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    女貞子的心臟抗氧化作用

    2021-06-29 09:14:56梁雪蘭張志強(qiáng)江洪波
    科技風(fēng) 2021年12期

    梁雪蘭 張志強(qiáng) 江洪波

    摘要:目的:研究女貞子提取物對(duì)不同器官的抗氧化活性差異。方法:將女貞子用超聲提取后,用D101大孔樹脂分離為不同部位,進(jìn)行小鼠體內(nèi)抗氧化活性測(cè)試。用試劑盒檢測(cè)小鼠血清及心、肝、腎組織中(N1和對(duì)照組)MDA含量、SOD和GSHpx酶活性。結(jié)果:女貞子提取物及分離部位可顯著降低小鼠血清MDA含量,提高小鼠的血清及組織SOD和GSHpx活力。結(jié)論:女貞子提取物均具有體內(nèi)抗氧化活性,且對(duì)心肌有較高的選擇性。

    關(guān)鍵詞:女貞子;抗氧化;D101大孔樹脂;水洗部位

    補(bǔ)陰中藥女貞子,具有扶正固本的功效,分布非常廣泛,資源較為豐富,冬季女貞樹(Ligustrum lucidum Ait.)果實(shí)成熟,變?yōu)闉鹾跁r(shí)采收,女貞為木犀科植物女貞的干燥成熟果?!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載將其列之為上品,味苦平,主補(bǔ)中,安五臟,養(yǎng)精神,除百病,具有較為廣泛的功效?,F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究證明,女貞子其化學(xué)成分主要有三萜類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、多酚類、多糖、氨基酸、色素等多類化合物。女貞子與許多慢性疾病如骨質(zhì)疏松、高血壓、高血糖、高血脂、胃腸消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、衰老等有關(guān),這些疾病均與人體內(nèi)累積過(guò)多的氧自由基存在某種關(guān)系[1]。許多學(xué)者研究表明女貞子提取物,及其含有的黃酮、環(huán)烯醚萜苷、酚類等化學(xué)成分有較強(qiáng)的清除自由基及抗氧化作用[2,3]。本文用女貞子的提取物,系統(tǒng)萃取分離后,用不同萃取部位制成混懸液或溶液對(duì)小鼠灌胃喂養(yǎng),對(duì)照組小鼠灌胃純凈水,以此來(lái)研究女貞子提取物,提取物的不同萃取部位,喂養(yǎng)組小鼠與正常對(duì)照組小鼠血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活力差異、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)及丙二醛(MDA)含量差異。用來(lái)判斷女貞子提取物及不同萃取部位體內(nèi)是否具有抗氧化作用,為女貞子的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)和支持,期望在抗氧化和抗衰老方面能做出相關(guān)產(chǎn)品。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 材料

    女貞子采自四川綿陽(yáng)市涪城區(qū)四川醫(yī)專南山校區(qū)校園內(nèi)(樣品存于四川醫(yī)專北校區(qū)藥化實(shí)驗(yàn)室內(nèi),編號(hào)NZ2017),經(jīng)鄭雷博士鑒定為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。

    1.2 儀器設(shè)備

    JP100S超聲波提取儀(深圳潔盟設(shè)備有限公司);TU1900型雙光束紫外分光光度計(jì)(北京普析有限責(zé)任公司)。

    1.3 試劑

    D101大孔樹脂;DPPH(2,2二苯基1苦基肼,sigma);谷胱甘肽過(guò)氧化物酶試劑盒、丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所);其余試劑為分析純。

    1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    普通級(jí)昆明小白鼠,雌雄各半,11月齡,合格證編號(hào):SYXK(川)2017113;小白鼠普通喂養(yǎng)飼料。

