過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)Aβ1-42刺激的293T細(xì)胞線粒體功能和自噬水平的影響

洪婷婷，張宇，崔理立

廣東醫(yī)科大學(xué) 廣東省衰老相關(guān)心腦疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東湛江 524001

淀粉樣蛋白結(jié)合醇脫氫酶(ABAD)也稱17β-HSD10，是一種線粒體蛋白質(zhì)。已知ABAD有一個(gè)LD區(qū)域，可特異性與β-淀粉樣蛋白(Aβ)結(jié)合，Aβ與ABAD形成的復(fù)合物導(dǎo)致ABAD結(jié)構(gòu)異常，進(jìn)而阻止ABAD與NAD+的結(jié)合，ABAD不能發(fā)揮酶活性，線粒體膜通透性發(fā)生變化，進(jìn)而導(dǎo)致線粒體窘迫和細(xì)胞毒性。此外，ABAD可調(diào)節(jié)線粒體基質(zhì)中的親環(huán)蛋白D(cypD)，后者可調(diào)節(jié)線粒體通透性過(guò)渡孔的開放。同時(shí)，已知人線粒體RNase P是由三種蛋白質(zhì)(ΜRPP1(線粒體核糖核酸酶P蛋白1)，ΜRPP2(17β-HSD10)和ΜRPP3(Μg2+依賴性核糖核酸內(nèi)切酶))組成，ABAD是ΜRPP1蛋白穩(wěn)定表達(dá)所必需的，ABAD的突變會(huì)引起RNaseP組分活性降低和RNA加工缺陷，導(dǎo)致線粒體功能紊亂[1-3]。

Aβ肽是由α、β和γ-分泌酶水解酶切淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)所產(chǎn)生的。正常情況下，絕大部分產(chǎn)生的是Aβ40，少量是Aβ42，但后者具有更強(qiáng)的疏水性、聚集性以及神經(jīng)毒性。Aβ1-42可隨年齡依賴性快速生成并積聚，引起神經(jīng)毒性。研究發(fā)現(xiàn)Aβ可聚集在線粒體內(nèi)，降低呼吸鏈復(fù)合物酶的活性，減少線粒體的耗氧量，增加活性氧的產(chǎn)生，最終導(dǎo)致線粒體腫脹及后續(xù)的細(xì)胞凋亡[4-5]。線粒體作為機(jī)體細(xì)胞代謝的能量工廠，通過(guò)不斷的分裂和融合以為適應(yīng)生命活動(dòng)的需要，受損或多余線粒體的清除是維護(hù)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的關(guān)鍵，線粒體自噬作為選擇性自噬的一種類型，是機(jī)體清除受損線粒體的重要形式之一[6]。理論上，線粒體功能絮亂，包括膜電位下降、活性氧生成增多、ATP產(chǎn)量減少等，會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體啟動(dòng)線粒體自噬，受損線粒體通過(guò)與溶酶體結(jié)合，清除受損的線粒體。但目前尚未有ABAD與線粒體自噬的相關(guān)報(bào)告。本文旨在研究在Aβ1-42刺激下過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)293T細(xì)胞線粒體功能的影響，并探究其是否影響自噬相關(guān)蛋白的水平。

