檀香紫檀內生真菌多樣性與抗菌活性分析

施文廣 梁金虎 馮美茹 李佳琪 黃李坤 張雪慧 鄧祖軍

摘要：【目的】分析藥源植物檀香紫檀內生真菌多樣性及其代謝產(chǎn)物抗菌活性，為尋找新型抗菌活性物質提供參考?！痉椒ā繌膹V東藥科大學中藥園采集3株健康檀香紫檀的根、莖、葉組織樣品，采用組織分離法分離其內生真菌;結合形態(tài)學和分子生物學方法對檀香紫檀內生真菌進行分類和鑒定;分別采用紙片擴散法和菌絲生長速率法研究代表性內生真菌發(fā)酵液對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC26003、大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC44102、痢疾桿菌（Shigella dysenteriae）CMCC51252、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）CMCC50115、白色念珠菌（C. albicans）ATCC10231和黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC98003的抗菌活性?！窘Y果】從450塊檀香紫檀組織中共分離到337株內生真菌，其中來自葉172株、莖66株、根99株，隸屬15個屬。葉部內生真菌的相對分離率和定殖率最高，均為79.63%;葉部、根部和莖部的內生真菌多樣性指數(shù)分別為1.02、0.93和0.64，三者間差異顯著（P<0.05）。木霉屬（Trichoderma sp.）為根部優(yōu)勢屬，相對分離率為28.28%;青霉屬（Penicillium sp.）為莖部和葉部的優(yōu)勢屬，相對分離率分別為46.97%和52.91%。45株代表性內生真菌發(fā)酵液抗菌活性測定結果顯示，有16株內生真菌（35.56%）對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和痢疾桿菌具有抑菌活性;36株（80.00%）對白色念珠菌和黑曲霉具有抑菌活性;有15株（33.33%）對6種測試細菌和真菌均具抑制活性，其中菌株L9（Colletotrichum sp.）代謝產(chǎn)物的抗菌活性最好，對黑曲霉抑制活性達67.35%，對其余5種測試菌的抑菌圈直徑均大于10 mm?！窘Y論】檀香紫檀內生真菌類群分布具有一定的器官組織特異性，物種多樣性較豐富，且蘊含有較高比例的抗細菌和抗真菌活性菌株，可為新型抗菌活性物質的篩選與開發(fā)提供菌株資源。

關鍵詞： 檀香紫檀;內生真菌;生物多樣性;抗菌活性

中圖分類號： S792.29;S182? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）02-0538-09

Abstract：【Objective】The aim of this study was to investigate the biological diversity and antimicrobial activities of endophytic fungi of Pterocarpus santanilus，providing reference for new antimicrobial active substances. 【Method】Samples of roots， stems and leaves of three healthy P. santanilus plants were collected from the Chinese Medicine Garden of Guangdong Pharmaceutical University in Guangzhou. The endophytic fungi of P. santanilus were isolated by tissue block isolation method and were identified by morphological and molecular biological methods. The antimicrobial activities of endophytic fungi fermentation broth against Staphylococcus aureus CMCC26003， Escherichia coli CMCC44102， Shigella dysenteriae CMCC51252，Salmonella typhimurium CMCC50115，Candida albicans ATCC10231 and Aspergillus niger CMCC98003 were studied by the paper disk diffusion method and mycelium growth rate method respectively. 【Result】A total of 337 endophytic fungi were isolated from 450 P. santanilus tissues（172 in leaves， 66 in stems and 99 in roots）， belonging to 15 genera. The relative isolation rate and colonization rate of endophytic fungi in leaves were the highest， they were both 79.63%. The diversity index of endophytic fungi in leaves， stems and roots were 1.02， 0.93 and 0.64 respectively， and there was significant difference among them（P<0.05）. Trichoderma sp. genus was the dominant genus in root， and the relative isolation rate was 28.28%. Penicillium sp. genus was the dominant endophytic fungi genus of stems and leaves， and the relative isolation rates were 46.97% and 52.91% respectively. The results of the antimicrobial activities of the 45 endophytic fungi fermentation broth from P. santanilus showed that 16 strains（35.56%） had the antibacterial activity against E. coli CMCC44102， S. aureus CMCC26003， S. typhimurium CMCC50115 and S. dysenteriae CMCC51252; 36 strains（80.00%） showed the inhibition activity against C.albicans ATCC10231and A.niger CMCC98003.? And 15 strains（33.33%） could inhibit the growth of all the six pathogens. L9（Colletotrichum sp.） showed the best antimicrobial activities. It had an inhibitory activity of 67.35% against A. niger CMCC98003 and the diameter of inhibition zones against the other five pathogens were all more than 10 mm.【Conclusion】Theendophytic fungi communityin P. santanilus istissue specific， and the species diversity of P. santanilus endophytic fungi is rich， and there is a high proportion of endophytic fungi with good antibacterial and antifungal activities. The endophytic fungi of P. santanilus provide strain resources for screening and development of new antimicrobial active substances.

