東江源水域大刺鰍卵巢發(fā)育周年變化及組織學(xué)觀察

羅楠 李燕華 萬(wàn)國(guó)湲 馬本賀 吳斌 曾慶祥 王海華

摘要：利用石蠟切片技術(shù)及繁殖生物學(xué)重要參數(shù)的測(cè)量統(tǒng)計(jì)，對(duì)東江源水域大刺鰍卵巢發(fā)育的周年變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，大刺鰍卵巢發(fā)育可分為6個(gè)時(shí)期。大刺鰍繁殖期在4月～8月，全年平均成熟系數(shù)最高的月份為6月、7月。7月后平均成熟系數(shù)開(kāi)始下降，翌年2月降至最低，平均為0.89%。大刺鰍產(chǎn)卵類(lèi)型為分批產(chǎn)卵型。

關(guān)鍵詞：大刺鰍;卵巢發(fā)育;組織學(xué);周年變化

中圖分類(lèi)號(hào)：S917? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-3188（2021）02-026-04

大刺鰍（Mastacembelus armatusa），隸屬鱸形目、刺鰍科、刺鰍屬，俗稱辣錐、石錐、刀鰍、豬母鋸、鐮刀魚(yú)等，是一種主要分布我國(guó)東南地區(qū)的小型淡水魚(yú)類(lèi)，棲息于有石塊的江河底層，或岸邊有水草的深潭石縫處[1]。其肉質(zhì)鮮美，富含氨基酸和礦物元素[2]。該魚(yú)因其外觀特殊，體表有棘刺，原來(lái)不受市場(chǎng)重視，關(guān)注較少。近年來(lái)，隨著人們對(duì)該物種認(rèn)識(shí)的不斷提高，加上其本身肉嫩味佳，無(wú)肌間刺，而且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受消費(fèi)者喜愛(ài)，其良好的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)價(jià)值日益得到體現(xiàn)。目前對(duì)大刺鰍資源[3，4]、養(yǎng)殖[5，6]和遺傳生物學(xué)如核型、線粒體遺傳多態(tài)性、同工酶，性腺發(fā)育等[7-10]有少量的報(bào)道，對(duì)大刺鰍卵巢發(fā)育的周年變化、產(chǎn)卵特性、最佳人工繁殖時(shí)期等尚不清楚。本文研究了大刺鰍卵巢發(fā)育周年變化過(guò)程，為優(yōu)化大刺鰍人工繁殖技術(shù)提供基礎(chǔ)資料。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)魚(yú)大刺鰍為贛州市定南縣東江源水域捕撈的野生馴化種。本試驗(yàn)于2019年3月～2019年10月，每月下旬取樣1次，每次10尾，進(jìn)行生物學(xué)測(cè)定，觀察并記錄性腺的發(fā)育時(shí)期、質(zhì)量，然后切取性腺組織塊，固定于中性甲醛溶液中。

1.2? 試驗(yàn)方法

按常規(guī)組織切片方法，取出性腺組織，進(jìn)行脫水、透明、透蠟和石蠟包埋等，切片厚度為6～8 μm，用蘇木精-伊紅（Hematoxylin-Eosinstaining，HE）染色法染色，中性樹(shù)膠封片，然后在佳能550D顯微鏡下觀察和攝影。性腺分期標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[11，12]。成熟系數(shù)按下式計(jì)算：

成熟系數(shù)（GSI）=（性腺重/魚(yú)體重）×100%

1.3? 數(shù)據(jù)及圖像處理

所得數(shù)據(jù)用Excel 2007軟件分析，圖片用 Photoshop CC 2018編輯。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 大刺鰍卵巢發(fā)育的形態(tài)及組織學(xué)特征

大刺鰍卵巢呈長(zhǎng)囊狀，前端分離，位于鏢腹壁兩側(cè)、肝胰臟背方，左右對(duì)稱，后段末端匯合成一短的呈“Y”字型輸卵管通泄殖孔，外有極薄的腹膜包裹，它們通過(guò)卵巢系膜與體腔壁層相連。根據(jù)卵子發(fā)生細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)和性腺解剖觀察，按其形態(tài)、顏色、大小和血管分布等特征，可將大刺鰍卵巢發(fā)育分為6期（圖1）。

Ⅰ期卵巢：Ⅰ期卵巢呈透明的細(xì)線狀，肉眼不能辨別雌雄。

Ⅱ期卵巢：Ⅱ期卵巢呈扁平帶狀，肉色略透明，左右兩葉基本等長(zhǎng)，肉眼尚不能看清卵粒，此期卵巢不易同脂肪組織剝離。切片觀察顯示，此期屬初級(jí)卵母細(xì)胞小生長(zhǎng)期，以第Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞質(zhì)呈微粒狀，細(xì)胞核卵形，占卵母細(xì)胞的大部分（圖1-Ⅱ期、圖3-Ⅱ）。

