南京地區(qū)老年冠狀動脈疾病病人ApoE基因多態(tài)性與SYNTAX評分的相關(guān)性研究

楊楊 周瀅 田蕓凡 史倞

冠狀動脈疾病(coronary artery disease, CAD)可導(dǎo)致冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用導(dǎo)致的心血管疾病。全基因組關(guān)聯(lián)研究目前發(fā)現(xiàn)了約60個CAD的遺傳易感性位點[1]，其中載脂蛋白E (apolipoprotein E, ApoE) 基因多態(tài)性因引起血脂代謝異常而與CAD的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。SYNTAX評分體系是一種新型的按照冠狀動脈解剖特點進行危險分層的積分系統(tǒng)，可以客觀反映冠狀動脈病變的嚴重程度。本研究將探討南京地區(qū)老年人群ApoE基因多態(tài)性與冠狀動脈病變復(fù)雜程度SYNTAX評分的相關(guān)性，以及ApoE是否可以作為預(yù)測冠狀動脈病變復(fù)雜程度的基因?qū)W指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集 2017年8～9月江蘇省人民醫(yī)院心臟科連續(xù)收治的就診戶口所在地為南京的>60歲老年CAD病人109例，進行冠脈造影(CAG)檢查。其中男68例，女41例；年齡60～94歲，平均(70.52±7.58)歲。按基因型分為3組，ApoE2組22例，平均年齡(68.09±6.89)歲，男12例，女10例；ApoE3組71例，平均年齡(71.24±7.82)歲，男46例，女25例；ApoE4組16例，平均年齡(70.69±7.12)歲，男10例，女6例。納入標(biāo)準(zhǔn)：通過臨床表現(xiàn)及實驗室檢查等考慮有行CAG的病人；排除標(biāo)準(zhǔn)：存在先天性心臟病、心肌病、心臟瓣膜病、心源性休克、惡性心律失常、多臟器功能不全、合并感染性疾病、消化道出血、哮喘、拒絕CAG者。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集：記錄病人的性別、年齡、高血壓病史、糖尿病病史、高血脂病史，脂蛋白(a)[Lp(a)]、TC、TG、LDL-C、HDL-C、肌酐(Cr)等臨床指標(biāo)。

1.2.2 CAG檢查：該手術(shù)由經(jīng)驗豐富的心內(nèi)科醫(yī)師完成，采用GE大型數(shù)字減影血管造影機進行冠狀動脈多體位投照，結(jié)果由2名冠脈方面的介入專家判讀,結(jié)果不一致時由第3名醫(yī)師分析確定。左主干管腔直徑狹窄≥30%，左前降支、左回旋支、右冠狀動脈及其主要分支血管，任何一支血管管腔直徑狹窄≥50%確定為陽性病變。

1.2.3 ApoE基因多態(tài)性檢測：用試劑盒提取病人清晨空腹血的白細胞基因組DNA，設(shè)計引物進行PCR來擴增編碼112位和158位氨基酸的ApoE基因片段，再使用限制性內(nèi)切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR產(chǎn)物，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)掃描電泳結(jié)果，在標(biāo)準(zhǔn)分子量對照下鑒定不同個體的ApoE基因型。同時使用已知的ApoE2、ApoE3、ApoE4質(zhì)粒為模板擴增ApoE基因片段，內(nèi)切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR產(chǎn)物進行對照。

1.2.4 其他生化指標(biāo)的檢測方法：以高效液相色譜(HPLC)法測定TC、TG水平，以超速離心結(jié)合ALBK法測定LDL-C、HDL-C水平，以膠乳增強免疫比濁法測定Lp(a)水平，運用堿性苦味酸法測定Cr水平。

1.2.5 SYNTAX評分：首先判斷冠狀動脈為左優(yōu)勢型或右優(yōu)勢型，再根據(jù)病變部位對左心室供血的范圍進行加權(quán)，然后根據(jù)CAG下病變的具體特點進行打分，如血管阻塞的程度、數(shù)量、時間、長度以及是否有開口部阻塞等，最后將所有得分相加乘以權(quán)重即得到病人的SYNTAX評分情況。評分結(jié)果由2名冠脈方面的介入專家判讀,結(jié)果不一致時由第3名醫(yī)師分析確定。

