具有重要作用(Hurstetal., 2000; Bordenstein and Bordenstein, 2011)，且Wolbachia滴度與誘導(dǎo)宿主的表型呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(Breeuwer and Werren, 1993; Bourtzisetal., 1996; Ikedaetal., 2003)。本研究前期發(fā)現(xiàn)，無(wú)高溫和抗生素處理?xiàng)l件下，感染W(wǎng)olbachia且營(yíng)孤雌產(chǎn)雌生殖的松毛蟲赤眼蜂Trichogrammadendrolimi后代也會(huì)出現(xiàn)雄蜂個(gè)體。我們推測(cè)雌蜂高頻率的產(chǎn)卵將影響Wolbachia向子代的垂直傳播效率及滴度。開展該方面的研究不僅對(duì)Wolbachia與宿主之間的相互作用具有理論意義，也對(duì)應(yīng)用孤雌產(chǎn)雌品系赤眼蜂，保障其生殖表型穩(wěn)定性及生防潛力具有實(shí)踐意義。

松毛蟲赤眼蜂是一種寄生多種鱗翅目昆蟲的卵期寄生性天敵，對(duì)松毛蟲Deudrolimuspunctatus、亞洲玉米螟Ostriniafurnacalis和二化螟Chilosuppressalis等多種農(nóng)林業(yè)重要的害蟲具有良好的生物防治效果(Wangetal., 2014; Lietal., 2016; 姜雪冰等, 2020)。與兩性生殖赤眼蜂相比，由于子代幾乎全為雌性，孤雌產(chǎn)雌生殖的赤眼蜂具有增殖能力強(qiáng)、易于定殖、生產(chǎn)成本低等優(yōu)勢(shì)，因而具有較高的控害潛能(Stouthamer, 1993; Dongetal., 2017)。先前研究表明限制寄主卵量或控制雌蜂寄生時(shí)間導(dǎo)致子代雄性比降低(Hohmannetal., 2001; Lindsey and Stouthamer, 2017)。本研究以孤雌產(chǎn)雌生殖的松毛蟲赤眼蜂為研究對(duì)象，明確雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)Wolbachia滴度及子代性比的影響。研究結(jié)果將為孤雌產(chǎn)雌松毛蟲赤眼蜂的工廠化繁育提供理論依據(jù)，并為揭示宿主不同產(chǎn)卵強(qiáng)度下Wolbachia-宿主赤眼蜂的相互作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

供試松毛蟲赤眼蜂來(lái)自于沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)害蟲生防實(shí)驗(yàn)室繁育的松毛蟲赤眼蜂孤雌產(chǎn)雌品系。供試松毛蟲赤眼蜂均以米蛾Corcyracephalonica卵為寄主，保種繁育30代以上，遺傳性狀穩(wěn)定。繁育環(huán)境條件：溫度25±1℃，相對(duì)濕度70%±5%，光周期16L∶8D。

寄主米蛾在養(yǎng)蟲室內(nèi)用麥麩繁育多代，繁育環(huán)境條件：25±1℃, 相對(duì)濕度70%±5%, 光周期16L∶8D。試驗(yàn)前取新鮮的米蛾卵(<24 h)粘在涂有阿拉伯樹膠的白色紙卡上，制成米蛾卵卡。米蛾卵卡用紫外燈照射處理40 min，殺死胚胎，供松毛蟲赤眼蜂寄生。