Ⅲ期卵巢：此期卵巢體積增大，肉色不透明，顯長(zhǎng)管狀。主要以第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，呈圓形或橢圓形，但也夾雜一些第Ⅱ時(shí)相的卵母細(xì)胞。第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞胞質(zhì)邊緣出現(xiàn)卵黃泡，細(xì)胞外出現(xiàn)一層薄的放射帶（圖1-Ⅲ期、圖3-Ⅲ）。

Ⅳ期卵巢：此期卵巢體積急劇增大，呈現(xiàn)米黃色，囊狀，卵粒飽滿，易于剝離。切片觀察顯示，主要以第Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，有少量Ⅱ、Ⅲ時(shí)相卵細(xì)胞。Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞體積增大，卵黃泡增厚，細(xì)胞質(zhì)嗜堿性，細(xì)胞核極化，放射帶增厚（圖1-Ⅳ期、圖3-Ⅳ）。

Ⅴ期卵巢：此期卵巢囊狀，柔軟膨大，非常飽滿，呈現(xiàn)明黃色。卵粒間彼此分離，稍壓魚(yú)腹部可擠出卵粒。切片觀察顯示，主要以第Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，同時(shí)可見(jiàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞。此期細(xì)胞由Ⅳ期卵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)成熟分裂發(fā)育至次級(jí)卵母細(xì)胞，胞內(nèi)充滿粗大卵黃顆粒，核膜溶解，核崩解消失，放射帶明顯增厚（圖1-Ⅴ期、圖3-Ⅴ-1、Ⅴ-2）。

Ⅵ期卵巢：此期卵體積縮小，萎縮松弛不飽滿，卵粒發(fā)白且顏色不均勻，出現(xiàn)消融現(xiàn)象。此期卵巢也偶見(jiàn)雙側(cè)卵巢大小不一致，一側(cè)顯現(xiàn)飽滿的囊狀，一側(cè)則完全萎縮的現(xiàn)象（圖1-Ⅵ期、圖2）。卵巢中卵母細(xì)胞開(kāi)始消化吸收，切片觀察顯示，卵巢中有大量正在消化吸收中的第Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞，含有空濾泡（圖3-Ⅵ）。

2.2? 大刺鰍卵巢發(fā)育的周年變化

東江源水域大刺鰍整個(gè)生殖周期內(nèi)，雌性魚(yú)全年的成熟系數(shù)范圍為0.89%～17.42%（圖4）。1月～2月期間最低，從3月開(kāi)始，成熟系數(shù)逐月增高，至6月、7月達(dá)到最高峰。7月后成熟系數(shù)下降，至10月降到4%左右，12月至翌年2月份成熟系數(shù)相對(duì)穩(wěn)定。從翌年3月開(kāi)始，隨著水溫的上升，卵巢開(kāi)始重新發(fā)育，成熟系數(shù)也逐漸上升，進(jìn)入新一輪的發(fā)育周期。

3? 討論

一般對(duì)魚(yú)類(lèi)產(chǎn)卵類(lèi)型可分為以下三種：1次性產(chǎn)卵即1個(gè)繁殖季節(jié)內(nèi)產(chǎn)卵1次，如草魚(yú)[13];分批產(chǎn)卵即一個(gè)繁殖季節(jié)內(nèi)可以產(chǎn)2～3次，如光唇魚(yú)（Acrossocheilus fasciatus）[14];連續(xù)產(chǎn)卵類(lèi)型即1年可產(chǎn)數(shù)10次，如稀有鮈鯽（Gobiocypris rarus）[15]。本研究根據(jù)卵巢發(fā)育形態(tài)及組織切片觀察結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在Ⅳ、Ⅴ期卵巢中存在第Ⅱ、Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞，在適宜的條件下第Ⅱ、Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞可以發(fā)育成熟為第Ⅳ、Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞。本研究在解剖過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)大刺鰍兩側(cè)卵巢排卵不同步現(xiàn)象，有一側(cè)卵巢卵子全部排空，萎縮，發(fā)展到第Ⅵ期狀態(tài)，另外一側(cè)卵巢還保持著飽滿的Ⅴ期狀態(tài)，在環(huán)境適宜，營(yíng)養(yǎng)足夠的情況下繼續(xù)產(chǎn)卵，環(huán)境條件不適宜，營(yíng)養(yǎng)不夠卵巢就會(huì)被吸收，萎縮至第Ⅵ期，然后進(jìn)一步至Ⅱ，Ⅲ期，開(kāi)始下一輪性腺發(fā)育繁殖。結(jié)果表明大刺鰍屬于非同步性成熟，分批產(chǎn)卵類(lèi)型。該結(jié)果與劉霆等、周惠強(qiáng)[8，9]研究珠江水系大刺鰍性腺發(fā)育研究結(jié)果相似。另外據(jù)本研究對(duì)大刺鰍雌魚(yú)性腺成熟系數(shù)統(tǒng)計(jì)，大刺鰍雌魚(yú)全年有5個(gè)月的成熟系數(shù)在10%以上，6月，7月達(dá)到最高峰，表明大刺鰍在繁殖季節(jié)具備多次產(chǎn)卵的潛力，盛產(chǎn)期為6月、7月。

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