海螵蛸雞子黃油膏制備及其對(duì)小鼠創(chuàng)傷修復(fù)中IL-6及TNF-α的影響

宋孟霜 楊 宇 孫 璐 陳曉霞 王玲玲*

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 大連116600)

海螵蛸，性咸、澀、溫，歸脾、腎經(jīng)，具有收斂止血，制酸止痛，收濕斂瘡的作用，在古代多用于治療吐血、鼻衄不止、創(chuàng)口久不收斂等[1]?，F(xiàn)代藥理研究海螵蛸具有中和胃酸[2]、保護(hù)胃黏膜、抗?jié)?、止血及清?chuàng)面作用[2]。雞子黃油多外用治療水火燙傷、濕疹、潰瘍久不收口、慢性中耳炎等，具有消腫止痛、收斂瘡口的功效[3]?！侗静菥V目》中記載“海螵蛸燒存性，和雞蛋黃一同研成末外涂,治療小兒重舌鵝口瘡”，說明海螵蛸與雞子黃油配伍具有消腫及收斂創(chuàng)口功效，但現(xiàn)代研究中未見有關(guān)海螵蛸與雞子黃油配伍的研究。

創(chuàng)傷是由于各種致傷因素導(dǎo)致的人體組織損傷和功能障礙，嚴(yán)重創(chuàng)傷則導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征（Systemicinflammationresponsesyndrome，SIRS）的發(fā)生[4]。當(dāng)機(jī)體受到創(chuàng)傷等嚴(yán)重打擊后，體內(nèi)相續(xù)啟動(dòng)一系列復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)，包括應(yīng)激信號(hào)的激活和傳遞、炎癥反應(yīng)失衡、各種有害因素的釋放等。我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)如何促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)有著獨(dú)特的理解和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，尤其是在創(chuàng)面的外治上充分發(fā)揮著中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)。因此，充分發(fā)揮外用中藥有效促進(jìn)創(chuàng)面愈合的特長(zhǎng)，探討其機(jī)理具有重要的意義。

1 資料與方法

1.1 試藥與儀器

山東產(chǎn)海螵蛸（購于大連市海王星辰藥店）；洪家雞蛋（購買于農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)）；Na2S（國(guó)藥集團(tuán)）、烏拉坦（國(guó)藥集團(tuán)）、IL-6及TNF-αElisa試劑盒（江蘇酶標(biāo)）均購于大連辰玉試劑有限公司、科華全自動(dòng)酶標(biāo)儀ST-360。

實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物為12周齡昆明小鼠，體重（20±2）g，雌雄各半，共96只，購與大連醫(yī)科大學(xué)，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（遼）2013-0002。所有小鼠均予標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料喂養(yǎng)按照標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)用藥材制備

1.2.1.1 海螵蛸：取凈海螵蛸小塊置于熱鍋內(nèi)，用文火加熱，炒至表面微黃色，取出，放涼，研磨成細(xì)粉末。

1.2.1.2 雞子黃油：雞蛋煮熟，去殼及蛋白，將蛋黃搓碎后放置在鐵鍋內(nèi)，先用文火加熱，再用武火慢熬，反復(fù)翻炒至出油。繼續(xù)炒至蛋黃變黑褐色的硬塊，油完全溢出，將蛋黃油倒入小瓶，得20mL，待涼備用。

1.2.1.3 實(shí)驗(yàn)用藥膏制備：稱取碳十八醇、單硬脂酸甘油酯、丙二醇、吐溫、司盤適量，一起于水浴鍋上恒溫80℃加熱混合作為油相。另量取甘油和蒸餾水適量，于水浴鍋上加熱至80℃左右，緩緩滴入三乙醇胺，作為水相。在80℃等溫下將油相緩緩倒入水相，將30g海螵蛸粉加入，按同一方向攪拌，放涼至室溫，即得海螵蛸膏。分別取基質(zhì)加入不同質(zhì)量的海螵蛸與雞子黃油5mL配置成1:1組、2:1組、3:1組及4:1組。

