結核感染T細胞斑點試驗在阿拉爾片區(qū)結核病診斷中的應用效果觀察

王 莉，侯向萍，龔河軍，周 鳳，王瑞萍

（新疆生產(chǎn)建設兵團第一師阿拉爾醫(yī)院 新疆 阿拉爾 843300）

結核病是當前威脅人類健康的常見呼吸道疾病之一，而我國又是世界上22個結核病高發(fā)國家之一，每年因結核病死亡的病例高達13萬例。結核病是一種傳染病，其致病菌為結核分枝桿菌，雖然該疾病的臨床癥狀不明顯，病情發(fā)展較慢，但容易累及患者全身各個系統(tǒng)，且在診斷過程中極易發(fā)生漏診，最終造成患者死亡[1]。根據(jù)流行病學分析，我國結核病感染的人數(shù)超過5億，嚴重威脅患者身體及生命安全[2]。當前，臨床常用結核病感染的檢測方法主要有結核培養(yǎng)、抗酸涂片等，但這些方法都有著較低的陽性率、敏感度及特異度以及較長的檢測周期[3]。因此，快速診斷及治療結核病是當前控制結核病感染的重要措施。本研究選取2019年7月—2020年11月阿拉爾片區(qū)就診的289例疑似結核患者，分別進行結核感染T細胞斑點試驗（T-SPOT試驗）、抗酸桿菌涂片染色鏡檢，分析結核感染T細胞斑點試驗在阿拉爾片區(qū)結核病診斷中的運用效果，現(xiàn)將研究方法及結果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次289例疑似結核患者來源于本院自2019年7月—2020年11月就診的。納入標準：臨床完整資料可收集者；有咳嗽、咳痰、咯血或者午后低熱等癥狀者；完全知曉本研究的內容并自愿參與者；具有較好依從性者。排除標準：嚴重心、腎功能性疾病者；免疫系統(tǒng)疾病者；凝血障礙者或免疫系統(tǒng)疾病者；精神病者及意識障礙性疾病，無法有效配合研究者；不愿配合檢測、拒絕參加研究者。男性167例，女性122例；年齡（14～87）歲，平均年齡（48.89±4.11）歲。本研究符合醫(yī)學倫理。

1.2 方法

抗酸桿菌涂片染色鏡檢：根據(jù)CDC規(guī)定的方法圖片，由CDC培訓后專職進行涂片技術人員來負責。將涂片自然干燥后，置于染色架上；加熱固定；滴入石碳酸復紅溶液蓋滿玻璃片，染色10 min；流水自玻璃片一端輕緩沖洗，沖去染液，晾干；再滴入酸性酒精溶液蓋滿玻璃片，脫色1～2 min；采用流水沖洗玻璃片10～20 s；瀝干；加入亞甲藍溶液30～60 min；采用流水清緩沖洗玻片一端，將染色沖洗掉，瀝干，待鏡檢。

T-SPOT試驗：清晨空腹抽取患者5 mL靜脈血，分離外周血單個核細胞，于被抗IFN-γ抗體微量板的4個孔中，加入不同的陽性對照物。再一次向每孔中加入2×105濃度的PBMC，將其放在37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內進行20 h的孵育。在PBS溶液洗脫后再加入堿性磷酸酶標記抗體及干擾素抗體，于室溫下孵育2 h。采用PBS溶液終止反應，計算斑點數(shù)。陽性診斷標準：比陰性對照多5個點。

1.3 觀察標準

比較兩種試驗方法檢測的特異度、靈敏度、假陽性、假陰性。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異性=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%。準確率=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用%表示，行χ2檢驗，若P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1 診斷結果

289例疑似結核患者中，確診98例，確診率33.91%，其中肺結核病患者73例，占74.49%，肺外結核病患者25例，占25.51%。

2.2 兩種檢測方法與金標準（痰培養(yǎng)）診斷結果比較

T-SPOT試驗的特異度為83.77%、靈敏度為84.69%，準確率為84.08%；抗酸桿菌涂片鏡檢的特異度為56.54%、靈敏度為31.63%，準確率為48.10%。兩種試驗的結果經(jīng)對比分析，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種試驗方法與金標準診斷結果比較