Key words： Pterocarpus santanilus; endophytic fungi; bio-diversity; antimicrobial activities

Foundation item： National Natural Science Foundation of China（31971384）

0 引言

【研究意義】藥用植物是抗菌藥物的重要來源，但許多藥用植物生長周期相對較長，人工栽培推廣較慢，產(chǎn)量低，資源供應較緊缺（沈徐婷和丁志山，2018;趙小惠等，2019），單純從藥用植物體提取和開發(fā)藥用活性成分已很難滿足人類的需求（呂婉婉等，2018）。同時，隨著微生物耐藥性越來越嚴重和超級細菌的頻繁出現(xiàn)（李昕等，2020），已有抗菌藥物也已不能完全滿足臨床抗菌治療的需求。因此，尋找藥用植物的替代資源以及開發(fā)新的抗菌藥物顯得尤為迫切，對于緩解植物藥來源匱乏，豐富臨床抗菌藥物庫具有重要意義。檀香紫檀（Pterocarpus santanilus Linn. f.）為蝶形花科（Papilionaceae）紫檀屬（Pterocarpus）木本植物，在熱帶原始森林自然分布（Arunkumar and Joshi，2014）。檀香紫檀除作為名貴木材在家具和工藝品方面具有重要的應用價值外，還具有較高的藥用價值。檀香紫檀的心材、樹皮、種子和葉片提取物被發(fā)現(xiàn)具有多種藥理活性（Bulle et al.，2016a;Donga et al.，2017;陳仁利和曾杰，2018; Akhouri et al.，2020），主要應用于護肝及口腔疾病、皮膚病、神經(jīng)過敏等疾病的治療（Bulle et al.，2016b）。檀香紫檀作為一種具有廣泛藥理活性的藥源植物，市場需求量大，但檀香紫檀被過度砍伐，目前其野生資源已近枯竭，市場供應極為緊缺（Arunkumar and Joshi，2014;Teixeira da Silva et al.，2019）。因此，尋找可行的替代資源以解決檀香紫檀資源緊缺問題，實現(xiàn)其藥用資源的充分挖掘和利用已成為檀香紫檀產(chǎn)業(yè)面臨的一個重要課題。【前人研究進展】藥用植物內生真菌已成為天然活性代謝產(chǎn)物的一個重要資源庫，而且相對于藥用植物，內生真菌更易繁殖，因而內生真菌為解決藥用植物資源緊缺，全面挖掘和利用其蘊含的藥用資源提供了新思路（羅利瓊等，2016;郭順星，2018）。植物內生真菌作為一類長期生活在宿主體內的共生真菌，一般情況下不會導致宿主出現(xiàn)明顯病害癥狀（Deng et al.，2014;顏楨靈等，2019）。藥用植物內生真菌生境較特殊，且與宿主植物存在緊密的共生關系，大量研究表明藥用植物內生真菌不僅普遍存在與宿主植物類似的生理活性的次生代謝產(chǎn)物，還蘊含著大量的具有獨特化學結構和廣泛生理活性的次生代謝產(chǎn)物（楊鼎超等，2017;Venieraki et al.，2017;張曉云等，2020;Mangan-yi and Ateba，2020）。Martínez-Luis等（2012）從紫茉莉（Guapira standleyana）葉中的內生真菌Aspergillus sp. strain F1544中分離到5種具有抗寄生蟲活性的化合物（Pseurotin A、14-norpseurotin A、FD-838、Pseurotin D、Fumoquinone B）;Uzor等（2016）發(fā)現(xiàn)從藥用植物法氏花椒（Fagara zanthoxyloides）葉中分離到的內生真菌茶擬盤多毛孢菌（Pestalotiopsis thea）可產(chǎn)生對呼吸道合胞病毒增殖具有顯著抑制活性的氯異硫氰酸（Chloroisosulochrin）;Prihantini和Tachibana（2017）發(fā)現(xiàn)從藥用植物杜英（Elaeocarpus chinensis）的內生真菌Pseudocercospora sp. ESL 02中分離到的土曲霉酸（Terreic acid）和6-甲基水楊酸（6-methylsalicylic acid）具有很強的抗氧化活性，其DPPH（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）自由基清除活性半抑制濃度（IC50）分別高達0.22和3.87 mmol/L;Kornsakulkarn等（2018）從藥用植物南酸棗[Choerospondias axillaris（Roxb.） Burtt. et Hill]的黑孢霉屬（Nigrospora sp.）