1.2 松毛蟲赤眼蜂的處理

為避免羽化后的赤眼蜂子代之間交配，預(yù)先將米蛾卵卡上的單個(gè)寄主黑卵粒(寄生4～5日后變黑的米蛾卵)切下后轉(zhuǎn)移至10 mm×45 mm指型管。隨機(jī)選取剛羽化(<12 h)的雌蜂作為供試蜂，每管1頭蜂。每頭雌蜂按下列分組分別進(jìn)行處理:處理1：每日只有1 h提供新鮮充足的米蛾卵卡，供雌蜂寄生，持續(xù)7 d；處理2：隔日全天24 h提供新鮮充足的米蛾卵卡，供雌蜂寄生，持續(xù)7 d；處理3：每日持續(xù)提供新鮮充足的米蛾卵卡，供雌蜂連續(xù)寄生，持續(xù)7 d；對(duì)照組：每日只提供10%蜂蜜水不提供卵卡，持續(xù)7 d，該組雌蜂僅用于測(cè)定體內(nèi)共生菌滴度。每處理和對(duì)照組45頭雌蜂，即重復(fù)45次。每天在同一時(shí)間段(9:00-10:00)對(duì)處理1的雌蜂提供充足新鮮米蛾卵卡。米蛾卵卡在處理?xiàng)l件下的雌蜂寄生完成之后，被分離到單個(gè)管中，避免再次被寄生。各處理和對(duì)照組的雌蜂每天均提供10%蜂蜜水。第8天，各處理雌蜂以液氮冷凍殺死后，以無(wú)水乙醇在-20℃下保存于1.5 mL離心管備用。統(tǒng)計(jì)母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量(寄主米蛾卵變黑記為寄生)，一周內(nèi)的累積產(chǎn)卵量。根據(jù)赤眼蜂的觸角形態(tài)和外生殖器鑒定雌性個(gè)體，雄性個(gè)體及雌雄間性個(gè)體(指?jìng)€(gè)體組織擁有相同遺傳基因，但組織呈現(xiàn)出雄性和雌性的中間特征)(Ningetal., 2019)。待所有被寄生的米蛾卵內(nèi)的子代蜂羽化后，在體視解剖顯微鏡(Motic, SMZ-161)下觀察并記錄子代性別及個(gè)數(shù)，統(tǒng)計(jì)逐日子代雄性比和一周內(nèi)的累積子代雄性比。

1.3 雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度分析

采用Chelex-100法對(duì)待測(cè)的松毛蟲赤眼蜂進(jìn)行單頭總DNA的提取(Sumeretal., 2009; 柳曉利等, 2011)。以共生菌Wolbachia的wsp基因(GenBank登錄號(hào): MG914000)拷貝數(shù)對(duì)雌蜂體內(nèi)Wolbachia感染滴度進(jìn)行定量分析。利用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)wsp基因特異性引物(上游引物: 5′-ATGAT GTAGCCCCAGAAATAC-3′; 下游引物: 5′-ACCAA AAGTGTTGTAAAGAA-3′)。以2 μL DNA樣品為初始模板,加入2×Es Taq Matermix(康維世紀(jì), 北京)25 μL,上下游引物(10 μmol/L)各1 μL, ddH2O 21 μL共50 μL作為PCR擴(kuò)增體系。PCR反應(yīng)程序: 94℃預(yù)變性3 min; 然后以94℃ 變性30 s, 57℃退火3 min, 72℃延伸30 s為基礎(chǔ)，循環(huán)40次;最后以72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，將預(yù)期目的條帶回收純化后，送生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序驗(yàn)證。

采用SYBR Green熒光染料法，利用Bio-Rad CFX96TM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Bio-Rad, 美國(guó))進(jìn)行絕對(duì)定量(absolute quantitative PCR, AQ-PCR)檢測(cè)。通過(guò)qPCR檢測(cè)梯度稀釋后目標(biāo)序列引物CT值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線用于目標(biāo)序列的絕對(duì)定量。以未產(chǎn)卵的雌蜂為對(duì)照，選擇了最具有代表性的不同產(chǎn)卵強(qiáng)度處理組(處理1和處理3)，每組設(shè)6個(gè)生物學(xué)重復(fù)，通過(guò)檢測(cè)wsp基因拷貝數(shù)確定雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度，每重復(fù)測(cè)量3次，作為技術(shù)重復(fù)。