1 材料與方法

1.1 材料 293T細(xì)胞(上海中喬新舟生物公司)，血清、胰酶、雙抗(美國(guó)Gibco公司)，DΜEΜ高糖培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)，Lipo Fiter(漢恒生物科技有限公司)、BCA蛋白檢測(cè)盒(美國(guó)Thermo公司)，ABAD過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、ABAD干擾質(zhì)粒(上海毅樂生物)，增強(qiáng)型ATP(三磷酸腺苷)檢測(cè)試劑盒、ROS(活性氧)檢測(cè)試劑盒(碧云天生物技術(shù))，氧化磷酸化解偶聯(lián)劑CCCP(羰基氰化物間氯苯腙)(ΜCE)，Aβ1-42(β淀粉樣蛋白1-42)(上海強(qiáng)耀生物科技有限公司)，DΜSO(二甲基亞砜)(青島生物科技)，抗體：LC3B(Sigma)，P62、ABAD(Abcam)，β-actin(CST)，低溫高速速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，酶標(biāo)儀、化學(xué)發(fā)光儀(美國(guó)Thermo公司)，曝光機(jī)(美國(guó)Azure Biosystems公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組 293T細(xì)胞購(gòu)買于上海中喬新舟生物公司，使用完全培養(yǎng)基(10%胎牛血清+1%的雙抗+高糖培養(yǎng)基)在37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱傳代培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，每隔2～3 d傳代1次，用含EDTA胰酶消化3 min，加兩倍體積培養(yǎng)基終止胰酶消化。傳代3次后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分組方法：(1)Control組、過(guò)表達(dá)ABAD組、Control給藥組(Aβ1-425μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)、過(guò)表達(dá)ABAD給藥組(Aβ1-425μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)；(2)Control組、sh-ABAD組；(3)Control+DΜSO組、Control+CCCP組、過(guò)表達(dá)ABAD+DΜSO組、過(guò)表達(dá)ABAD+CCCP組(WT/Aβ10μmol/L)。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 嚴(yán)格按照漢恒Lipo Fiter說(shuō)明書轉(zhuǎn)染。細(xì)胞傳代3次后，按1×105/孔接種，細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，細(xì)胞密度在60%左右進(jìn)行轉(zhuǎn)染。ABAD過(guò)表達(dá)和sh-ABAD轉(zhuǎn)染終濃度為2μg/孔。轉(zhuǎn)染5～6 h后更換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。24 h后，用配制的不同濃度Aβ1-42刺激細(xì)胞24 h。

1.2.3 Aβ1-42的配制 Aβ1-42母液配制：取人源Aβ1-42單體，用HFIP重懸，在通風(fēng)櫥中揮發(fā)后獲得Aβ肽膜，以DΜSO溶解肽膜，稀釋至適當(dāng)濃度后，37℃孵育48 h后即得到Aβ寡聚體，孵育后的溶液1周內(nèi)使用。

1.2.4 氧化磷酸化解偶聯(lián)劑CCCP的配制 CCCP母液配制：離心試管，在無(wú)菌操作臺(tái)中稱取適量CCCP粉末，加入DΜSO，使?jié)舛葹?0 mmol/L，充分震蕩混勻離心，即得到CCCP母液，1個(gè)月內(nèi)使用。

1.2.5 ATP(三磷酸腺苷)檢測(cè) 按照產(chǎn)品說(shuō)明書操作，吸除培養(yǎng)液，100μL裂解液/12孔板每孔，移液器反復(fù)吹打,充分裂解細(xì)胞。裂解后4℃12 000 g離心5 min，吸取的上清即為樣品。按照每個(gè)樣品/標(biāo)準(zhǔn)品需100μL ATP檢測(cè)工作液的比例配制適當(dāng)量的ATP檢測(cè)工作液。把待用試劑在冰浴上融解。取適量的ATP檢測(cè)試劑，用ATP檢測(cè)試劑稀釋液稀釋ATP檢測(cè)試劑(1：4)。稀釋后的ATP檢測(cè)試劑即為ATP檢測(cè)工作液。加100μLATP檢測(cè)工作液到檢測(cè)管內(nèi)，室溫放置5 min。檢測(cè)管內(nèi)加上20μL樣品/標(biāo)準(zhǔn)品，迅速用槍混勻，間隔2 s后用化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定RLU值。

1.2.6 活性氧(ROS)檢測(cè) 按照產(chǎn)品說(shuō)明書操作，用無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽DCFH-DA(1∶1 000)，使終濃度為10μmol/L。用稀釋好的DCFH-DA重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度控制在100萬(wàn)～2 000萬(wàn)/mL，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20 min。隔5 min上下顛倒混勻，待探針和細(xì)胞充分接觸后，用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光的強(qiáng)弱。

