過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值變化及免疫球蛋白、血IDO、白介素的相關(guān)性分析

范愛紅 米艷茹 代育中 郭福燕 劉剛

過敏性哮喘是一種變態(tài)反應(yīng)性炎癥性疾病，其臨床特征表現(xiàn)為氣道高反應(yīng)[1]。兒童為過敏性哮喘高發(fā)人群，其患病率約為成人的2倍，多出現(xiàn)反復(fù)性喘息、胸悶氣促等表現(xiàn)，若未得到及時且有效干預(yù)，病情可遷延至成年[2-3]。因此，在疾病早期已確診時，應(yīng)對病情嚴(yán)重程度作出積極且準(zhǔn)確判斷，從而制定出針對性治療方案，以阻斷病情進(jìn)一步發(fā)展。Th17/Treg在多種炎性疾病發(fā)生、發(fā)展等過程中承擔(dān)著重要角色[4]，且有臨床研究表明，Th17/Treg比值與變應(yīng)性鼻炎聯(lián)系緊密[5]。而變應(yīng)性鼻炎與過敏性哮喘存在密切關(guān)聯(lián)性，由此或可猜想在過敏性哮喘病情評估方面，Th17/Treg具有一定預(yù)測價值[6]。臨床上，過敏性哮喘患者血漿中與炎癥反應(yīng)相關(guān)的免疫球蛋白、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase，IDO)、及白介素水平可出現(xiàn)異常[7-8]?；诖?，本研究檢測過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值，分析其與免疫球蛋白、血IDO、白介素之間關(guān)系，對其與過敏性哮喘病情的內(nèi)在關(guān)聯(lián)進(jìn)行判斷，旨在為患兒病情預(yù)測評估提供高效且便捷指標(biāo)。

資料與方法

一、研究對象納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

研究嚴(yán)格遵循《赫爾辛基宣言》中倫理原則，經(jīng)本醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。診斷參照《支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案》(中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組制定)中過敏性哮喘相關(guān)診斷；納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)患患兒家屬同意；②首次確診，并且還未接受過相關(guān)治療；③5歲≤年齡<12歲；④依從性較高，可配合血液樣本獲取。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并較嚴(yán)重先天性疾病，先天性心臟病等；②存在意識功能障礙，或合并精神系統(tǒng)類疾?。虎酆喜⒎窝椎认潞粑栏腥?；④合并自身免疫性疾病；⑤合并其他臟器活動性感染。

二、臨床資料

基于上述標(biāo)準(zhǔn)，擇取2018年10月至2020年3月我院兒科收治的過敏性患兒130例為觀察組；同期選取健康體檢小兒130例為健康對照組。所納入患兒均完成觀察，無中斷、中途退出研究等情況。

三、評價指標(biāo)

① 采集受試對象完整的病史，進(jìn)行體格檢查及皮膚點刺過敏原檢測。② 外周靜脈血檢測：在受試者確定納入為對象時，立即進(jìn)行1次血液采集。首先，進(jìn)行標(biāo)本采集，采集研究對象空腹外周靜脈血3 mL，并以肝素進(jìn)行抗凝，全血以3 000 r/min離心30 min，收集血漿，置于-80 ℃冰箱保存待測。以Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(PBMC)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀(美國BD FACS Canto Ⅱ)檢測Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞，并計算Th17/Treg比值。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定免疫球蛋白IgA、IgM、IgG、IgE水平以及血漿中白介素IL-17A、IL-6、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)細(xì)胞因子水平；應(yīng)用高效色譜液相法(HPLC)測定血IDO活性水平(犬尿氨酸濃度/色氨酸濃度)。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、兩組患兒臨床資料比較

兩組性別、年齡、足月/早產(chǎn)情況、喂養(yǎng)方式、出生時體重及目前體重分布情況、是夠存在食物性過敏原、是否存在吸入性過敏原、是否患過敏性鼻炎、是否患過敏性皮炎、吸煙環(huán)境、家中是否飼養(yǎng)寵物、家中是否種植花草、父母是否有過敏性鼻炎或哮喘史等一般資料比較，均無顯著差異，均不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

表1 兩組臨床基線資料比較[n(%)]

二、兩組實驗室指標(biāo)比較

在Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞及Th17/Treg方面，觀察組Th17細(xì)胞水平、Th17/Treg明顯高于、Treg細(xì)胞水平明顯低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；就IgA、IgM、IgG、IgE等免疫球蛋白指標(biāo)而言，兩組IgA、IgM、IgG比較無顯著差異(P>0.05)，觀察組IgE明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；就IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β、血IDO等血清學(xué)指標(biāo)而言，觀察組IL-17A、IL-6明顯高于，IL-10、TGF-β、血IDO均明顯低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 兩組實驗室指標(biāo)比較