AQ-PCR的擴(kuò)增體系(20 μL): 2×GoTaq qPCR Master Mix(Promega, 美國(guó))10 μL,正向和反向引物(10 μmol/L)各0.5 μL,DNA模板(40 ng)1 μL,ddH2O 8 μL。qPCR擴(kuò)增條件: 95℃預(yù)變性5 min; 5℃變性15 s, 55℃退火延伸45 s, 共40個(gè)循環(huán)。并在最后添加溶解曲線程序: 55℃ 5 s, 每5 s升溫0.5℃, 直至95℃。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用廣義混合效應(yīng)模型(generalized linear mixed-effects model, GLMM)下的協(xié)方差分析，檢驗(yàn)不同產(chǎn)卵強(qiáng)度處理下雌蜂日齡對(duì)逐日子代雄性比[二項(xiàng)分布(binomial distribution)]和母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量[泊松分布(Poisson distribution)]的影響。采用GLMM下的卡方測(cè)驗(yàn)分別檢驗(yàn)產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)累積子代雄性比(二項(xiàng)分布)、母代雌蜂累積產(chǎn)卵量(泊松分布)以及母代雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度的影響。為了排除不同雌蜂個(gè)體及批次導(dǎo)致的系統(tǒng)誤差，在GLMM中，將不同雌蜂個(gè)體及批次設(shè)為隨機(jī)效應(yīng)。采用Breusch-Pagan檢驗(yàn)對(duì)模型的正態(tài)性和方差一致性假定進(jìn)行檢驗(yàn)，其中，對(duì)不符合假定的比例指標(biāo)和整數(shù)指標(biāo)，分別采用對(duì)數(shù)連接函數(shù)和logit連接函數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析。不同處理因素間的多重比較采用Tukey氏HSD法檢驗(yàn)(α=0.05)。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用R(3.6.2)軟件(R Developmental Core Team, 2019)分析。

2 結(jié)果

2.1 逐日子代雄性比和累積子代雄性比

雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度(χ2=24.21,P<0.05)和日齡(χ2=110.30,P<0.05)均對(duì)松毛蟲赤眼蜂逐日子代雄性比存在顯著影響，但二者互作對(duì)逐日子代雄性比無(wú)顯著影響(χ2=2.01,P=0.37)。逐日子代雄性比隨赤眼蜂日齡的增加顯著升高(斜率±標(biāo)準(zhǔn)誤: 1.51±0.14,P<0.05)。持續(xù)供寄主卵的雌蜂(處理3)逐日子代雄性比顯著高于隔日24 h供寄主卵的雌蜂(處理2)(z=2.93,P<0.05)和每日僅1 h供寄主卵的雌蜂(處理1)(z=4.75,P<0.05)，而處理2逐日子代雄性比與處理1相比無(wú)顯著差異(z=-2.208,P=0.07)(圖1)。

圖1 產(chǎn)卵強(qiáng)度和日齡對(duì)松毛蟲赤眼蜂逐日子代雄性比的影響

雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂累積子代雄性比存在顯著影響(χ2=10.11,P<0.05)。處理3累積子代雄性比顯著高于處理1(z=2.85,P<0.05)；處理2累積子代雄性比與處理3間相比無(wú)顯著差異(z=2.05,P=0.10)，與處理1之間也無(wú)顯著差異(z=-0.85,P=0.675)(圖2)。

圖2 產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂累積子代雄性比的影響

2.2 母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量和累積產(chǎn)卵量

松毛蟲赤眼蜂母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量受雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度和日齡二者的交互作用顯著影響(χ2=202.43,P<0.05)。母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量隨赤眼蜂日齡的增加均顯著降低(斜率±標(biāo)準(zhǔn)誤:-0.68±0.016,P<0.05)。處理3母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量的下降幅度顯著高于處理2(z=7.22,P<0.05)和處理1(z=15.18,P<0.05)。處理2母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量下降幅度顯著高于處理1(z=9.64,P<0.05)(圖3)。

圖3 產(chǎn)卵強(qiáng)度和日齡對(duì)松毛蟲赤眼蜂逐日產(chǎn)卵量的影響

雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂母代雌蜂累積產(chǎn)卵量存在顯著影響(χ2=41.22,P<0.05)。處理3母代雌蜂累積產(chǎn)卵量顯著高于處理1(z=4.34,P<0.05)和處理2(z=6.22,P<0.05)，處理1母代雌蜂累積產(chǎn)卵量與處理2間無(wú)顯著差異(z=1.88,P=0.15)(圖4)。

圖4 產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂累積產(chǎn)卵量的影響

2.3 母代雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度

根據(jù)子代雄性比結(jié)果，處理2與處理3和處理1相比均無(wú)顯著差異，且獲取處理2雌蜂樣本時(shí)間無(wú)法確定。因此，我們選擇了最具有代表性兩組處理，分別為處理3和處理1，并以未產(chǎn)卵的雌蜂為對(duì)照組，利用qPCR檢測(cè)雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度變化。

雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂母代雌蜂體內(nèi)的Wolbachia滴度存在顯著影響(χ2=75.12,P<0.05)。未產(chǎn)卵雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度顯著高于處理1(z=8.24,P<0.05)，而與處理3相比無(wú)顯著差異(z=1.34,P=0.37)(圖5)。

圖5 產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)松毛蟲赤眼蜂體內(nèi)Wolbachia滴度的影響

3 討論

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，每日僅1 h供寄主卵處理能夠維持母代雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度不變，使其維持孤雌產(chǎn)雌生殖表型。Lindsey和Stouthamer(2017)在研究短管赤眼蜂T.pretiosum時(shí)，也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。有學(xué)者推測(cè)，宿主體細(xì)胞中的Wolbachia可持續(xù)轉(zhuǎn)移至卵細(xì)胞中，以維持卵細(xì)胞內(nèi)較高水平的Wolbachia滴度(Ferreeetal., 2005; Serbusetal., 2008)。當(dāng)母代雌蜂連續(xù)產(chǎn)卵時(shí)，卵細(xì)胞對(duì)體細(xì)胞內(nèi)Wolbachia持續(xù)“提取”，最終導(dǎo)致赤眼蜂體內(nèi)Wolbachia“枯竭”。因此當(dāng)赤眼蜂體內(nèi)Wolbachia滴度下降時(shí)，雌蜂在產(chǎn)卵后期會(huì)產(chǎn)出Wolbachia滴度較低的卵。一般而言，赤眼蜂的性別由其染色體倍性決定，即雙倍體受精卵發(fā)育為雌蜂，單倍體未受精卵發(fā)育為雄蜂(潘雪紅等, 2007; Ma and Schwander, 2017)。在赤眼蜂中，Wolbachia可誘導(dǎo)單倍體未受精卵第一次有絲分裂后期染色體分離失敗，導(dǎo)致染色體加倍形成二倍體胚胎，進(jìn)而發(fā)育為雌性(Stouthamer and Kazmer, 1994)。當(dāng)Wolbachia滴度降低時(shí)，其對(duì)宿主生殖表型的調(diào)控能力下降，使部分宿主恢復(fù)兩性生殖。另一方面，共生菌Wolbachia滴度受宿主細(xì)胞增殖的影響(張曉晨和馮紀(jì)年, 2018)。在持續(xù)供寄主卵處理中，Wolbachia的恢復(fù)速度可能落后于生殖干細(xì)胞的更新速度，導(dǎo)致母代雌蜂產(chǎn)下的卵內(nèi)Wolbachia滴度不足以調(diào)控宿主未受精卵染色體加倍，使其依然維持單倍體，并最終發(fā)育為雄性。因此，通過(guò)控制雌蜂產(chǎn)卵的間隔時(shí)間，使卵細(xì)胞內(nèi)保持較高水平的Wolbachia滴度，可使雌蜂有效維持孤雌產(chǎn)雌生殖表型。

本研究發(fā)現(xiàn)，松毛蟲赤眼蜂母代雌蜂逐日產(chǎn)卵量受產(chǎn)卵強(qiáng)度和日齡互作的影響。持續(xù)供寄主卵的母代雌蜂只有在第1日的日產(chǎn)卵量顯著高于每日僅1 h供寄主卵的母代雌蜂，而在隨后6 d，兩者的日產(chǎn)卵量無(wú)顯著差異。由于赤眼蜂卵巢內(nèi)部分卵需通過(guò)雌蜂攝取外界補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)來(lái)保障卵子發(fā)育成熟(黃靜等, 2015)。母代雌蜂在第1日產(chǎn)出大量的卵，而后期卵子尚未成熟，使雌蜂后期的日產(chǎn)卵量下降。研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，持續(xù)供寄主卵的母代雌蜂累積產(chǎn)卵量高于隔日24 h供寄主卵的雌蜂(圖3)。該結(jié)果與前人研究(Stouthamer and Luck, 1993; Hohmannetal., 2001)不同。這可能是由不同的蜂卵接觸時(shí)間造成的，持續(xù)供寄主卵處理使母代雌蜂寄生時(shí)間充分，因而具有較高的累積產(chǎn)卵量?；诒狙芯拷Y(jié)果，在赤眼蜂規(guī)?；庇^(guò)程中應(yīng)適當(dāng)權(quán)衡產(chǎn)雌率與繁蜂效率間的矛盾，在保障繁蜂數(shù)量的同時(shí)，適當(dāng)降低雌蜂產(chǎn)卵強(qiáng)度，將有助于提高子代雌性比，降低繁蜂成本，提高繁蜂效率。在孤雌產(chǎn)雌品系赤眼蜂規(guī)?；庇h(huán)節(jié)上，可考慮進(jìn)一步開展相關(guān)研究，通過(guò)平衡繁蜂數(shù)量和雌性比兩者間的矛盾，改善規(guī)模化繁蜂過(guò)程中的相關(guān)環(huán)節(jié)。