內生真菌Nigrospora sp. BCC 47789代謝產(chǎn)物中分離到一種對口腔表皮樣癌細胞（KB）、人乳腺癌細胞（MCF-7）和人肺癌細胞（NCI-H187）均具細胞毒性的新的氫蒽醌（Nigrosporone A）;Venkateswarulu等（2018）發(fā)現(xiàn)分離自藥用植物欖仁果（Terminalia pallida）的內生真菌Cladosporium delicatulum產(chǎn)生的白花丹素（5-hydroxyl-2-methylnaptalene-1，4-dione）具有很強的抗真菌活性，其對白色念珠菌（Candida albicans）、熱帶念珠菌（C. tropicalis）、稻小核菌（Sclerotium oryzae）和串珠鐮孢菌（Fusarium moniliforme）的最小抑菌濃度（MIC）均不高于12.5 mg/mL;Manganyi等（2019）發(fā)現(xiàn)南非傳統(tǒng)藥用植物Sceletium tortuosum L.內生真菌尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）GG 008的發(fā)酵液對蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）ATCC 10876表現(xiàn)出明顯的抑菌活性。目前，藥用植物檀香的提取物也已發(fā)現(xiàn)具有多種藥理活性，Wu等（2011）從檀香紫檀心材分離到對人類中性粒細胞分泌彈性蛋白酶具有抑制活性的新的菲二酮（Pterolinus K）和查爾酮（Pterolinus L）;Bulle等（2016a）發(fā)現(xiàn)檀香紫檀心材的甲醇提取物可通過降低脂質過氧化的速率，增強抗氧化防御機制來減輕小鼠酒精誘發(fā)的肝損傷，顯示出較好的護肝作用;Li等（2018）從檀香紫檀心材提取物中分離到3種新型的倍半萜烯（Canusesnol L、12，15-dihydroxycurcumene和Canusesnol K）;Akhouri等（2020）發(fā)現(xiàn)檀香紫檀種子提取物可抑制由DMBA[7，12-dimethylbenz（α）-anthracene]誘導的乳腺癌在小鼠體內的生長，表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性?！颈狙芯壳腥朦c】近年來，研究者們已陸續(xù)對多種藥用植物內生真菌的次生代謝產(chǎn)物進行了研究，但仍有大量藥用植物的內生真菌資源有待研究和開發(fā)（武艷霜等，2019）。檀香紫檀作為一類資源緊缺的重要藥源植物，關于其內生真菌生物多樣性及活性物質的研究尚無文獻報道?！緮M解決的關鍵問題】采用組織分離法從檀香紫檀的根、莖和葉等部位分離內生真菌，結合形態(tài)學和基于ITS-rDNA序列分析方法對內生真菌進行鑒定，闡明檀香紫檀各部位內生真菌的類群結構和生物多樣性特征，為檀香紫檀內生真菌藥用資源的挖掘和利用提供前期基礎;同時，通過紙片擴散法和菌絲生長速率法進一步分析檀香紫檀內生真菌發(fā)酵液的抗細菌和抗真菌活性，篩選出具有優(yōu)良抗菌活性的內生真菌菌株，為抗菌活性物質提供資源庫，也為解決檀香紫檀資源緊缺、充分利用其藥用資源供新思路。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

1. 1. 1 供試藥用植物 供試3株檀香紫檀（Pterocarpus santanilus Linn. f.）2年生，株高約0.5 m、樹干直徑約2 cm，于2019年7月采自廣東藥科大學中藥園（東經(jīng)113°24′31.8″，北緯23°03′31.9″）。3株檀香紫檀用無菌袋包裝，4 ℃低溫保存于廣東藥科大學病原生物學與免疫學系研究室。用無菌剪刀從檀香紫檀剪出450塊大小均一的植物組織用于分離內生真菌，其中根部組織138塊、莖部組織96塊、葉部組織216塊。