3.討論

結核病是由于結核桿菌感染所引起的慢性傳染病，可能侵入到全身各個器官，多侵犯患者肝臟。通常情況，潛伏期周期為4～8周，約有80%的患者發(fā)生在肺部，故肺結核在結核病中占有較大比重[4]。隨著環(huán)境污染的日益嚴重，結核發(fā)病率日益升高，除了少數(shù)發(fā)病急促外，多部分患者呈現(xiàn)慢性發(fā)病過程，且伴隨有低熱、乏力及咳嗽、咯血等癥狀，但多數(shù)不具有典型性，容易造成漏診或者誤診。因此，選擇合適的試驗方法對提高結核病診斷水平具有重要意義。

當前，細菌學試驗是診斷結核病較為準確的方法，但該檢測方法需要較長檢測過程，且檢測過程較復雜，容易出現(xiàn)假陰性，不利大規(guī)模的結核病檢測[5]。近年來，隨著臨床醫(yī)學的發(fā)展，抗酸桿菌涂片鏡檢、T-SPOT在結核病診斷中得到應用?？顾釛U菌涂片鏡檢是當前應用較廣泛的一種方法，其對于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和制定化療方案、考核療效、評價防治結果等具有非常重要的意義。然而，我國人群卡介苗接種率相對較高，導致結核菌試驗假陽性率偏高，加上容易受到機體自身免疫狀態(tài)的影響，進而限制了該試驗方法的應用[6]。T-SPOT是由酶聯(lián)免疫斑點發(fā)展而來的檢測方法，主要是使用結核分枝桿菌特異性抗原刺激分離出外周血單個核細胞，通過細胞因子干擾素分泌檢測抗原特異性T淋巴細胞應答反應情況，進而判斷結核感染狀態(tài)，有著較高特異度及敏感度，更為重要的是其敏感度并不受到機體免疫狀態(tài)的影響[7]。我國石衛(wèi)武等[8]學者通過選取658例結核病患者為研究對象，所有接受檢測患者在抗結核之前均進行T-SPOT檢測，比較疑似結核病、非結核病患者的試驗結果，結果顯示結核病、疑似結核病、非結核病患者T-SPOT的陽性率分別為85.71%，72.31%，28.63%，均具有顯著差異，表明T-SPOT試驗在活動性肺結核病診斷中有著較高輔助價值。而本研究選取2019年7月—2020年11月阿拉爾片區(qū)就診的289例疑似結核患者，分別進行T-SPOT試驗、抗酸桿菌涂片染色鏡檢，分析結核感染T細胞斑點試驗在阿拉爾片區(qū)結核病診斷中的運用效果。結果顯示：T-SPOT試驗的特異度和靈敏度明顯高于抗酸桿菌涂片染色鏡檢結果（P＜0.05）。表明T-SPOT試驗用于結核病診斷中具有較高應用價值。但也應認識到T-SPOT試驗也存在一些不足，檢測步驟較繁瑣，價格較昂貴，對檢測人員的技術水平有較高要求，從而限制了其在基層醫(yī)院的應用[9-10]。此外，該試驗方法尚不能完全檢測結核病是否為陳舊性或者活動性類型，因此，在后期研究中，應明確結核分枝桿菌感染后的免疫反應與結核病的發(fā)生、發(fā)展關系。

綜上所述，阿拉爾片區(qū)結核病診斷中結核感染T細胞斑點試驗有較高應用價值，可提高結核病診斷水平，可進行臨床應用。但在本次研究中，樣本量較少，在以后的研究中將擴大樣本量，對結核感染T細胞斑點試驗在阿拉爾片區(qū)結核病診斷中的運用評價進行深入探究。