前人證明，孤雌產(chǎn)雌赤眼蜂種群與兩性生殖赤眼蜂種群在野外同時(shí)存在，且兩者間存在基因交流，即感染W(wǎng)olbachia的雌蜂能夠與雄蜂交配育出雜交的可育子代蜂(Stouthamer and Kazmer, 1994)。在本研究中，感染W(wǎng)olbachia的母代雌蜂產(chǎn)卵后期子代雄性比顯著升高(圖2)。雄蜂的出現(xiàn)將使孤雌產(chǎn)雌種群與兩性種群存在基因流動(dòng)的可能。在田間，寄主卵資源通常具有波動(dòng)性(Kunte, 1997; Royetal., 2001; van den Bosch, 2003)?；诒狙芯康慕Y(jié)果，我們提出猜想，即當(dāng)寄主資源豐富時(shí)，雌蜂更容易找到寄主，產(chǎn)卵強(qiáng)度增加，導(dǎo)致孤雌產(chǎn)雌生殖的雌蜂在產(chǎn)卵后期產(chǎn)出少量雄性子代，可能將使孤雌產(chǎn)雌種群與兩性種群間基因交流的頻率上升，而寄主資源有限時(shí)，雌蜂可能花費(fèi)更長(zhǎng)時(shí)間尋找新的寄主，產(chǎn)卵間隔時(shí)間延長(zhǎng)，產(chǎn)卵強(qiáng)度降低，將更有利于其維持孤雌產(chǎn)雌生殖表型。然而，關(guān)于田間孤雌產(chǎn)雌種群與兩性種群間的基因交流頻率及其潛在影響因素尚需田間調(diào)查數(shù)據(jù)的支撐。

本研究結(jié)果及前人研究均發(fā)現(xiàn)成蜂體內(nèi)Wolbachia滴度對(duì)于維持其孤雌產(chǎn)雌生殖表型至關(guān)重要(Maetal., 2015; Lopezmadrigal and Duarte, 2019)。持續(xù)產(chǎn)卵將導(dǎo)致母代雌蜂體內(nèi)Wolbachia滴度降低，使得Wolbachia調(diào)控染色體二倍化過(guò)程難以維持，導(dǎo)致孤雌產(chǎn)雌生殖表型部分喪失，最終育出一定數(shù)量的雄性子代。當(dāng)規(guī)?；庇麓飘a(chǎn)雌生殖的松毛蟲赤眼蜂時(shí)，通過(guò)適當(dāng)減少雌蜂產(chǎn)卵頻率和時(shí)間，可有助于維持雌蜂體內(nèi)的Wolbachia滴度水平，提高雌蜂孤雌產(chǎn)雌生殖的穩(wěn)定性，增加種群雌性比。另一方面，本研究通過(guò)室內(nèi)測(cè)定產(chǎn)卵強(qiáng)度對(duì)雌蜂孤雌產(chǎn)雌表型的影響，將有助于揭示孤雌產(chǎn)雌生殖雌蜂產(chǎn)卵行為影響下的子代性別結(jié)構(gòu)變化，為預(yù)測(cè)孤雌產(chǎn)雌赤眼蜂在田間的種群性別結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化，揭示孤雌產(chǎn)雌種群和兩性生殖種群間的共存及互作關(guān)系提供依據(jù)，為評(píng)估和改善孤雌產(chǎn)雌品系赤眼蜂的室內(nèi)繁育技術(shù)和田間持續(xù)控害能力提供參考。