腹瀉型腸易激綜合征患者腸黏膜PRDX1、FXR的表達(dá)及其相關(guān)性分析*

楊保偉，林力森，周海娟，王文婷

（1.?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院肛腸科，海南海口570216；2.海南省農(nóng)墾總醫(yī)院，海南?？?70100）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome,IBS）是常見(jiàn)的功能性胃腸疾病，其發(fā)病率不斷升高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，臨床表現(xiàn)為腹痛或腹部不適，伴糞便性狀或排便習(xí)慣改變，臨床可分為腹瀉型、便秘型、混合性、未分型4 種類型[1]，其中腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D）是最常見(jiàn)類型，近年來(lái)臨床研究廣泛。目前IBS 主要通過(guò)排除器質(zhì)性疾病后，依靠臨床表現(xiàn)積分診斷。腸易激綜合征病情嚴(yán)重程度量表（IBS symptom severity scale,IBSSSS）評(píng)估IBS 病情可信度較高[2-4]。FXR 是核受體家族的一員，對(duì)膽汁酸代謝及循環(huán)具有調(diào)節(jié)作用[5]。PRDX 是一類具有抗氧化功能的蛋白，可以調(diào)控細(xì)胞產(chǎn)生H2O2的過(guò)程，參與多種氧化信號(hào)通路，與多種腫瘤相關(guān)[6]。PRDX1、FXR 與IBS-D 研究較少，本文旨在通過(guò)檢測(cè)PRDX1、FXR 在腸黏膜中的表達(dá)，分析其與IBS-SSS 積分的相關(guān)性，探討兩者與IBS-D 的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月—2018年9月在?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院就診的81 例IBS-D 患者為觀察組。參考IBS 最新診斷標(biāo)準(zhǔn)羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)[7]：①近來(lái)3 個(gè)月，每周≥1 次發(fā)生反復(fù)腹部不適或腹痛；②癥狀出現(xiàn)＞6 個(gè)月；③與排便有關(guān)；④伴排便頻率改變；⑤伴糞便性狀改變。滿足①、②及③～⑤中≥2 條者可確診為IBS。根據(jù)IBS-SSS積分將觀察組分為3個(gè)亞組，75～175 分為輕度組（19 例），＞175～300 分為中度組（45 例），＞300 分為重度組（17 例）。另選取與觀察組年齡相匹配的同期該院健康體檢者90 例為對(duì)照組。對(duì)照組IBS-SSS 積分＜75 分，年齡23～50 歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①確診為IBS-D；②年齡18～60 歲；③IBS-SSS 積分＞75 分。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①伴腸道器質(zhì)性疾病者；②接受過(guò)腹部手術(shù)者；③合并嚴(yán)重心、肺、腎疾病者；④妊娠、哺乳期女性；⑤近1 個(gè)月接受過(guò)藥物治療者；⑥有精神病史者。

1.3 方法

電子結(jié)腸鏡檢查前1 天告知受檢者食用容易消化的食物，勿食辛辣刺激類食物，檢查前受檢者服用聚乙二醇電解質(zhì)散劑，檢查前受檢者最后一次排便應(yīng)為無(wú)糞質(zhì)的淡黃色水樣便，檢查中動(dòng)作輕柔，退鏡至距離肛門20 cm 處，用活檢鉗取黏膜下層大小為0.1～0.2 cm 的乙狀結(jié)腸處腸黏膜組織，標(biāo)本立即用4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片，行HE 染色及免疫組織化學(xué)染色。PRDX1、FXR 試劑盒均購(gòu)于上海生工生物工程有限公司。PRDX1 主要定位在細(xì)胞質(zhì)；FXR 主要定位在細(xì)胞核，出現(xiàn)黃色、棕黃色、棕褐色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞陽(yáng)性率計(jì)分：陽(yáng)性率＜5%為0 分，5%～＜25% 為1 分，25%～＜50% 為2 分，50%～＜75%為3 分，≥75%為4 分。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)色為0 分，淡黃色為1 分，黃色或棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。細(xì)胞陽(yáng)性率計(jì)分與細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積為總分，總分≥3 分為陽(yáng)性表達(dá)，總分＜3 分為陰性表達(dá)。

1.4 IBS-SSS量表

IBS-SSS 包括5 個(gè)分項(xiàng)：腹痛程度、腹痛頻率、腹脹程度、排便滿意度、生活影響程度，每項(xiàng)0～100 分，總分500 分，積分在75～175 分為輕度，＞175～300 分為中度，＞300 分為重度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析用Spearman 法。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組一般資料比較