采用Pearson相關(guān)性分析Th17/Treg與IgE、IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β、血IDO的關(guān)系，結(jié)果顯示，IgE、IL-17A、IL-6與Th17/Treg呈顯著正相關(guān)(r=0.834、0.660、0.650，P均<0.05)；IL-10、TGF-β、血IDO與Th17/Treg呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.650、-0.774、-0.816，P均<0.05)(見表3)。應(yīng)用Graghpad Prism進(jìn)行繪圖分析，結(jié)果見圖①～⑥。

表3 Th17/Treg與IgE、IL-17A、IL-10、TGF-β、血IDO的相關(guān)性分析

圖1 Th17/Treg與IgE的相關(guān)性 圖2 Th17/Treg與IL-17A的相關(guān)性 圖3 Th17/Treg與IL-6的相關(guān)性 圖4 Th17/Treg與IL-10的相關(guān)性 圖5 Th17/Treg與TGP-β的相關(guān)性 圖6 Th17/Treg與血IDO的相關(guān)性

討 論

兒童過敏性哮喘在哮喘中所占比例高達(dá)90%以上[9-10]。小兒過敏性支氣管哮喘[11]是一種異質(zhì)性炎癥疾病。該疾病多由T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞等參與其中而引發(fā)，遺傳、免疫、神經(jīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及氣道重構(gòu)、病毒感染等因素均可引發(fā)，其具體作用機(jī)制尚未明確[12-13]?，F(xiàn)階段尚無有效治療方法行對癥治療，所以當(dāng)早期確診時，應(yīng)對病情嚴(yán)重程度作出積極且準(zhǔn)確判斷，從而制定出針對性治療方案，以阻斷病情進(jìn)一步發(fā)展，進(jìn)而改善患兒預(yù)后，但目前尚缺乏行之有效的簡易性指標(biāo)，因此，尋找高效且簡易治療對過敏性哮喘預(yù)測診斷及病情評估具有重要意義。

從過敏性哮喘發(fā)生原因來看，免疫功能為其重要原因之一。而血漿免疫球蛋白含量可代表體液免疫功能水平，其水平改變可在一定程度上反映出患兒機(jī)體免疫功能變化狀況及哮喘整體病情程度。IDO是一種色氨酸分解代謝的限速酶，在感染、妊娠、自身免疫及瘤樣病變中，其具有免疫調(diào)節(jié)及免疫誘導(dǎo)作用；在嗜酸性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及肺上皮細(xì)胞中，IDO也被檢出，由此顯示其參與過敏反應(yīng)中，也具有一定調(diào)節(jié)作用。相較于正常健康個體，過敏癥患者血漿IDO活性明顯更低。研究發(fā)現(xiàn)輕中度持續(xù)成年哮喘患者具有誘導(dǎo)痰低活性IDO表現(xiàn)，但可以吸入糖皮質(zhì)激素方式使其增強(qiáng)，分析其原因在于刺激IL-10產(chǎn)生而介導(dǎo)；且辛伐他汀增強(qiáng)糖皮質(zhì)激 素對Th17/Treg失衡的調(diào)節(jié)作用，是通過上調(diào)IDO及IL-10下調(diào)IL-6、IL-23的表達(dá)而實現(xiàn)[18]。由此可推測IDO在Th17/Treg分化失衡機(jī)制中承擔(dān)著重要角色，或與IL-6、IL-10等細(xì)胞效應(yīng)因子緊密相關(guān)。本研究中，結(jié)果顯示，就IgA、IgM、IgG、IgE等免疫球蛋白指標(biāo)而言，兩組IgA、IgM、IgG比較無顯著差異，觀察組IgE明顯高于對照組；觀察組IL-17A、IL-6明顯高于，IL-10、TGF-β、血IDO均明顯低于對照組。

綜上所述，對于過敏性哮喘患兒，其外周血Th17/Treg比值多存在異常增高情況，Th17/Treg比值與IgE、IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β及血IDO密切相關(guān)，參與過敏性哮喘發(fā)生及發(fā)展過程，或可作為重要指標(biāo)用在過敏性哮喘患兒病情診斷及評估。本研究不足在于樣本量較少，且因檢查需配合問題而未將5歲以下患兒納入研究，故而研究在受試對象方面存在一定局限性，有待進(jìn)一步開展大樣本深入探討與研究。