MAGEA1通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)惡性黑色素瘤的轉(zhuǎn)移

許媛媛，王 晨，賀 贊，王 冬，楊 瓊，李永君，郝永紅，胡輝瑩，方向東，趙 華

1 解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心 皮膚科，北京 100853；2 中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所 基因組科學(xué)與信息重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101；3 南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院(白云院區(qū)) 皮膚科，廣東廣州 510510

惡性黑色素瘤是來源于黑色素細(xì)胞的惡性腫瘤，多發(fā)生于皮膚，發(fā)病率在皮膚惡性腫瘤中占第3位，是皮膚惡性程度最高的腫瘤。近年來，惡性黑色素瘤的發(fā)病率持續(xù)上升，全球每年約有300000例新病例和60000例死亡病例[1]。早期和原位黑色素瘤，立即手術(shù)切除是治療的首選方法，預(yù)后良好。轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤雖然只占所有惡性腫瘤的1%，但卻是最致命的[2]，已成為危害人類健康的嚴(yán)重疾病之一。

黑色素瘤相關(guān)抗原家族A1(melanoma associated antigen family A1，MAGEA1)是MAGE-A基因亞家族的成員，又名癌癥-種系(cancer-germline，CG)基因或腫瘤-睪丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)基因。MAGEA1可在多種惡性腫瘤中表達(dá)，如黑色素瘤、子宮內(nèi)膜癌、喉鱗狀細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌和胃癌等[3-7]，其致病機(jī)制包括參與泛素化過程調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡[8]、啟動(dòng)甲基化影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展等[9]。我們前期的研究已經(jīng)證實(shí)MAGEA1可以通過激活c-Jun促進(jìn)黑色素瘤的遷移和侵襲[10]。為進(jìn)一步研究MAGEA1調(diào)控黑色素瘤轉(zhuǎn)移惡化進(jìn)程的分子機(jī)制，本文通過對(duì)公共數(shù)據(jù)中原位和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的MAGEA1表達(dá)量進(jìn)行差異分析，將過表達(dá)MAGEA1的A375和對(duì)照細(xì)胞系轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)富集至KEGG信號(hào)通路中，探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在黑色素瘤的惡變過程中發(fā)揮的重要作用，并通過MAGEA1差異表達(dá)的A375與A2058細(xì)胞系進(jìn)行體外驗(yàn)證，為進(jìn)一步研究黑色素瘤的惡變機(jī)制提供了一定的理論依據(jù)。

材料及方法

1主要試劑與材料 A375與A2058細(xì)胞系購(gòu)買自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫；Dulbecco’s modified Eagles’s medium (DMEM)購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；胎牛血清(FBS)購(gòu)自澳大利亞AusGeneX公司；Trypsin0.25 EDTA(胰酶)、青霉素/鏈霉素、Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Life technologies公司；Dimethyl sulfoxide (DMSO)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；RIPA強(qiáng)效裂解液、免疫染色強(qiáng)力通透液購(gòu)自碧云天公司；BCA Protein Assay Kit BCA法蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司；TCF報(bào)告質(zhì)粒試劑盒(TOP flash,FOP flash)購(gòu)自德國(guó)MERCK公司；雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司；ProLong(R) Gold Antifade Reagent with DAPI、p-GSK-3β(5558)、E-cadherin(3195s) 抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；MAGE-A1(sc-71539)、c-Jun(sc-74543)、p-c-Jun(sc-822)、LamiA(sc-20680) 抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；β-catenin(YM3403)、c-myc(YT0991)、GSK3β(YM3633) 抗體購(gòu)自美國(guó)ImmunoWay公司；GAPDH(ab128915)、Vimetin(ab8069)、Twist1(ab50887) 抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；山羊抗小鼠和抗兔多克隆抗體(ZB-2305,ZB-2301)購(gòu)自ZSGB-Bio公司；山羊抗小鼠和抗兔熒光抗體、pcDNA3-Neo-EGFP質(zhì)粒、Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；寬范圍彩色預(yù)染蛋白質(zhì)Marker(11~245kU)購(gòu)自TIANGEN公司；牛血清白蛋白V(BSA)購(gòu)自瑞士Roche公司；Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit(反轉(zhuǎn)錄試劑盒)購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific?公司；SYBR?Fast通用型購(gòu)自美國(guó)KAPA公司；TCF7 siRNA (Human)、siRNA Negative Control購(gòu)自Cohesion公司；基質(zhì)膠Matrigel Matrix購(gòu)自美國(guó)Biosciences公司；蘇木素-伊紅染色液(H&E)：珠海貝索公司；通用SP試劑盒(小鼠/兔鏈霉卵白素-生物素法檢測(cè)系統(tǒng))(SP-9000)、檸檬酸鹽修復(fù)液pH 6.0、DAB kit、中性樹膠購(gòu)自北京中杉金橋公司。

