丙型肝炎臨床檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)狀及研究進(jìn)展

諶敦建

摘要：丙型肝炎（Hepatitis C）是一種傳染病，病因指感染丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV），以血液傳播為主，HCV是RNA病毒，具有高度異質(zhì)性特點(diǎn)，感染初期多具有隱匿性，在全世界范圍內(nèi)HCV感染率均較高，嚴(yán)重威脅人類生命安全，隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，臨床在診治丙型肝炎疾病中也越來越重視實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)。文章就Hepatitis C臨床檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)狀及研究進(jìn)展做一綜述報(bào)道如下：

關(guān)鍵詞：丙型肝炎;檢驗(yàn);感染;傳播;傳染病

【中圖分類號】R512.6+3 ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）06-366-01

丙型肝炎（以下簡稱丙肝，Hepatitis C）疾病特點(diǎn)以肝臟損害為主，具有多種傳播途徑，如血液、母嬰、家庭內(nèi)接觸等，但仍然存在部分病例無法明確傳播途徑的情況，由此可見Hepatitis C的傳播途徑具有隱匿性與綜合性特點(diǎn)[1-2]。臨床認(rèn)為Hepatitis C患者中70%可能發(fā)展為慢性Hepatitis C，20%患者可能隨著病情進(jìn)展最終出現(xiàn)慢性肝病、肝硬化、肝細(xì)胞癌等。目前臨床尚未研發(fā)出治療Hepatitis C的有效疫苗，因此積極尋求檢驗(yàn)HCV途徑，積極防治Hepatitis C疾病，做到早期治療，可在一定程度上避免Hepatitis C發(fā)病，保護(hù)全人類健康[3-4]。

1.Hepatitis C臨床檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)狀

1.1在目前臨床抗-HCV檢驗(yàn)技術(shù)中，按照時間、抗原類型可分為3代，第一代指通過病毒基因組非結(jié)構(gòu)區(qū)進(jìn)而獲取抗原，應(yīng)用IgG試劑盒檢測，臨床應(yīng)用第一代檢驗(yàn)技術(shù)可明顯降低HCV輸血感染率;但同時發(fā)現(xiàn)在檢驗(yàn)中檢出抗體需要花費(fèi)較長時間、且具有較高的假陽性率，同時檢測靈敏度相對較低[5]。第二代試劑中囊括C100抗原與HCV核心區(qū)多肽C22-3，檢驗(yàn)技術(shù)優(yōu)勢包括較高的特異性與敏感性，一般可在HCV感染8-12周左右即可檢測發(fā)現(xiàn);第三代HCV抗體為ELISA試劑，其中重組NSS多肽成分可降低核心區(qū)抗原比例，并將非結(jié)構(gòu)區(qū)NSS區(qū)C33C抗原占比數(shù)據(jù)，進(jìn)而明顯提高檢測敏感性與特異性[6-7]。

抗-HCV檢驗(yàn)技術(shù)分析：該技術(shù)是臨床最早應(yīng)用、且應(yīng)用時間最長的檢驗(yàn)方法，因HC V感染后機(jī)體外周血中HCV含量與病毒抗原含量均較低，一般情況下直接檢測疾病難度高，臨床經(jīng)過不斷研究、嘗試改良后最終發(fā)現(xiàn)抗-HCV檢測方法有效，同時也逐漸演變出酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA ）、重組免疫印跡法等可靠的檢驗(yàn)方法[8]。臨床提出重組免疫印跡法特點(diǎn)包括靈敏度極高，臨床逐漸將其作為檢驗(yàn)抗體的最佳標(biāo)準(zhǔn)，而正確使用蛋白芯片可更準(zhǔn)確的表現(xiàn)抗-HCV分型;臨床認(rèn)為ELISA檢測優(yōu)勢包括操作步驟簡單、檢測成本低下等，該方式已經(jīng)成為臨床應(yīng)用最廣泛的檢測技術(shù)之一[9-10]。

