早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達(dá)及其臨床意義

操龍洋，王志榮，張俊杰，劉文芳，梅麗紅

近年來(lái)胃癌已成為發(fā)病率最高的消化道惡性腫瘤，隨著消化內(nèi)鏡等檢查手段的應(yīng)用，越來(lái)越多的胃癌患者能夠在早期得到確診和治療。內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)（ESD）是早期胃癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法[1]，但部分患者術(shù)后復(fù)發(fā)，影響患者預(yù)后。Y染色體性別決定區(qū)相關(guān)高速泳動(dòng)族框因子9（SOX9）與胃癌轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)密切相關(guān)[2]；尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2（CDX2）對(duì)消化道上皮黏膜發(fā)育起到重要調(diào)控作用，可誘導(dǎo)胃黏膜腸化生導(dǎo)致其分化異常，最終產(chǎn)生癌變[3]；膜聯(lián)蛋白A2（ANXA2）在胃癌、肝癌、食管癌等多種惡性腫瘤中存在異常高表達(dá)的情況[4]。本研究旨在探究早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達(dá)水平，并分析其與早期胃癌患者臨床病理特征及術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集杭州市臨安區(qū)第一人民醫(yī)院2015年1月至2018年12月收治的150例早期胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合早期胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，并經(jīng)臨床檢查確診；（2）行ESD，自愿參與本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)前接受放化療；（2）既往存在惡性腫瘤史；（3）肝、腎、心、肺等臟器功能異常；（4）中途失訪；（5）合并影響本研究結(jié)果的其他因素。其中男82例，女68例；年齡35～75歲，平均（62.3±3.8）歲；腫瘤直徑＜1.5 cm 89例，≥1.5 cm 61例；TNM分期T1a期46例，T1b期104例；腫瘤位置：胃體57例，賁門胃底部49例，幽門部44例；分化程度：低未分化69例、中高分化81例；浸潤(rùn)深度：黏膜內(nèi)95例，黏膜下55例。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。

1.2 方法 術(shù)前行常規(guī)腹部超聲、內(nèi)鏡超聲或CT檢查。行全身麻醉，取平臥位。明確病灶范圍后以0.4%靛胭脂染色，并對(duì)病灶邊緣0.5～1.0 cm行氬氣刀電凝標(biāo)記，于病灶邊緣行靛胭脂、腎上腺素和0.9%氯化鈉注射液多點(diǎn)注射。Dual刀切開(kāi)病灶邊緣，內(nèi)鏡直視下完整剝離黏膜下層并切除，剝離過(guò)程中持續(xù)注射混合液促進(jìn)病灶剝離，剝離病灶黏膜以負(fù)壓吸入內(nèi)鏡前段透明膜。觀察創(chuàng)面是否平整，有無(wú)穿孔、出血、病灶殘留等，可對(duì)創(chuàng)面血管性氬離子固化、熱活檢鉗和噴灑止血藥物等凝固治療，必要時(shí)可應(yīng)用止血夾夾閉血管。將取出的組織采用10%甲醛溶液固定，常規(guī)包埋、切片，行病理組織學(xué)檢查。所有患者ESD術(shù)后隨訪1～2年，形式包括胃鏡、血常規(guī)及血生化等，每3～6個(gè)月檢查1次。

1.3 觀察指標(biāo) 免疫組織化學(xué)法（ABC）染色檢測(cè)胃癌組織、癌旁組織中SOX9、CDX2及ANXA2的表達(dá)水平，染色結(jié)果判定由2位病理科主治醫(yī)師進(jìn)行雙盲法閱片，并采用半定量計(jì)分法進(jìn)行判定。對(duì)每張切片陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分，顯微鏡視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。通過(guò)2項(xiàng)評(píng)分乘積進(jìn)行綜合判斷：0分為陰性，1～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中度陽(yáng)性（2+），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（3+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用2檢驗(yàn)；COX模型分析早期胃癌患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素；受試者工作特征曲線（ROC）及曲線下面積（AUC）分析SOX9、CDX2及ANXA2對(duì)于ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表達(dá) 胃癌組織SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率均高于癌旁組織（2≥63.949，均P＜0.05）。見(jiàn)表1、封三彩圖4。

表1 胃癌組織、癌旁組織SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率分析 例（%）

圖4 胃癌組織及癌旁組織SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

2.2 SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與臨床病理特征的關(guān)系 SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與性別、年齡、腫瘤位置及腫瘤直徑無(wú)相關(guān)性（2≤2.912，均P＞0.05）；SOX9、CDX2表達(dá)陽(yáng)性率與TNM分期相關(guān)（2=13.036、12.409，均P＜0.05），ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與TNM分期無(wú)相關(guān)性（2=3.066，P＞0.05）；SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與分化程度、浸潤(rùn)深度及復(fù)發(fā)情況相關(guān)（2≥3.865，均P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

2.3 ESD術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的分析至末次隨訪，150例生存率為95.3%（143/150），復(fù)發(fā)率為8.7%（13/150）。單因素COX回歸分析顯示，TNM分期、低未分化、浸潤(rùn)黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表達(dá)陽(yáng)性與術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)（均P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 ESD術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素分析

2.4 多因素分析 多因素COX回歸分析顯示低未分化、浸潤(rùn)黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表達(dá)陽(yáng)性為早期胃癌患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 早期胃癌患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素Cox回歸分析

2.5 SOX9、CDX2及ANXA2對(duì)ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值分析 ROC曲線顯示SOX9、CDX2、ANXA2及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)的AUC分別為0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。見(jiàn)封三彩圖5。

圖5 SOX9、CDX2及ANXA2對(duì)于ESD術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)價(jià)值的ROC曲線

3 討論

近年來(lái)，對(duì)于胃癌發(fā)病機(jī)制的研究越來(lái)越多，多種基因、蛋白等分子標(biāo)志物在早期胃癌的發(fā)生中存在重要作用。本研究探討SOX9、CDX2及ANXA2在胃癌患者中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示上述指標(biāo)均在胃癌組織中呈高表達(dá)，其陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織。

胃癌等惡性腫瘤的病理特征惡化與腫瘤復(fù)發(fā)、疾病預(yù)后及總生存期有關(guān)[6-7]。本研究結(jié)果顯示，SOX9、CDX2表達(dá)陽(yáng)性率與早期胃癌患者TNM分期、分化程度、浸潤(rùn)深度及復(fù)發(fā)情況相關(guān)；ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率與早期胃癌患者分化程度、浸潤(rùn)深度及復(fù)發(fā)情況相關(guān)。COX回歸模型顯示，SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性為早期胃癌患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素；ROC曲線結(jié)果顯示，SOX9、CDX2、ANX A2及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于ESD術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)的AUC分別為0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。COX回歸分析及ROC曲線結(jié)果均提示，SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性對(duì)于早期胃癌患者ESD術(shù)后預(yù)后復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述，早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2表達(dá)陽(yáng)性率明顯增加，并對(duì)患者ESD術(shù)后復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)價(jià)值。