觀察組與對(duì)照組年齡、性別構(gòu)成、體重指數(shù)（BMI）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 觀察組與對(duì)照組一般資料比較

2.2 電子結(jié)腸鏡檢查結(jié)果

觀察組電子結(jié)腸鏡檢查結(jié)果顯示，觀察組無(wú)明顯病理改變，黏膜表現(xiàn)基本正常，部分有輕度紅斑或水腫。見(jiàn)圖1。

圖1 觀察組電子結(jié)腸鏡

2.3 HE染色結(jié)果

對(duì)照組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊、致密，黏膜上皮及固有層僅有少量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞。觀察組腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)輕度變化，部分腺體破壞，黏膜固有層淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞浸潤(rùn)增多。見(jiàn)圖2。

圖2 腸黏膜 （HE染色×100）

2.4 觀察組、對(duì)照組腸黏膜PRDX1、FXR陽(yáng)性表達(dá)率比較

對(duì)照組與觀察組腸黏膜PRDX1、FXR 陽(yáng)性表達(dá)率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），觀察組腸黏膜PRDX1 陽(yáng)性表達(dá)率比對(duì)照組高，F(xiàn)XR 陽(yáng)性表達(dá)率比對(duì)照組低。見(jiàn)表2。

表2 觀察組、對(duì)照組腸黏膜PRDX1、FXR陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

2.5 觀察組各亞組腸黏膜PRDX1、FXR 陽(yáng)性表達(dá)率比較

輕度組、中度組、重度組腸黏膜PRDX1、FXR陽(yáng)性表達(dá)率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：重度組腸黏膜PRDX1 陽(yáng)性表達(dá)率高于輕度組和中度組（P＜0.05），輕度組FXR 陽(yáng)性表達(dá)率高于中度組和重度組（P＜0.05），中度組FXR 陽(yáng)性表達(dá)率高于重度組（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 觀察組各亞組腸黏膜PRDX1、FXR陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

2.6 觀察組各亞組IBS-SSS積分比較

觀察組IBS-SSS 積分為（264.62±87.50）分，輕度組、中度組、重度組IBS-SSS積分分別為（139.95±29.70）分、（248.49±31.12）分和（387.98±60.44）分，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=184.577，P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果：輕度組、中度組、重度組IBS-SSS 積分依次升高（P＜0.05），重度組PIBS-SSS 積分高于中度組（P＜0.05）。

2.7 觀察組腸黏膜PRDX1、FXR 陽(yáng)性表達(dá)率與IBS-SSS積分的相關(guān)性分析

Spearman 結(jié)果顯示，觀察組腸黏膜PRDX1 陽(yáng)性表達(dá)率與IBS-SSS 積分呈正相關(guān)（rs=0.516，P=0.000），F(xiàn)XR 陽(yáng)性表達(dá)率與IBS-SSS 積分呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.575，P=0.000）。見(jiàn)圖3。

圖3 不同嚴(yán)重程度IBS患者腸黏膜組織PRDX1、FXR的表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×200）

3 討論

IBS 病程漫長(zhǎng)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能與黏膜免疫反應(yīng)、腦-腸軸功能異常、胃腸動(dòng)力異常、內(nèi)臟高度敏感性等有關(guān)[8]，IBS-SSS 對(duì)IBS 嚴(yán)重程度有較好的評(píng)估價(jià)值，本研究中，輕度組、中度組、重度組比較，IBS-SSS 積分依次升高。

PRDX 是在機(jī)體內(nèi)廣泛分布的重要抗氧化蛋白，6 種亞型在不同疾病中表達(dá)存在差異，PRDX1是PRDX 家族的典型成員，與多種疾病有關(guān)[9]。歐陽(yáng)竹等[10]研究發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織相比，PRDX1 表達(dá)較高，且與臨床病理分級(jí)、預(yù)后生存率相關(guān)。方虹等[11]研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥女性與骨密度正常的絕經(jīng)后女性相比，血漿PRDX1 低表達(dá)，單個(gè)核細(xì)胞PRDX1 mRNA 較低，PRDX1 與高密度脂蛋白膽固醇及炎癥生物標(biāo)志物中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞比、淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞比均有相關(guān)性，對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性有一定診斷價(jià)值。