2生物信息學(xué)分析 從TCGA公共數(shù)據(jù)中原位和轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者RNA-Seq數(shù)據(jù)，提取MAGA1表達(dá)數(shù)據(jù)(FPKM)，通過Graphpad軟件繪制原位和轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者FPKM散點(diǎn)圖，并進(jìn)行t檢驗(yàn)。MAGEA1過表達(dá)A375(A375-MAGEA1)和對(duì)照細(xì)胞系(A373-con)的RNA-seq數(shù)據(jù)，使用Limma(R語言包)進(jìn)行差異表達(dá)分析，并將結(jié)果進(jìn)行KEGG富集分析(在線分析網(wǎng)站www.genome.jp/kegg)。

3克隆與質(zhì)粒構(gòu)建 聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)從正常人血液擴(kuò)增出MAGEA1蛋白的cDNA，并將其克隆到pcDNA3-Neo-EGFP質(zhì)粒中。將針對(duì)MAGEA1的短發(fā)夾狀RNA(short hairpin RNA，ShRNA)克隆到pRNATU6.1-Neo-EGFP質(zhì)粒中，構(gòu)建成載體pRNATU6.1-Neo-EGFPshMAGEA1。表1提供了shRNA序列。為了避免shRNA可能的脫靶，我們?cè)O(shè)計(jì)了siRNA來下調(diào)黑色素瘤細(xì)胞系中MAGEA1的表達(dá)。表1提供了兩個(gè)最有效的siRNA(siRNA3和siRNA4)的序列。所有構(gòu)建的載體均經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和標(biāo)準(zhǔn)DNA測(cè)序驗(yàn)證。

表1 shRNA與引物信息Tab. 1 shRNA and primers sequences

4細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 A375細(xì)胞株來源于皮膚原位黑色素瘤組織，A2058細(xì)胞株來源于惡性黑色素瘤患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。對(duì)照細(xì)胞株(A375-con，A2058-con)和過表達(dá)MAGEA1穩(wěn)定細(xì)胞株(A375-MAGEA1，A2058-MAGEA1)，敲低MAGEA1穩(wěn)定細(xì)胞株(A375-shMAGEA1-1，A375-shMAGEA1-2，A2058-shMAGEA1-1，A2058-shMAGEA1-2，A375-MAGEA1-NC，A2058-MAGEA1-NC，A375-MAGEA1-siTCF7，A2058-MAGEA1-siTCF7)和陰性對(duì)照細(xì)胞株(A375-scramble，A2058-scramble)均通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染構(gòu)建。用G418篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞2周，分離培養(yǎng)單個(gè)集落。所有細(xì)胞均用90% dMEM、10% FBS和0.1mg/mL雙抗配制的培養(yǎng)液培養(yǎng)，置于37℃，5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄報(bào)告分析 將105個(gè)細(xì)胞(A375-con，A2058-con，A375-MAGEA1，A2058-MAGEA1，A375-scramble，A2058-scramble，A375-shMAGEA1-1，A375-shMAGEA1-2，A2058-shMA GEA1-1，A2058-shMAGEA1-2)接種于48孔板中，加入250μL無雙抗培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，細(xì)胞密度達(dá)90%～95%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在TopFlash或FopFlash轉(zhuǎn)染后36～48 h，使用雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)并記錄結(jié)果。