    2 方法

    2.1 女貞子測(cè)試樣品的準(zhǔn)備

    取0.8千克女貞子,料液比1∶5,置于5000mL三角瓶中,用無(wú)水乙醇浸泡48小時(shí)候后,用超生提取器,提取液溫度30℃,提取3次,每次0.5h。合并濾液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,抽干,得147.4g浸膏,編號(hào)N1,冰箱保存?zhèn)溆谩H1約100g,攪拌分散于1000ml水中,上樣D101大孔樹脂柱,首先用蒸餾水洗脫至無(wú)色,出去高極性小分子單糖類等化合物,再用50%乙醇水溶液繼續(xù)洗脫,直至洗脫液變?yōu)闊o(wú)色。將各洗脫部分減壓濃縮,得女貞子水溶性部分浸膏(N2)54.5g和女貞子50%乙醇水溶液部浸膏(N3)39.8g。

    2.2 體內(nèi)抗氧化作用研究

    用小白鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)喂養(yǎng)給藥,給藥四周后,通過(guò)試劑盒檢測(cè)小鼠血清中的MDA及GSHPx含量和及SOD活力,評(píng)價(jià)女貞子提取物及各部位在小白鼠體內(nèi)的抗氧化作用。

    2.2.1 給藥方法及取樣方法

    將小鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后,隨機(jī)分成4組:對(duì)照組,女貞子粗提取物N1組,女貞子水溶性N2組和女貞子50%乙醇水溶液部N3組,雌雄各半,每組10只小鼠。普通對(duì)照組的小鼠采用0.9%生理鹽水灌胃,N1組,N2組和N3組分別灌胃女貞子提取物混懸液、女貞子水洗部溶液,女貞子50%乙醇水溶液洗部混懸液,灌胃給藥量為400mg/kg,一共給藥4周。實(shí)驗(yàn)期間飼普通飼料喂養(yǎng),自由攝食和飲水。實(shí)驗(yàn)第28天小鼠空腹過(guò)夜,稱重后眼眶取血,離心分離血清(4℃,3000r/min,10min),并于-20℃保存待測(cè)。N1組和對(duì)照組小鼠取血后,頸椎脫臼處死,取心、肝、腎,以冰生理鹽水洗去浮血,濾紙吸干,稱重。再用預(yù)冷的PBS緩沖液(pH74,0.2mol/L)做勻漿介質(zhì)在冰浴下,將各器官組織進(jìn)行機(jī)械勻漿(1.0g濕組織加9.0ml緩沖液),后于4℃,離心10min(6000r/min),分離出上清液,-20℃保存待測(cè)。

    2.2.2 檢測(cè)方法

    GSHPx含量、SOD活力及MDA含量測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明書完成。

    2.2.3 數(shù)據(jù)處理

    最終的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s形式表示,采用t檢驗(yàn),進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),SPSS軟件統(tǒng)計(jì)、分析和比較。

    3 結(jié)果(體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn))

    3.1 血清中GSHPx、MDA含量及SOD活力比較

    女貞子粗提取物(N1),提取物水溶性部位(N2)和提取物50%醇部位(N3)喂養(yǎng)組小鼠血漿內(nèi)的GSHPx活性、SOD含量均高,而MDA水平相比于對(duì)照組降低(p<0.01)。且N2組小鼠血漿內(nèi)的SOD,GSHPx活性(含量)比N3組及N1組高,且MDA水平最低。N1,N2和N3均有體內(nèi)抗氧化活性,且N2體內(nèi)抗氧化活性更佳。

    3.2 組織中SOD活力,MDA及GSHPx含量(N1組)

    由表2可知,女貞子提取物(N1)組小鼠的心肌和腎SOD活力均高于正常對(duì)照組,特別是心肌SOD活力顯著高于正常對(duì)照組,而肝組織中的SOD活力有所下降。N1組小鼠肝、腎的MDA含量分別低于和高于對(duì)照組,但變化不大,而心肌的MDA含量顯著低于對(duì)照組。N1組小鼠的肝、腎組織GSHpx活力值雖高于正常對(duì)照組,可是不是太明顯,但心肌的GSHpx活力比對(duì)照組較為明顯升高,顯示N1對(duì)心肌有一定的靶向性,GSHpx值的升高最為顯著。

