E-cadherin和Snail在前列腺癌組織中的表達及其與根治術后生化復發(fā)的相關性分析*

夏圻兒，顧 斌，李 軍，楊震宇，張定國，于 洋

（上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，上海201299）

近年來我國男性前列腺癌發(fā)病人數(shù)逐漸增多，已逐漸成為男性主要惡性腫瘤之一，給患者身體健康造成嚴重影響，阻礙正常工作生活，導致生活質量下降［1］。前列腺癌是指發(fā)生在前列腺上皮細胞惡性腫瘤，根據(jù)病理類型可分為鱗狀細胞癌、腺癌以及尿路上皮癌等多種類型［2］，該病的發(fā)生與年齡密切相關，55歲以前發(fā)病幾率較小，隨著年齡增大發(fā)病率逐漸提升，同時疾病的發(fā)生也和患者生活習慣、遺傳、膳食結構和性生活等因素有關［3］。前列腺癌早期階段病情隱匿，無明顯癥狀，部分患者確診時腫瘤組織已發(fā)生轉移，延誤最佳治療時機。因此尋找診斷腫瘤的有效標志物確診前列腺癌，對盡早展開治療和改善預后具有重要意義。上皮鈣黏素（E-cadherin）能夠抑制腫瘤細胞原發(fā)病灶脫落，防止腫瘤轉移，而轉錄因子Snail也和腫瘤的侵襲轉移存在密切聯(lián)系，臨床認為2者對于前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展以及預后存在密切聯(lián)系［4］。本文將對在前列腺癌組織中Ecadherin和轉錄因子Snail的表達以及與根治術后生化復發(fā)的關系展開討論。

材料和方法

1 研究對象

將2018年5月～2019年7月于上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院接受治療的52例前列腺癌患者作為本次研究對象并設為腫瘤（tumor）組，所有患者均接受前列腺癌根治術，病理檢查確診為前列腺癌，年齡≥50歲、病史資料齊全、自愿參與研究且簽署協(xié)議書等標準，同時排除并有嚴重腎臟疾病、其他器官惡性腫瘤、內(nèi)分泌疾病、凝血功能障礙和精神異常等情況?；颊咂骄挲g（61.25±2.14）歲，依照Gleason分級（評分越低，惡性程度越低；評分越高，惡性程度越高，共10分，以此進行分級共為5級）進行腫瘤組織分化分級，其中16例為3級及以上（均為3級），22例為2級，14例為1級；在TNM分期上，8例為Ⅰ期、12例為Ⅱ期、24例為Ⅲ期、8例為Ⅳ期。選取同期在我院收治的46例良性前列腺增生患者作為對照（con‐trol）組，所有患者經(jīng)尿道前列腺氣化電切術治療，病理檢查均確診為良性前列腺增生，患者平均年齡（61.14±2.08）歲。我院倫理委員會審查批準了此次研究，2組患者的一般性臨床資料對比無統(tǒng)計學意義（P>0.05），存在可比性。2組患者均接受生化檢驗。

2 方法

2.1 免疫組織化學測定E-cadherin和Snail的表達

收集患者病理組織標本，甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，脫蠟至水，EDTA液高溫狀態(tài)下實施抗原修復，隨后使用PBS清洗，在H2O2環(huán)境中孵育10 min，消除內(nèi)部過氧化酶活性。再次用PBS清洗，將正常血清滴入其中，室溫狀態(tài)下孵育15 min。I抗采用免抗人E-cadherin和Snail多克隆抗體，4℃的環(huán)境下放置過夜，使用PBS沖洗，將Ⅱ抗滴入，孵育15 min后再次使用PBS清洗，通過DAB顯色劑處理，采用二甲苯透明，封固措施選擇中性樹膠封閉，陰性對照將Ⅰ抗更換為PBS進行。切片過程通過顯微鏡觀察，采取5個高倍鏡視野觀察每個切片。兩組患者術后接受隨訪，定期到醫(yī)院進行血前列腺特異抗原水平檢測。生化復發(fā)標準前列腺癌根治術后每間隔3個月的血前列腺特異抗原水平檢測中，連續(xù)2次指標大于0.2μg/L判定為生化復發(fā)。