6蛋白質(zhì)的提取和檢測(cè) 收取細(xì)胞(A375-con，A2058-con，A375-MAGEA1，A2058-MAGEA1)，加入適量4% SDS吹打混勻，于95℃金屬水浴鍋煮沸30min；4℃，13500r/min，離心5min；將上清移至新的離心管得到總蛋白。細(xì)胞中核漿蛋白分離：細(xì)胞經(jīng)過處理后，4℃，1000r/min離心5min，棄上清，加入適量的裂解液A(20mmol/L HEPES，pH7.0，10mmol/L KCl，2mmol/L MgCl2，0.5% Nonidet P-40，2mmol/L Na3VO4，2mmol/L NaF，2mmol/Lβ-甘油磷酸納，1% Protease inhibitor cocktail)，勻速緩慢吹打多次。4℃，15000 g離心5min。將上清組分轉(zhuǎn)移到新的離心管中，4℃，15000 g離心5min，得到的上清即為細(xì)胞質(zhì)蛋白組分。用裂解液A清洗沉淀2次，4℃，15000 g離心5min，得到的沉淀即為細(xì)胞核蛋白組分。各加適量的強(qiáng)效裂解液超聲破碎細(xì)胞核，能量和時(shí)間：15%能量，開2s，停4s共超聲10s。離心機(jī)4℃，15000 g離心5min，將上清溶液轉(zhuǎn)移至新的管中，即為提取的細(xì)胞核蛋白組分。用BCA法檢測(cè)蛋白濃度，最后使用Western blot檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路與EMT相關(guān)蛋白表達(dá)差異。

7免疫熒光染色 將圓形蓋玻片浸泡于濃鹽酸中2 h，室溫干燥后置于75%乙醇中浸泡30min。烘干后進(jìn)行細(xì)胞(A375-con，A2058-con，A375-MAGEA1，A2058-MAGEA1)爬片，接種適當(dāng)密度細(xì)胞，培養(yǎng)24 h后用4%多聚甲醛進(jìn)行細(xì)胞固定30min。透化液于室溫下處理15min后，使用5% BSA/PBS溶液封閉30min。室溫下一抗孵育2 h，室溫下二抗避光孵育1 h，PBS漂洗后進(jìn)行封片，切片用激光共聚焦顯微鏡觀察并采集圖像保存。

8實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析 使用Trizol裂解細(xì)胞(A375-MAGEA1-NC，A2058-MAGEA1-NC，A375-MAGEA1-siTCF7，A2058-MAGEA1-siTCF7)，加入氯仿和異丙醇提取細(xì)胞總RNA并進(jìn)行濃度測(cè)定和質(zhì)量檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA(Thermo Scientific公司試劑盒)。采用CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行基因表達(dá)分析(所有基因的引物序列見表2)。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列Tab. 2 Sequences of real-time quantitative PCR primers

9細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn) 接種細(xì)胞(A375-MAGEA1-NC，A2058-MAGEA1-NC，A375-MAGE A1-siTCF7，A2058-MAGEA1-siTCF7)前1 d，將人工基質(zhì)膠與預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基(無血清和雙抗)按照1∶7的比例以總量40 μL鋪在Transwell小室的上室面進(jìn)行預(yù)處理(遷移實(shí)驗(yàn)不需要此步)，接種細(xì)胞數(shù)為2×104(遷移實(shí)驗(yàn))和2×105(侵襲實(shí)驗(yàn))，細(xì)胞培養(yǎng)24 h (遷移實(shí)驗(yàn))和48 h(侵襲實(shí)驗(yàn))后進(jìn)行固定和HE染色，最后將小室置于顯微鏡下觀察、拍照并計(jì)數(shù)。

10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0軟件，以上實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，多組比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1MAGEA1可能會(huì)影響Wnt/β-catenin信號(hào)通路進(jìn)而引起黑色素瘤的轉(zhuǎn)移 通過分析TCGA公共數(shù)據(jù)中原位和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者M(jìn)AGEA1的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，MAGEA1在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者(n=359)的MAGEA1 RNA表達(dá)水平遠(yuǎn)高于原位黑色素瘤患者(n=102)(圖1A)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，表明MAGEA1可能與黑色素瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。將MAGEA1過表達(dá)A375(A375-MAGEA1)和對(duì)照細(xì)胞系(A373-con)的RNA-seq數(shù)據(jù)，進(jìn)行KEGG信號(hào)通路富集分析發(fā)現(xiàn)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路中FRP的表達(dá)顯著下調(diào)，GSK3β表達(dá)輕度下調(diào)，c-myc、fra-1和cycD表達(dá)顯著上調(diào)，TCF/LEF和c-Jun表達(dá)輕度上調(diào)(圖1B)。因此，推測(cè)MAGEA1可能通過影響Wnt/β-catenin信號(hào)通路進(jìn)而引起黑色素瘤的轉(zhuǎn)移。