PRDX1 與腸道疾病的關(guān)系引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。HORIE 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者黏膜隱窩上皮細(xì)胞PRDX1 的表達(dá)隨炎癥程度加重而升高，PRDX1 可反映潰瘍性結(jié)腸炎患者病情嚴(yán)重程度，與潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)腫瘤的氧化應(yīng)激關(guān)系密切。CHU 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者腸黏膜組織PRDX1 高表達(dá)，有一定診斷價(jià)值，可能成為結(jié)直腸癌的炎癥生物標(biāo)志物。張紅等[14]進(jìn)一步研究了PRDX1 與結(jié)腸癌的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)miR-581 在高侵襲性結(jié)腸癌細(xì)胞表達(dá)較低，向高侵襲性結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-581 后，細(xì)胞增殖、侵襲能力均降低，提示在miR-581 調(diào)控作用下PRDX1 表達(dá)受到抑制，結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力減弱。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，觀察組腸黏膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，炎癥細(xì)胞增多，PRDX1 陽(yáng)性表達(dá)率較高，提示PRDX1 與IBS-D 形成有關(guān)。氧化應(yīng)激反應(yīng)及促炎因子共同激活炎癥反應(yīng)信號(hào)通路，可能是PRDX1 參與IBS-D 的基礎(chǔ)[12]；另ZHANG 等[15]研究顯示，當(dāng)IBS 患者miR-510 被敲除時(shí)，通過(guò)上調(diào)PRDX1 的表達(dá)，脂多糖誘導(dǎo)的炎癥損傷加重。Spearman 相關(guān)分析顯示，觀察組腸黏膜中PRDX1 陽(yáng)性表達(dá)率與IBS-SSS 積分呈正相關(guān)，可能為反映IBS-D 病情的生物標(biāo)志物。

膽汁酸由肝臟合成分泌，是膽汁的主要成分，在肝臟循環(huán)、維持胃腸道穩(wěn)態(tài)的自我調(diào)節(jié)中起重要作用，是一種腸道信號(hào)分子，可以促進(jìn)活化氧簇、活性氮簇破壞細(xì)胞膜和線粒體，從而加劇DNA 損傷，是多種消化道疾病的促進(jìn)因素[16]。配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子FXR 是其關(guān)鍵受體，F(xiàn)XR基因?yàn)榈湫秃耸荏w結(jié)構(gòu)，在胃腸道大量表達(dá)。魏敏等[17]研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者與健康對(duì)照者相比，腸黏膜FXR 表達(dá)較低，表明FXR 降低可能參與潰瘍性結(jié)腸炎的形成，推測(cè)其通過(guò)NF-κB 通路抑制炎癥反應(yīng)而增強(qiáng)對(duì)腸道的保護(hù)，但其水平降低則腸道保護(hù)作用減弱。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組腸黏膜FXR 低表達(dá)，進(jìn)一步分析顯示，觀察組腸黏膜FXR陽(yáng)性表達(dá)率與IBS-SSS 積分呈負(fù)相關(guān)，對(duì)反映IBSD 病情有一定臨床價(jià)值。有研究表明，膽汁酸在IBS-D 中發(fā)揮重要作用，過(guò)量分泌膽汁酸時(shí)，結(jié)腸中膽汁酸大量蓄積，同時(shí)其重吸收減少，引起促分泌及腸運(yùn)動(dòng)功能增強(qiáng)，最終導(dǎo)致結(jié)腸蠕動(dòng)加快，發(fā)生腹瀉[18]。而FXR 低表達(dá)與IBS-D 形成有關(guān)，分析其原因是FXR 調(diào)節(jié)膽汁酸代謝，維持其穩(wěn)態(tài)，當(dāng)膽汁酸過(guò)量蓄積時(shí)進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)，抑制膽汁酸合成，從而減輕機(jī)體傷害，而FXR 分泌過(guò)少則未能改善體內(nèi)膽汁酸水平，引起IBS-D[19-20]。另一方面，回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑作為治療功能型便秘的新藥物可以促進(jìn)膽汁到達(dá)近端結(jié)腸，對(duì)結(jié)腸分泌及運(yùn)動(dòng)功能產(chǎn)生促進(jìn)作用[21-22]。隨著研究逐步深入，腸道菌群膽汁酸FXR-FGF19/15-JNK/ERK 途徑可能是引起IBS-D 的潛在機(jī)制[23]，但仍需大量臨床實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。

綜上所述，IBS-D 腸黏膜PRDX1 高表達(dá)，F(xiàn)XR低表達(dá)，可能參與IBS-D 的形成，PRDX1、FXR 與IBS-SSS 積分有相關(guān)性，可能成為反映IBS-D 病情變化的生物標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)，但這一觀點(diǎn)尚需大樣本研究數(shù)據(jù)支持，具體作用機(jī)制也需進(jìn)一步研究探討。