1. 1. 2 供試病原菌 供試細菌：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC26003、大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC44102、痢疾桿菌（Shigella dysenteriae）CMCC51252、傷寒沙門氏菌（Salmone-lla typhimurium）CMCC50115;供試真菌：白色念珠菌（C. albicans）ATCC10231、 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC98003。以上菌株均由廣東藥科大學病原生物學與免疫學研究室提供。

1. 1. 3 供試試劑 營養(yǎng)瓊脂（NA）和營養(yǎng)肉湯（NB）培養(yǎng)基，馬鈴薯葡萄糖固體（PDA）和液體（PDB）培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）;真菌DNA提取試劑盒（廣州美基生物科技有限公司），PCR預混液（含Taq DNA聚合酶）、引物（ITS1F：5'-CT TGGTCATTTAGAGAAGTAA-3'，ITS4：5'-TCCTCC GCTTATTGATATGC-3'）和DNA Marker[生工生物工程（上海）股份有限公司]。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 內生真菌的分離與純化 檀香紫檀內生真菌分離和純化參考Cao等（2002）的方法。

1. 2. 2 內生真菌鑒定 真菌用載玻片培養(yǎng)法（Cao et al.，2002）培養(yǎng)后，光學顯微鏡下對其菌絲、孢子和子實體結構進行觀察，分類鑒定依據(jù)《真菌鑒定手冊》（魏景超，1979）。內生真菌的分子鑒定參考Deng等（2014）的方法進行，具體步驟：使用真菌DNA提取試劑盒抽提內生真菌總DNA，利用引物ITS1F和ITS4 PCR擴增其內轉錄間隔區(qū)序列（Internal transcribed spacer，ITS）。PCR反應體系25.0 μL： 2×Pro Taq Master Mix（dye plus）12.5 μL，1.0 μmol/L正、反向引物各0.5 μL，DNA模板1.0 μL，ddH2O補足至25.0 μL。擴增程序：94 ℃預變性5 min;94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 min，72 ℃ 90 s，進行30個循環(huán);72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司測序。ITS-rDNA序列的測序結果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）比對。選取與高相似性序列同屬不同種的模式菌株序列作為參考序列，并選取與待測菌株親緣關系適中的同科不同屬序列作為外類群，利用MEGA 7.0采用鄰接法構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹。

1. 2. 3 內生真菌抗菌活性篩選 從分離獲得的內生真菌中挑選不同菌屬的代表性菌株用于抗菌活性篩選。在含100 mL PDB液體培養(yǎng)基的300 mL錐形瓶中接入活化好的內生真菌，28 ℃、160 r/min液體發(fā)酵5～7 d。發(fā)酵液先經(jīng)8層滅菌紗布過濾收集，再12000 r/min離心5 min冷凍離心，上清液用0.22 ?m微孔濾膜過濾，得到的無菌發(fā)酵液于4 ℃保存?zhèn)溆?。檀香紫檀內生真菌發(fā)酵液抗菌活性（細菌和白色念珠菌）檢查采用紙片擴散法（張麗等，2019）;參考Li等（2018）采用菌絲生長抑制法分析內生真菌對黑曲霉的抑制效果。

1. 3 統(tǒng)計分析

檀香紫檀內生真菌的定殖率（CR）、分離率（IF）、相對分離頻率（RF）、Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H'）、均勻度指數(shù)（E）和相似性指數(shù)（Cs）參考劉軍等（2018）的方法進行計算和分析。檀香紫檀根、莖和葉的定殖率、分離率和多樣性指數(shù)比較采用Duncans多重比較法進行分析。

2 結果與分析

2. 1 檀香紫檀內生真菌分離率和定殖率分析

從450塊檀香紫檀組織中共分離到337株內生真菌，其中來自葉172株、莖66株、根99株（表1） 。檀香紫檀內生真菌總分離率和定殖率均為74.89%;內生真菌在檀香紫檀各部位的定殖率和分離率排序為葉（79.63%和79.63%）>根（71.74%和71.74%）>莖（68.75%和68.75%），各部位內生真菌的定殖率與分離率變化規(guī)律相同。