圖1 MAGEA1的表達(dá)差異及對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響(aP＜0.05)A：TCGA公共數(shù)據(jù)中原位與轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者的MAGEA1表達(dá)；B：MAGEA1過表達(dá)A375細(xì)胞系中基因的改變情況(紅色表示顯著上調(diào)的基因，粉色表示輕度上調(diào)的基因，綠色表示下調(diào)的基因)Fig.1 Difference of MAGEA1 expression and its effect on Wnt/β-catenin signal pathway(aP＜0.05)A: MAGEA1 expression in orthotopic and metastatic melanoma patients in TCGA public data. B: MAGEA1 overexpression gene changes in the A375 cell line (red indicates significantly up-regulated genes, pink indicates slightly up-regulated genes, and green indicates down-regulated genes)

2MAGEA1激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 將TOP flash/FOP flash質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入穩(wěn)定的MAGEA1過表達(dá)(A375-MAGEA1，A2058-MAGEA1)和 敲 低(A375-shMAGEA1，A2058-shMAGEA1)細(xì)胞系，并用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)分析TOP與FOP熒光素酶活性的比值。過表達(dá)MAGEA1時(shí)，TOP/FOP比值增加，即β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性增加(P＜0.05)；敲低MAGEA1，TOP/FOP比值下降(圖2A)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為了進(jìn)一步證實(shí)這一結(jié)果，對(duì)黑色素瘤細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中β-catenin的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，過表達(dá)MAGEA1后，細(xì)胞核中的β-catenin表達(dá)上升，細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)變化不明顯(圖2B)。免疫熒光方法分析A2058細(xì)胞中β-catenin的入核情況(圖2C)，MAGEA1過表達(dá)后β-catenin出現(xiàn)了明顯的入核現(xiàn)象。而且c-myc和β-catenin隨著MAGEA1的表達(dá)增高上調(diào)，而GSK-3β和p-GSK-3β表達(dá)下調(diào)(圖2D)，表明MAGEA1可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。同時(shí)，MAGEA1的過表達(dá)可以下調(diào)E-cadherin表達(dá)，上調(diào)Vimetin和Twist1的表達(dá)(圖2E)。初步驗(yàn)證了MAGEA1對(duì)黑素瘤細(xì)胞EMT標(biāo)志物表達(dá)的影響。

圖2 MAGEA1對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白與EMT相關(guān)蛋白的影響(aP＜0.05；bP＜0.01)A：穩(wěn)定過表達(dá)和敲低MAGEA1的A375和A2058細(xì)胞中TOP/TOP的活性值；B：過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞中細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中βcatenin的表達(dá)情況；C：過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞株中免疫熒光檢測(cè)β-catenin的表達(dá)情況(藍(lán)色代表細(xì)胞核，紅色代表β-catenin)；D：過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞中c-myc、β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白的表達(dá)情況；E：過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞中E-cadherin、Vimetin和Twist1蛋白的表達(dá)情況Fig.2 Effect of MAGEA1 on Wnt/β-catenin signaling pathway related proteins and EMT related proteins (aP＜0.05; bP＜0.01)A: TOP/TOP activity values in A375 and A2058 cells stably overexpressing and knocking down MAGEA1; B: The expression of βcatenin in the nucleus and cytoplasm of cells overexpressing MAGEA1; C: Immunofluorescence detection of β-catenin expression in overexpression MAGEA1 cell line (blue represents cell nucleus, red represents β-catenin); D: Overexpression of c-myc, β-catenin, GSK-3β and p-GSK-3β protein expression in MAGEA1 cells; E: Overexpression of E-cadherin, vimetin and twist1 proteins in MAGEA1 cells

3MAGEA1通過c-Jun激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)黑色素瘤的遷移和侵襲 敲低TCF7后c-Jun的RNA表達(dá)顯著降低(P＜0.001) (圖3A)，c-Jun的磷酸化水平顯著降低，而c-Jun總的表達(dá)水平保持相對(duì)穩(wěn)定(圖3B)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性確實(shí)受到抑制。遷移和侵襲結(jié)果表明，過表達(dá)MAGEA1的A375和A2058細(xì)胞株中敲低TCF7后，細(xì)胞的遷移(圖3C)和侵襲(圖3D)能力顯著下降(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示MAGEA1通過c-Jun激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)黑色素瘤的遷移和侵襲。