1.2.7 Western Blot 移除培養(yǎng)液，用冰PBS小心洗一遍，按100μL裂解液/6孔板每孔的比例加入裂解液，置于搖床冰上，裂解15 min，用細(xì)胞刮充分刮數(shù)下，收集蛋白至EP管。檢測(cè)細(xì)胞濃度(BCA蛋白檢測(cè)法)。各組樣本取相同摩爾質(zhì)量和體積的蛋白量進(jìn)行SDS-PAGE電泳(初始電壓為60 V，待蛋白條帶入分離膠，調(diào)整電壓至100 V)，預(yù)先將PDVF膜泡在甲醇液中5～10 min，待電泳結(jié)束，將其轉(zhuǎn)印至PVDF膜，趕走膜和膠之間的氣泡，放入轉(zhuǎn)膜槽(200 mA，100 min)，1x TBST稀釋的5%脫脂牛奶，搖床上常溫封閉1 h。將一抗和膜置于孵育袋中共同孵育(一抗稀釋液配制所有的一抗，濃度為1∶1 000)，4℃搖床過(guò)夜?；厥找豢梗?×TBST洗膜3次，10 min/次。二抗用1×TBST稀釋的5%脫脂牛奶溶解，與膜在搖床上常溫孵育1 h。1×TBST洗膜3次，10 min/次。顯色及曝光。采用Image J對(duì)Western blot條帶進(jìn)行量化，將歸一化后目標(biāo)蛋白灰度值與內(nèi)參β-actin灰度值之間比值視為目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少3次。應(yīng)用IBΜSPSSStatistics 26對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)均經(jīng)過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能的影響 為確定在293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能的影響，分別測(cè)試其ATP、活性氧的變化。如表1所示，過(guò)表達(dá)ABAD組與Control組相比，ATP的產(chǎn)量和活性氧的生成變化不明顯，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。以上結(jié)果表明：ABAD過(guò)表達(dá)不影響293T細(xì)胞線粒體功能。為進(jìn)一步證實(shí)ABAD作為線粒體蛋白在線粒體功能起重要作用，分別測(cè)試干擾ABAD后293T細(xì)胞的ATP和活性氧的變化。如表2所示，干擾ABAD使293T細(xì)胞ATP產(chǎn)生減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但不影響活性氧的生成，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體功能比較(±s，n=4)

表1 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體功能比較(±s，n=4)

組別Control組ABAD組t值P值A(chǔ)TP 0.983 3±0.047 13 1.021±0.077 44 0.419＞0.05 ROS 0.668 2±0.068 20 0.739 7±0.029 66 0.961＞0.05

組別Control組ABAD組t值P值A(chǔ)TP 13.46±0.333 9 8.274±1.431 0 3.529＜0.05 ROS 0.862 9±0.052 8 0.821 7±0.023 1 0.712 7＞0.05

2.2 不同Aβ濃度刺激下293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能的影響 為了進(jìn)一步驗(yàn)證Aβ刺激下，過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能的影響，在293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD后加入5μmol/LAβ1-42，分別測(cè)試其ATP和活性氧。如表3所示，無(wú)論有無(wú)Aβ1-42刺激，過(guò)表達(dá)ABAD的293T細(xì)胞ATP產(chǎn)量和ROS產(chǎn)生變化不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，這可能是Aβ濃度還不足以與ABAD結(jié)合，引起其構(gòu)象改變，因此增添了兩個(gè)濃度的Aβ1-42，即10μmol/L和20μmol/L。如表3所示，只有在Aβ1-42刺激濃度在10μmol/L時(shí)，過(guò)表達(dá)ABAD組與Control組相比，ATP產(chǎn)量相對(duì)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這可能是ABAD與Aβ1-42的結(jié)合需要一定的濃度范圍，濃度范圍過(guò)低不能競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合ABAD，濃度過(guò)高，Aβ1-42本身的毒性作用已經(jīng)足以損害細(xì)胞產(chǎn)能。

表3 不同Aβ濃度下各組的線粒體功能比較(±s，n=4)

表3 不同Aβ濃度下各組的線粒體功能比較(±s，n=4)

組別Control組ABAD組t值P值Control+Aβ(5μmol/L)組ABAD+Aβ(5μmol/L)組t值P值Control+Aβ(10μmol/L)組ABAD+Aβ(10μmol/L)組t值P值Control+Aβ(20μmol/L)組ABAD+Aβ(20μmol/L)組t值P值A(chǔ)TP 1.028±0.0456 3 1.072±0.007 340 0.950 7＞0.05 0.855 9±0.037 65 0.891 8±0.034 90 0.699 8＞0.05 0.931 0±0.047 47 0.660 7±0.086 39 2.000 0＜0.05 0.860 3±0.015 10 0.802 6±0.090 60 0.628 5＞0.05 ROS 0.903 2±0.041 02 0.834 6±0.048 14 1.085＞0.05 0.834 6±0.034 86 0.865 6±0.023 09 0.741 7＞0.05 0.7729±0.056 07 0.8437±0.129 0 0.503 4＞0.05 0.896 9±0.014 95 0.879 9±0.054 56 0.299 6＞0.05