2.2 觀察指標 （1）通過雙盲法對免疫組化染色結果閱片，以細胞膜或細胞質是否存在棕黃色染色的強度和著色比例對E-cadherin和Snail陽性實施評分。染色強度標準：0分表示未存在染色，1分表示弱染色，2分表示強染色。著色細胞比例標準：1分表示占據(jù)1%～25%之間，2分表示占據(jù)26%～50%之間，3分表示占據(jù)51%～75%之間，4分表示占據(jù)比例在75%以上。判定結果等于染色強度分值×著色細胞比例分值，1～2分為陰性，3分以上為陽性。（2）靈敏度（%）=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。特異性（%）=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)））×100%。

3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS21.0進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料經(jīng)χ2檢驗，以（%）表示，采用Pearson進行相關性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 E-cadherin和Snail陽性表達情況的對比

腫瘤組E-cadherin陽性表達率顯著低于對照組（P<0.01）；腫瘤組Snail陽性表達率顯著高于對照組（P<0.01），見表1。

表1 兩組患者E-cadherin和Snail陽性表達率對比Table 1.Comparison of positive expression rates of E-cadherin and Snail between 2 groups of patients［n（%）］

2 前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達情況與病理特征的關系

在分化程度、淋巴結轉移、TNM分期及遠處轉移上，前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達情況差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），同時前列腺癌患者前列腺癌組織中E-cadherin和Snail表達呈負相關（r=-0.758，P<0.05），見表2。

表2 前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達率與病理特征的關系Table 2.The relationship between the positive expression rate of E-cadherin and Snail and pathological characteristics in patients with prostate cancer

3 前列腺癌患者根治術后生化復發(fā)與E-cadherin和Snail表達情況的關系

Kaplan-Meier分析結果可見前列腺癌患者根治術后無生化復發(fā)率，E-cadherin陽性表達者明顯高于E-cadherin陰性表達者，Snail陰性表達者明顯高于Snail陽性表達者（P<0.05），見圖1。

4 E-cadherin和Snail在前列腺癌組織中的相關性分析

將E-cadherin蛋白表達和Snail陽性率納入Pear‐son相關系數(shù)進行分析，隨著E-cadherin的陽性降低Snail的陽性升高，Snail蛋白和E-cadheri蛋白表達為負向相關關系（r=-0.69，P<0.05）。

E-cadherin和Snail聯(lián)合診斷的陽性率靈敏度、準確性以及特異性差異高于E-cadherin和Snail單獨診斷，對比有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 E-cadherin和Snail在前列腺癌組織中的相關性分析Table 3.Correlation analysis of E-cadherin and Snail in prostate cancer tissue（%）

討 論

Figure 1.The relationship between biochemical recurrence and the expression of E-cadherin and Snail in the patients with prostate cancer after radical resection.圖1 前列腺癌患者根治術后生化復發(fā)與E-cadherin和Snail表達情況的關系

在成體組織器官的構成過程中，鈣黏蛋白作為同親型結合、Ca依賴的細胞粘著糖蛋白促進了胚胎發(fā)育中的細胞識別和組織分化［5］。E-Cadherin是一種在上皮細胞中表達的黏附蛋白，它的表達改變一定程度上會對組織內(nèi)部細胞粘附狀態(tài)造成影響，同時影響腫瘤細胞分化［6］。E-cadherin還能維持上皮細胞正常的組織結構和形態(tài)，起到細胞間的介導作用［7］。并且對腫瘤細胞形成有抑制效果，防止腫瘤轉移［8］。惡性腫瘤的發(fā)生與上皮細胞向間充質的轉化存在密切聯(lián)系，參與了其中各個環(huán)節(jié)，促進了腫瘤細胞的侵襲和轉移［9］。當E-cadherin出現(xiàn)基因突變，異常修飾，腫瘤細胞自身黏附度下降，加快腫瘤細胞分解速度，從而導致腫瘤細胞發(fā)生轉移和浸潤［10］。