2 結(jié)果

ApoE基因表現(xiàn)型分為3種，其中ApoE2表現(xiàn)型包括ApoE2/2和ApoE2/3基因型，ApoE3表現(xiàn)型包括ApoE3/3和ApoE2/4基因型，ApoE4表現(xiàn)型包括ApoE3/4和ApoE4/4基因型。由于ApoE2與ApoE4等位基因可表現(xiàn)出對CAD相反的作用，因此既往研究中常排除ApoE2/4基因型。在110個分析對象中，最終獲得了109個樣本符合基因型要求，排除1個ApoE2/4基因型的樣本。

2.1 3組基線資料比較 3組間性別、年齡、高血壓病史、糖尿病病史、高血脂病史、TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp(a)、Cr等方面差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 ApoE基因表現(xiàn)型與SYNTAX評分的關(guān)系 3組之間SYNTAX評分差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ApoE3組及ApoE4組SYNTAX評分顯著高于ApoE2組(P<0.05)，而ApoE3組與ApoE4組相比，SYNTAX評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 各組病人基線資料比較

3 討論

CAD是目前影響人類健康的重要疾病之一，其相關(guān)遺傳易感基因多態(tài)性與CAD的關(guān)系逐漸被人們認識，其中ApoE基因多態(tài)性因可能引起血脂代謝異常而與CAD的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。本研究中南京地區(qū)老年CAD病人基因表現(xiàn)型為ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人比例分別為20.2%、65.1%和14.7%，與以往研究報道的3種基因表現(xiàn)型在中國人群中的比例分別為23.8%、65.3%和10.9%基本一致[2]。

本研究對冠狀動脈嚴重程度的評估采用SYNTAX評分法，這是一種新型的按照冠狀動脈解剖特點進行危險分層的積分系統(tǒng)，可以客觀反映冠狀動脈病變的嚴重程度，該評分方法很大程度地提升了本研究結(jié)果的可信度。有研究驗證了SYNTAX評分在介入心臟病學(xué)中的應(yīng)用是至關(guān)重要的，評分越高表示著心臟疾病的嚴重程度越高，預(yù)后越差。因此，SYNTAX評分不僅是一種血管造影工具，還在臨床實踐中對疾病嚴重程度的評估起著重要作用[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，在年齡≥60歲的老年冠心病人群中，基因表現(xiàn)型為ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人SYNTAX評分的均值分別為(7.75±7.62)分、(14.77±9.52)分和(15.53±7.14)分，組間比較提示ApoE基因表現(xiàn)型為ApoE2的人群發(fā)生CAD時冠脈病變的復(fù)雜程度低于ApoE3及ApoE4人群。既往研究提示，ApoE2等位基因?qū)AD具有保護作用[4]，而ApoE4等位基因的作用與之相反[5-7]。一項臨床研究表明，ApoE3基因表現(xiàn)型者CAD的復(fù)雜程度顯著高于其他基因表現(xiàn)型[8]；此外，另一項觀察性研究表明，冠脈嚴重狹窄組中ApoE4基因表現(xiàn)型的比例高于輕度狹窄組，這兩項研究的結(jié)果與本研究結(jié)果是一致的[9]。

本研究是一個單中心回顧性研究，可能存在選擇偏倚。且病例數(shù)稍偏少，缺乏長期隨訪。上述結(jié)果仍需要更深入和大樣本的研究來進一步證實。

綜上所述，本研究涉及的南京地區(qū)老年CAD病人與全國ApoE基因表現(xiàn)型的分布基本一致，SYNTAX評分提示南京地區(qū)老年CAD病人基因表現(xiàn)型為ApoE3和ApoE4者的CAD復(fù)雜性高于ApoE2者。因此，ApoE的多態(tài)性對臨床預(yù)測老年人群CAD的復(fù)雜程度具有重要意義，可作為CAD復(fù)雜性的預(yù)測因子。