2.3 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體自噬蛋白水平的影響 過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能無(wú)明顯影響，且只在Aβ1-42特定濃度下線粒體ATP產(chǎn)生減少。為進(jìn)一步探究過(guò)表達(dá)ABAD與線粒體自噬的關(guān)系，在293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ABAD 24 h，再用線粒體自噬誘導(dǎo)劑CCCP 20μmol/L處理6 h，觀察線粒體自噬相關(guān)蛋白P62和LC3B的蛋白水平。如圖1、表4所示，在293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ABAD，P62蛋白水平下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但LC3B蛋白水平變化不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示正常ABAD過(guò)表達(dá)可能影響溶酶體，因?yàn)镻62是溶酶體的標(biāo)志蛋白。

表4 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體自噬相關(guān)蛋白P62和LC3B比較(±s，n=6)

表4 293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體自噬相關(guān)蛋白P62和LC3B比較(±s，n=6)

組別Control+DΜSO組ABAD+DΜSO組t值P值Control+CCCP組ABAD+CCCP組t值P值A(chǔ)BAD蛋白1.284±0.141 1 4.795±0.439 8 7.602＜0.05 1.070±0.1683 4.129±0.3662 7.592＜0.05 P62 1.405±0.156 1 1.028±0.044 59 2.322＜0.05 1.289±0.145 2 0.8007±0.068 20 3.042＜0.05 LC3B 1.872±0.261 6 1.812±0.045 39 0.225 1＞0.05 2.550±0.250 0 2.768±0.194 3 0.687 9＞0.05

圖1 在CCCP自噬誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下，293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD不引起線粒體自噬發(fā)生

2.4 Aβ1-42刺激下293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體自噬蛋白水平的影響 只在Aβ1-4210μmol/L誘導(dǎo)下，過(guò)表達(dá)ABAD可使線粒體ATP的產(chǎn)生減少，因此考慮ATP產(chǎn)生受損是否會(huì)誘發(fā)線粒體自噬，故在293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ABAD，加入Aβ1-4210μmol/L 24 h，再加入CCCP誘導(dǎo)劑20μmol/L 6 h，觀察線粒體自噬蛋白水平的變化，如圖2、表5所示，在Aβ1-42刺激下，CCCP誘導(dǎo)自噬過(guò)程中293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD使P62蛋白水平降低、LC3B水平升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示過(guò)表達(dá)ABAD在Aβ1-42刺激下促進(jìn)線粒體自噬發(fā)生。

圖2 在Aβ1-42 10μmol/L刺激下，293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD促進(jìn)線粒體自噬發(fā)生

表5 Aβ1-42 10μmol/L刺激下，293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體自噬相關(guān)蛋白P62和LC3B比較(±s，n=6)

表5 Aβ1-42 10μmol/L刺激下，293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ABAD線粒體自噬相關(guān)蛋白P62和LC3B比較(±s，n=6)

組別Control+DΜSO組ABAD+DΜSO組t值P值Control+CCCP組ABAD+CCCP組t值P值A(chǔ)BAD蛋白2.618±1.171 33.61±0.994 9 20.17＜0.05 1.524±0.380 8 41.52±1.676 23.27＜0.05 P62 0.698 4±0.043 08 0.576 4±0.034 29 2.216＞0.05 0.762 1±0.052 15 0.618 4±0.021 06 2.554＜0.05 LC3B 0.499 0±0.050 32 0.240 7±0.013 33 4.962＜0.05 0.758 3±0.033 44 0.928 9±0.032 41 3.663＜0.05