圖3 MAGEA1通過c-Jun激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路的驗(yàn)證以及對(duì)黑色素瘤細(xì)胞表型產(chǎn)生的影響(aP＜0.05；bP＜0.01；cP＜0.001)A：轉(zhuǎn)染siTCF7后對(duì)過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞部分基因mRNA表達(dá)的影響；B：轉(zhuǎn)染siTCF7后對(duì)過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞部分基因蛋白表達(dá)的影響；C：敲低TCF7后對(duì)過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞株遷移的影響；D：敲低TCF7后對(duì)過表達(dá)MAGEA1細(xì)胞株侵襲的影響Fig.3 MAGEA1 was used to verify the activation of Wnt/β-catenin signal pathway by c-Jun and its effect on the phenotype of melanoma cells(aP＜0.05; bP＜0.01; cP＜0.001)A: Effect of siTCF7 transfection on mRNA expression of some genes in cells overexpressing MAGEA1; B: The effect of transfection of siTCF7 on the protein expression of some genes in cells overexpressing MAGEA1; C: The effect of knocking down TCF7 on the migration of overexpressing MAGEA1 cell lines; D: The effect of knocking down TCF7 on the invasion of overexpressing MAGEA1 cell lines

討 論

惡性黑色素瘤是皮膚惡性程度最高的腫瘤，患者的5年生存率取決于診斷時(shí)的疾病分期，一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，死亡率極高，因此研究惡性黑色素瘤的發(fā)病和轉(zhuǎn)移機(jī)制非常重要。MAGEA1是第一個(gè)黑色素瘤抗原基因(MAGE)家族基因，迄今為止研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少56個(gè)MAGE家族基因[11]，Caballero等[12]首先通過分析血液和組織證明黑色素瘤患者的MAGEA1家族發(fā)生了突變。更多的研究表明MAGEA1可以通過多種方式調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)行為，在乳腺癌和卵巢癌細(xì)胞中MAGEA1可與FBXW7相互作用，調(diào)節(jié)NOTCH1受體的表達(dá)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移[8]，MAGEA1也可以與SKIP蛋白和HDAC1相互作用，抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄[13]，MAGEA1的去甲基化可誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展[14]，但MAGEA1參與黑色素瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚無報(bào)道。我們對(duì)MAGEA1調(diào)節(jié)黑色素瘤惡變過程的內(nèi)在機(jī)制進(jìn)行了系列研究探索，并首次證明MAGEA1可以通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與黑色素瘤轉(zhuǎn)移過程。

Brasseur等[3]和Barrow等[15]分別證明轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者組織中MAGEA1的表達(dá)在RNA和蛋白水平均有所升高，這與我們實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析的結(jié)果一致，即轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者M(jìn)AGEA1表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于原位黑色素瘤患者。Wnt/β-catenin信號(hào)通路是調(diào)控細(xì)胞發(fā)育的重要級(jí)聯(lián)反應(yīng)之一，并且與腫瘤緊密相關(guān)。越來越多的證據(jù)表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路可以促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移[16]，Wnt/β-catenin信號(hào)在腫瘤尤其是結(jié)直腸癌中發(fā)揮的作用最為突出[17-20]，其他腫瘤中Wnt/β-catenin信號(hào)也可出現(xiàn)異常，如肺癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌、胃癌[21-26]等。目前已經(jīng)報(bào)道多種基因可以通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響腫瘤的轉(zhuǎn)移，Kindlin-2通過Wnt/βcatenin信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)肝細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移[22]，DDAH1通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[25]，YPEL3通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制鼻咽癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移[27]。我們發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路在黑色素瘤轉(zhuǎn)移中起著重要作用。已有的研究表明β-catenin的上調(diào)會(huì)導(dǎo)致黑素瘤轉(zhuǎn)移增加[28-30]，與我們的研究結(jié)果一致。然而，Lim和Nusse[31]則認(rèn)為Wnt/βcatenin信號(hào)傳導(dǎo)的丟失可能有助于黑素瘤的進(jìn)展，β-catenin在黑素瘤中的作用有待進(jìn)一步證實(shí)。黑素瘤的發(fā)生發(fā)展是多個(gè)信號(hào)通路參與的過程，Wnt/β-catenin信號(hào)通路亦可與其他信號(hào)通路發(fā)生相互作用。MAGEA1通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)黑素瘤細(xì)胞產(chǎn)生的影響是直接還是間接作用我們將繼續(xù)探索。

綜上所述，MAGEA1作為一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，在惡性黑色素瘤中可通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。