1.2.2 造模與干預(yù)。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物隨機(jī)分為8組，每組10只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，腹腔注射20%烏拉坦，麻醉后用6%的Na2S溶液脫毛。用手術(shù)剪做全皮層切除手術(shù)，深及筋膜，面積約為0.5 cm2。各給藥組于創(chuàng)面上均勻涂相應(yīng)藥膏0.5 mm厚，每日換藥1次，每3日以標(biāo)準(zhǔn)化攝影法拍攝創(chuàng)口，計(jì)算創(chuàng)口創(chuàng)面愈合率，直至造模成功后第9d。

1.2.3 ELISA試劑盒檢測(cè)。分別于給藥第一天、第三天、第六天及第九天，取空白組、模型組、4：1組各4只小鼠，摘眼球取血，離心分離得到血清。按照IL-6及TNF-αELISA試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同給藥組對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響

與模型組相比，各給藥組在9天內(nèi)各統(tǒng)計(jì)時(shí)間點(diǎn)均具有顯著的促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用(P＜0.05 ）。不同配比藥對(duì)與單味藥相比，第三天及第六天3:1組與4:1組與海螵蛸組及雞子油組具有顯著性差異，治療效果更好，第九天則基本痊愈，與單獨(dú)使用海螵蛸作用相當(dāng)，但較單獨(dú)使用雞子油效果顯著。尤其4:1組第一天對(duì)創(chuàng)面愈合度就明顯高于各單味藥組。由此確定4:1組為海螵蛸雞子油最佳配比，由此制備藥膏具有顯著治療創(chuàng)傷作用（圖1）。

圖1 不同給藥組對(duì)小鼠創(chuàng)面愈合率的影響

2.2 海螵蛸雞子油膏對(duì)創(chuàng)傷模型小鼠血清中IL-6及TNF-α

如表1所示，與空白組相比，9天內(nèi)模型組血清中IL-6及TNF-α均有顯著升高，但是隨著傷口愈合天數(shù)增加，炎癥因子含量逐漸降低；給藥組，除了第九天IL-6含量回調(diào)至正常值外，其它天數(shù)組IL-6及TNF-α顯示隨著愈合天數(shù)增加，含量逐漸降低。但與模型組相比，治療組各天內(nèi)回調(diào)IL-6及TNF-α能力均較自然愈合有顯著性差異。說明海螵蛸雞子油膏藥物發(fā)揮了很大作用。

表1 海螵蛸雞子油對(duì)創(chuàng)傷模型小鼠中IL-6及TNF-α的比較(x±s,n=10)

3 討論

通過藥理實(shí)驗(yàn)觀察到各含有海螵蛸給藥組，在手術(shù)后第一天傷口均有不同程度明顯結(jié)痂，單獨(dú)雞子黃油組結(jié)痂較其它給藥組范圍小，但模型組并無明顯結(jié)痂現(xiàn)象，且傷口中心處泛白，外圍紅腫。在活躍程度方面，各含有雞子黃油給藥組在傷后給藥的7h后陸續(xù)開始進(jìn)食、緩慢活動(dòng)，在第三天已基本活動(dòng)無礙，單獨(dú)海螵蛸組給藥后第二天開始進(jìn)食、緩慢活動(dòng)，在第四天已基本活動(dòng)無礙。模型組在前三天除了必要的進(jìn)食基本一動(dòng)不動(dòng)。通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，不同時(shí)間點(diǎn)給藥組的愈合率均顯著高于模型組（P<0.05 ），但是當(dāng)海螵蛸與雞子黃油配比達(dá)到4：1時(shí)，其促進(jìn)創(chuàng)面愈合效果最佳，且在傷后第10天已基本痊愈結(jié)痂脫落，模型組創(chuàng)面結(jié)痂未完全脫落，表明海螵蛸與雞子黃油配伍對(duì)創(chuàng)傷的愈合有明顯的促進(jìn)作用，且有助于傷后恢復(fù)正常活動(dòng)。推測(cè)膏藥中雞子黃油清熱解毒，消腫止痛功效可減輕創(chuàng)面疼痛，促進(jìn)傷后恢復(fù)，海螵蛸則具有顯著的止血收斂傷口作用，兩者配伍可達(dá)到最佳的止痛斂傷功效。