2. 2 檀香紫檀內生真菌的類群組成分析

結合形態(tài)學和ITS-rDNA序列分析對337株內生真菌進行鑒定，結果（表2）表明，337株內生真菌隸屬于15個屬，優(yōu)勢屬為青霉屬（Penicillium，占40.95%）和炭疽屬（Collectorichum，占18.40%）。檀香紫檀各部位的內生真菌類群分布存在較大差異，其中，根部共分離到9個屬的內生真菌，木霉屬（Trichoderma，占28.28%）為優(yōu)勢類群;莖部和葉部各分離到10個屬和6個屬的內生真菌，優(yōu)勢類群均為青霉屬，分別占莖部和葉部內生真菌數(shù)的46.97%和52.91%。在檀香紫檀分離到的15個屬中，根、莖和葉3個部位均存在炭疽屬、間座殼屬（Diaporthe）、青霉屬和擬莖點霉屬（Phomopsis）4個屬;木霉屬分布在根和莖2個部位，鏈格孢屬（Alternaria）分布在莖和葉2個部位;Barssia、鐮孢霉屬（Fusarium）、Gliocladiopsis和毛色二孢屬（Lasiodiplodia）4個屬只分布在根部，殼多孢屬（Stagonospora）、擬青霉屬（Purpureocillium）、擬盾殼霉屬（Paraconiothyrium）和Setophaeosphaeria 4個屬只分布在莖部，而曲霉屬（Aspergillus）只分布在葉部。

2. 3 檀香紫檀不同部位內生真菌多樣性和相似性分析

檀香紫檀內生真菌總體生物多樣性指數(shù)為1.90，各部位內生真菌多樣性指數(shù)依次為葉（1.02）>根（0.93）>莖（0.64），各部位內生真菌多樣性指數(shù)差異顯著（P<0.05，下同）;各部位內生真菌均勻度指數(shù)依次為葉（0.57）>根（0.42）>莖（0.28），各部位內生真菌均勻度指數(shù)差異顯著（表3）。

根據(jù)Jaccard相似性系數(shù)原理，當相似性指數(shù)介于0.00～0.25時為極不相似，0.25～0.50為中等不相似，0.50～0.75為中等程度相似，0.75～1.00為極為相似。從表3可看出，莖與葉、根與莖和根與葉的內生真菌類群結構均為中等程度相似，相似性指數(shù)分別為0.63、0.53和0.53。

2. 4 檀香紫檀內生真菌對病原細菌和病原真菌的抑菌活性

從337株內生真菌中挑選不同菌屬的45株代表性菌株進行抗菌活性測定。結果（表4）顯示，有16株（占35.56%）內生真菌對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和痢疾桿菌4種測試細菌具有抑菌活性，36株（占80.00%）內生真菌對白色念珠菌和黑曲霉2種測試真菌具有抑菌活性，有15株（占33.33%）內生真菌對6種測試病原菌表現(xiàn)出抑制活性，分別為L2（青霉菌Penicillium sp.）、L3（炭疽菌Collectorichum sp.）、L6（鏈格孢菌Alternaria sp.）、L9（炭疽菌Collectorichum sp.）、L10（炭疽菌Collectorichum sp.）、L11（曲霉菌Aspergillus sp.）、L14（曲霉菌Aspergillus sp.）、S5（炭疽菌Collectorichum sp.）、R2（Gliocla-diopsis sp.）、R3（炭疽菌Collectorichum sp.）、R9（間座殼菌Diaporthe sp.）、R10（炭疽菌Collectorichum sp.）、R11（炭疽菌Collectorichum sp.）、R12（間座殼菌Diaporthe sp.）和R17（毛色二孢菌Lasiodiplodia sp.），其中菌株L9的抑菌能力尤為突出，對黑曲霉的抑制活性達67.35%，對其余5種測試菌的抑菌直徑均大于10 mm。根據(jù)BLAST結果可知，菌株L9的ITS與GenBank中C. vietnamense strain CBS 125478（MH863700.1）的同源性為99.23%。基于真菌ITS-rDNA序列構建菌株L9系統(tǒng)發(fā)育進化樹，結果（圖1）顯示，菌株L9與越南炭疽菌（C. vietname-nse）中的2個序列[C. vietnamense strain CBS 125478（MH863700.1）和C. vietnamense strain CBS 125477（MH863699.1）]的親緣關系相對較近，構成一個支持度為83%的聚類分支，暫將其鑒定為炭疽菌屬真菌。