從本次研究結果得知，腫瘤組E-cadherin陽性表達率明顯低于對照組，Snail陽性表達率明顯高于于對照組，說明E-cadherin低表達狀態(tài)與前列腺癌的發(fā)生存在密切聯(lián)系。在前列腺癌患者TNM分期上，Ⅰ～Ⅱ期患者中的E-cadherin陽性表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者，表明前列腺癌患者晚期階段E-cadherin陽性表達率相較于早期階段更低。并且存在前列腺癌組織遠處轉移的患者E-cadherin陽性表達率明顯低于癌組織未轉移患者，并且存在淋巴結轉移的患者其E-cadherin陽性表達率也低于淋巴結未轉移的患者，原因可能是E-鈣黏蛋白基丟失后表達減少，腫瘤細胞在缺少接觸抑制后大量增多，造成局部腫瘤細胞發(fā)生脫落，最終導致腫瘤細胞浸潤和轉移［11-13］。現(xiàn)階段臨床對于E-cadherin陽性表達率與根治術后生化復發(fā)關系的研究較少，本次研究中發(fā)現(xiàn)E-cadherin陽性表達者無生化復發(fā)率明顯高于E-cadherin陰性表達者，一定程度說明前列腺根治術后患者E-cad‐herin呈陽性時生化復發(fā)幾率更低，預后效果良好。

轉錄因子Snail是Snail超家族中的一類，在胚胎發(fā)育以及創(chuàng)口愈合等生理過程中Snail超家族起到了關鍵作用［14-16］。最早在果蠅中發(fā)現(xiàn)了Snail是一種高度不穩(wěn)定的蛋白。隨著研究的深入，在胰腺癌、乳腺癌以及結腸癌等惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了Snail的存在，同時與大多數(shù)腫瘤的臨床分期、組織學分級和預后效果存在密切聯(lián)系［17］。臨床發(fā)現(xiàn)，鋅指結構的轉錄因子在Snail超家族中占據(jù)重要地位，Snail超家族大多具有類似的結構，都由一個高度可變的氨基末端和一個非常保守的羧基末端構成，Snail轉錄因子中包含E-box，在生理過程中轉錄抑制因子可被Snail替代，起到相似的作用［18］。同時Snail在機體腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，可加快腫瘤細胞的浸潤和轉移。上皮細胞向間充質細胞的轉變在腫瘤的浸潤和轉移中起著關鍵性作用，Snail是上皮間質轉化過程中的一個不可或缺的關鍵性轉錄因子，它在上皮細胞向間充質細胞的轉變過程中表達升高，然后直接結合E-cadherin的啟動子上抑制E-cad‐herin的轉錄從而下調(diào)E-cadherin，且并不影響Snail的蛋白水平變化，而是直接抑制它的功能［19］。

從本次研究結果得知，腫瘤組Snail陽性表達率明顯高于對照組，同時隨著分化程度的下降Snail陽性表達率出現(xiàn)升高，說明了前列腺癌惡性程度與Snail蛋白存在密切聯(lián)系。在前列腺癌患者TNM分期上，Ⅰ～Ⅱ期患者中的Snail陽性表達率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，表明前列腺癌患者晚期階段E-cad‐herin陽性表達率相較于早期階段更高［20］。同時存在遠處轉移的前列腺癌患者Snail陽性表達率明顯高于未轉移的患者，而且存在淋巴結轉移的患者相較于淋巴結未轉移的患者其Snail陽性表達率明顯更高。在無生化復發(fā)率上，Snail陰性表達者明顯高于Snail陽性表達者，說明了通過Snail表達的高低狀態(tài)能夠評估和預測前列腺癌不良預后情況。在本次研究中，前列腺癌患者癌組織中與E-cadherin和Snail的表達呈負相關，結果說明了當E-cadherin的表達受到Snail的抑制后，造成上皮細胞連接結構的破壞，導致癌細胞之間黏附作用較弱，腫瘤細胞發(fā)生松散，從而促進腫瘤細胞的浸潤和轉移。

綜上所述，前列腺癌患者癌組織中E-cadherin呈低表達狀態(tài)，而Snail呈高表達狀態(tài)，極大程度影響前列腺癌細胞的浸潤和轉移，導致前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展，與前列腺癌根治術后生化復發(fā)密切相關，通過對E-cadherin和Snail表達情況的進一步研究，能夠更深入的了解前列腺癌的發(fā)展機制，準確診斷前列腺癌，有利于治療方案的制定和預后改善。