3 討論

ABAD屬于羥基甾體脫氫酶家族，在成年人和胎兒大腦海馬及杏仁核的神經(jīng)元中表達(dá)最為豐富[7]。在小鼠和爪蟾胚胎的研究發(fā)現(xiàn)，胚胎早期喪失ABAD可能是致命的，因?yàn)樵谇贸鼳BAD基因后小鼠胚胎早期出現(xiàn)了因線粒體功能障礙導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡和死亡，這意味ABAD在細(xì)胞存活中起著重要作用，且研究還發(fā)現(xiàn)這種作用獨(dú)立于其酶的催化活性，可能是其存在為機(jī)體提供了某些結(jié)構(gòu)功能，又或者參與維持結(jié)構(gòu)的完整性。另外，研究發(fā)現(xiàn)ABAD的LD區(qū)域可特異性與Aβ結(jié)合，導(dǎo)致ABAD結(jié)構(gòu)異常，不能發(fā)揮酶活性，線粒體膜通透性改變，導(dǎo)致線粒體窘迫和細(xì)胞毒性。同時(shí)，有報(bào)道表明，使用ABAD誘騙肽(ABAD-DP)來(lái)拮抗Aβ和ABAD的結(jié)合能保護(hù)神經(jīng)元線粒體功能，而ABAD與Aβ分離，則能使線粒體、神經(jīng)元免受Aβ的毒性[8-12]。由上可知，ABAD作為一種線粒體蛋白，在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用，而ABAD又能與Aβ相互作用，影響線粒體正常功能發(fā)揮。當(dāng)線粒體功能受損超過(guò)一定閾值時(shí)，機(jī)體則會(huì)啟動(dòng)線粒體自噬途徑，清除受損線粒體，調(diào)節(jié)線粒體穩(wěn)態(tài)。

線粒體自噬是各種內(nèi)外刺激誘發(fā)、由自噬囊泡包裹、吞噬受損的線粒體，通過(guò)與溶酶體相結(jié)合，降解其包裹的內(nèi)容物的過(guò)程。當(dāng)線粒體遭受輕微刺激時(shí)，機(jī)體首先啟動(dòng)線粒體融合作用，通過(guò)與健康線粒體融合以中和受損線粒體的傷害，但當(dāng)線粒體損傷超出線粒體融合所承受的范圍，則機(jī)體將促線粒體進(jìn)行分裂，把受損部分的線粒體分離，通過(guò)線粒體自噬途徑清除[13]，其中LC3B和P62是檢測(cè)自噬通量的兩個(gè)主要標(biāo)志物。自噬發(fā)生時(shí)，新生成的LC3則從胞漿型LC3轉(zhuǎn)變?yōu)槟ば蚅C3；P62作為特異性底物，與LC3相互作用，在自噬-溶酶體通路中被降解，通過(guò)測(cè)量LC3比值和P62水平可評(píng)估自噬水平的高低。

目前為止，僅有部分研究探究過(guò)表達(dá)ABAD與Aβ相互作用對(duì)線粒體功能的影響，但少有涉及其線粒體自噬通路機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)旨在為對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充，先在最基本的293T細(xì)胞器探究在Aβ存在下，過(guò)表達(dá)ABAD對(duì)線粒體功能的影響及其與線粒體自噬的關(guān)系，為后續(xù)進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明，在293T細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)ABAD并不會(huì)影響線粒體功能，而干擾ABAD則只能影響線粒體ATP的生成。僅在10μΜ濃度Aβ1-42刺激下影響線粒體ATP的生成，并促線粒體自噬發(fā)生。對(duì)所得的研究結(jié)果歸納幾個(gè)猜想：(1)神經(jīng)元是高需能場(chǎng)所，更易受Aβ聚集的破壞。Aβ1-42對(duì)293T細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用亞于神經(jīng)元細(xì)胞；(2)ABAD作為線粒體成分，但其含量較小，其與Aβ的結(jié)合僅些微改變線粒體功能；(3)考慮到線粒體功能受損影響功能可能存在次序，而非同步出現(xiàn)，輕微的損傷只影響ATP的生成，而活性氧產(chǎn)生可能是后期受損嚴(yán)重的結(jié)果；(4)線粒體嚴(yán)重受損才能誘發(fā)線粒體自噬，CCCP誘導(dǎo)劑本身也是具備毒性作用，加上ABAD與Aβ的相互作用產(chǎn)生的毒性作用，才足以破壞線粒體，促使線粒體自噬發(fā)生。

綜上所述，ABAD作為線粒體成分的重要一員，其過(guò)表達(dá)并不影響293T細(xì)胞的線粒體功能，但在特定濃度Aβ1-42刺激下發(fā)生相互作用，減少線粒體ATP生成，促進(jìn)線粒體自噬發(fā)生。本次研究尚有很多不足之處，如線粒體功能及線粒體自噬檢測(cè)方式多樣，細(xì)胞器的選擇及補(bǔ)充等，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)還需進(jìn)一步探究以明確ABAD與Aβ的結(jié)合影響線粒體功能及自噬這一機(jī)制。