3 討論

本研究從檀香紫檀不同部位組織中分離獲得15屬共337株內生真菌，表明檀香紫檀分布著較豐富的內生真菌資源。檀香紫檀內生真菌的總定殖率、總分離率和總多樣性指數(shù)分別為74.89%、74.89%和1.90，與其他研究中報道的熱帶、亞熱帶植物的分離水平較接近（臧威等，2014），但高于多數(shù)已報道的北方溫帶藥用植物（朱軍等，2015），可能由于相對于北方溫帶地區(qū)，熱帶和亞熱帶地區(qū)環(huán)境濕度大和降水多，從而更有利于內生真菌的侵染和定殖（Porras-Alfaro and Bayman，2011;臧威等，2014）。與朱軍等（2015）的研究結果類似，本研究也發(fā)現(xiàn)檀香紫檀根部內生真菌的生物多樣性指數(shù)高于莖部。土壤微生物是植物內生真菌的主要來源，其生物多樣性高，更容易通過根部傷口或開口侵染進入植物根部，這可能是根部內生真菌生物多樣性相對較高的重要原因（Torsvik and ?vre?s，2002;Compant et al.，2016;Fesel and Zuccaro，2016）。從檀香紫檀中共分離到15個屬的內生真菌，木霉屬為根部的優(yōu)勢類群，莖部和葉部的優(yōu)勢類群均為青霉屬。在15個屬的內生真菌中，有9個屬只在根、莖、葉中的一個部位有分布，其中，Barssia、鐮孢霉屬、Gliocladiopsis和毛色二孢屬只分布在根部，殼多孢屬、擬青霉屬、擬盾殼霉屬和Setophaeosphaeria只分布在莖部，而曲霉屬僅在葉部有分布，表明檀香紫檀內生真菌類群分布具有一定的器官與組織專一性，可能是由檀香紫檀體內不同部位的微環(huán)境差異所造成（Comby et al.，2016）。此外，Barssia、Setophaeosphaeria和殼多孢屬的內生真菌在檀香紫檀有特異性分布，在其他藥用植物中尚未分離到，可能與檀香紫檀體內獨特的微環(huán)境有關（王景儀等，2020）。

藥用植物內生真菌已成為新藥開發(fā)的一個重要資源庫，其不僅可合成與藥用植物相同或相似的活性物質，而且還蘊含大量的新結構和新活性的次生代謝產(chǎn)物（Ancheeva et al.，2020）。目前多種抗腫瘤、抗病毒和抗菌活性物質已在藥用植物內生真菌中分離到（Chen et al.，2016）。檀香紫檀樹皮與葉的提取物被證實對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌等多種病原細菌及白色念珠菌、新型隱球菌、光滑念珠菌等酵母菌具有良好的抑制活性（Zamare et al.，2013;Donga et al.，2017），研究者還在檀香紫檀多個部位的提取物分離到多種新結構的活性物質（Krishnaveni and Srinivasa Rao，2000;Kesari et al.，2004;Li et al.，2018），但目前未見關于檀香紫檀內生真菌次生代謝產(chǎn)物研究的相關報道。本研究對檀香紫檀中45株代表性內生真菌發(fā)酵液的抗菌活性測定發(fā)現(xiàn)，有16株內生真菌對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和痢疾桿菌等4種測試細菌具有抑菌活性，36株內生真菌對白色念珠菌和黑曲霉2種測試真菌具有抑菌活性，15株內生真菌對6種測試病原菌均表現(xiàn)出抑制活性，表明檀香紫檀存在較高比例的具有抗菌活性的內生真菌菌株，為全面挖掘檀香紫檀的抗菌活性物質提供了菌株資源，同時也為解決檀香紫檀資源緊缺、科學利用其藥用資源供了新思路，但其具體的活性成分的化學結構及生理功能有待進一步探究。

4 結論

檀香紫檀內生真菌類群分布具有一定的器官組織特異性，物種多樣性較豐富，且蘊含有較高比例的抗細菌和抗真菌活性菌株，可為新型抗菌活性物質的篩選與開發(fā)提供菌株資源。

參考文獻：

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（責任編輯 麻小燕）