    4 討論

    女貞子的乙醇提取物(N1)和,富集得到的水洗脫部位浸膏(N2)和50%乙醇洗脫部位浸膏(N3)清除DPPH自由基的能力都比較強(qiáng),具有良好的自由基清除能力。經(jīng)D101大孔樹脂分離的水洗脫的N2部位主要含有水溶性的成分,如花青素、多酚類、環(huán)烯醚萜苷類等化學(xué)成分,清除DPPH·自由基的能力最強(qiáng),參考文獻(xiàn)強(qiáng)于維生素C。N3主要含黃酮類成分,黃酮類的清除自由基的能力也較強(qiáng),故N3比女貞子粗提取原液清除自由基能力強(qiáng)。體外清除自由基的能力強(qiáng)弱分別為:N2>N3>N1。

    超氧化物歧化酶SOD是一種重要的金屬酶,存在于各種生物體內(nèi)的,它能催化生物氧化,使產(chǎn)生的O2轉(zhuǎn)變成H2O2和H2,減少對(duì)細(xì)胞的損傷,起到保護(hù)細(xì)胞的作用[5]。表1數(shù)據(jù)表明,小鼠的血清SOD水平高低為:N2組>N3組>N1組>對(duì)照組。血清GSHPx活力高低為:N2>N3>N1>對(duì)照組。丙二醛MDA為脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物,MDA水平的高低,間接反映生物體內(nèi)自由基生成與清除的平衡狀態(tài)。MDA含量高低為:對(duì)照組>N1>N3>N2。

    喂食女貞子(N2)組小鼠血清中GSHPx含量,SOD水平最高,MDA含量最低,表明女貞子中的化合物有抗氧化作用。與對(duì)照組對(duì)比,GSHPx含量,SOD水平分別增加71%和15%,MDA含量降低17%。這表明各女貞子組均有提高體內(nèi)抗氧化能力的作用,但主要含有環(huán)烯醚萜苷類和花青素類等的N2組在體內(nèi)抗氧化能力提高最強(qiáng)。在某種程度上展示了體外清除DPPH·自由基能力與體內(nèi)抗氧化能力之間有一定的相關(guān)性。

    喂食女貞子粗提物N1組小鼠的心肌中的SOD活力顯著高于對(duì)照組,MDA含量顯著低于對(duì)照組,GSHpx活力值高出正常對(duì)照組較為明顯,而肝腎組織中SOD,MDA,GSHpx指標(biāo)變化不是太明顯或略有下降。顯示了N1的抗氧化作用對(duì)心肌最強(qiáng),對(duì)由于各種原因?qū)е碌男呐K自由基增多,都可能有較好的清除作用,從而起到保護(hù)心肌的作用。

    女貞子在四川地區(qū)冬春季為鳥兒主要食物,且在我國(guó)分布廣泛,資源豐富,是一種比較理想的天然來(lái)源的抗氧化資源。因此對(duì)女貞子進(jìn)一步研究,并將其開發(fā)成為天然抗氧化產(chǎn)品有一定的可行性。女貞子產(chǎn)品可能對(duì)人體保障機(jī)體健康、預(yù)防疾病,特別是與自由基過(guò)多的心臟相關(guān)疾病有重要意義。

    參考文獻(xiàn):

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    [2]邊曉麗,王曉理,李金娜,等.6種抗衰老中藥清除氧自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用的測(cè)定[J].西北藥學(xué)雜志,2001,16(2):6869.

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    [5]宮璀璀,鄭玉霞,鄭乃剛,等.金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2006,23(5):584585.

    基金項(xiàng)目:四川中醫(yī)藥高等??茖W(xué)校項(xiàng)目基金:女貞子抗衰老研究(17ZRYB03)

    作者簡(jiǎn)介:梁雪蘭(1969—),男,漢族,四川南充人,本科,高級(jí)職稱,研究方向:中藥學(xué)應(yīng)用。

    *通迅作者:江洪波,研究方向:中藥活性成分研究。

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