1.2 HCV抗原檢測技術(shù)：當(dāng)前臨床檢驗(yàn)技術(shù)不斷發(fā)展進(jìn)步，也在不斷革新HCV抗原檢測技術(shù)，以西方國家為例也在不斷嘗試研發(fā)定量、定性法相關(guān)的雙抗體夾心法檢測血清標(biāo)本中的游離HCV，與其他RT-PCR技術(shù)比較發(fā)現(xiàn)[11]，新技術(shù)的出現(xiàn)簡化實(shí)際檢驗(yàn)操作步驟，提高環(huán)境適應(yīng)性，縮短檢驗(yàn)時間，有效降低假陽性情況，也就意味著新的檢驗(yàn)技術(shù)較大程度上克服了原有技術(shù)的弊端，因HCV核心抗原僅可在機(jī)體內(nèi)存在27-70d，進(jìn)而測定HCV核心抗原是無法脫離抗-HCV檢測結(jié)果而單獨(dú)開展的[12]。

1.3 HCV-RNA 核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)（NAT）：臨床認(rèn)為感染途徑確認(rèn)的主要工具即為NAT檢測技術(shù)，隨著機(jī)體不同飲食狀態(tài)，機(jī)體HCV-RNA水平也隨之變化，如患者攝入高脂肪、高蛋白飲食，則檢查結(jié)果提示明顯上升，進(jìn)而出現(xiàn)不一致的檢測結(jié)果;此外NAT檢測技術(shù)操作難度較高，對設(shè)備要求高，檢測花費(fèi)時間長、步驟繁瑣，臨床可行性相對較差，此外檢查結(jié)果可能因意外情況影響準(zhǔn)確度，無法在全國范圍普及。

1.4同時檢測抗-HCV與HCV核心抗原技術(shù)：聯(lián)合檢驗(yàn)抗原抗體技術(shù)是臨床專家經(jīng)過漫長時間反復(fù)實(shí)踐獲得，該技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)HCV篩查試劑盒、血清學(xué)聯(lián)合檢測新技術(shù)，目前主要成果便是HCV核心抗原結(jié)合外周蛋白抗體與部分核心抗體的檢測試劑盒，此外感染體內(nèi)最早會出現(xiàn)的感染指標(biāo)即為HCV核心抗原，幾乎可與HCV RNA同一時間出現(xiàn)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)HCV-RNA的動力學(xué)變化與核心抗原關(guān)聯(lián)密切。在未來臨床上也會實(shí)施越來越多的聯(lián)合檢測方法，通過2步檢測篩查、診治疾病，可實(shí)現(xiàn)縮短檢驗(yàn)時間。

1.5 電化學(xué)發(fā)光法 （ECL）采用全自動免疫分析儀（美國雅培C16000）檢測，試劑均由雅培貿(mào)易有限公司提供;檢測方法：采集5ml外周靜脈血標(biāo)本，將血液樣本放入離心機(jī)中以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理10分鐘，取上層血清作為檢測樣本，采取ECL檢測，按照規(guī)定的操作步驟檢測樣本。臨床提出ECL判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性反應(yīng)：標(biāo)本A值≥Cut-Off（臨界值）、陰性：標(biāo)本A值

2.小結(jié)

臨床有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，全球HCV感染人數(shù)高達(dá)1.85億，感染率約占全世界人口的3%，此外Hepatitis C疾病仍然以每年300-400萬例左右的例數(shù)不斷上升，在我國HCV患病率約為3.2%，在全世界范圍均處于靠前水平。我國HCV發(fā)病率高，感染的重要途徑包括輸血、經(jīng)血制品傳播等，HCV隱匿性強(qiáng)，大部分患者感染病毒后初期無明顯癥狀，疾病早期難以被發(fā)現(xiàn)，因此大部分患者在確診時多錯失最佳治療時機(jī)，一般情況下Hepatitis C患者5年內(nèi)治愈率較高，5-10年治愈率相對低下。就檢測方法而言，抗-HCV檢驗(yàn)、ELISA、NAT等檢測方法在臨床應(yīng)用各有優(yōu)勢，同時也各有局限性，隨著臨床不斷發(fā)展新的醫(yī)學(xué)技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)，HCV檢測技術(shù)也不斷發(fā)展進(jìn)步，但無論是哪一種檢測方法均需要滿足高靈敏度、快速獲得檢測結(jié)果、早期診斷等原則，HCV抗體檢測在臨床獲得廣泛應(yīng)用，且檢測靈敏度也越來越高，不斷縮短HCV感染窗口期，目前臨床仍未應(yīng)用HCV抗原直接檢測方法，而HCV RNA檢測技術(shù)已經(jīng)發(fā)展成熟，但因條件限制無法在基層醫(yī)院普及應(yīng)用，因此臨床可選擇聯(lián)合檢測儀降低假陰性率，達(dá)到早期診治初期HCV感染的目標(biāo)。

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