以C-C基序趨化因子配體2（CCL2）為受體挖掘治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）潛在中藥單體化合物

李乾勝 曹燦 李玲玲 馮靜 巫曉慧 崔瑛

摘要 目的：C-C基序趨化因子配體2（CCL2）為受體探索治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的中藥單體化合物及作用機制。方法：以“C-C motif chemokine 2”為檢索詞在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺（TCMSP）檢索作用于CCL2受體的中藥單體化合物，并收集其作用靶點。在GeneCards及OMIM數(shù)據(jù)庫中以“fever”“cough”“pneumonia”“coronavirus”為檢索詞收集相應(yīng)靶點，并添加“木瓜樣蛋白酶（PLP）”“樹突狀細(xì)胞特異性細(xì)胞間黏附分子-3結(jié)合非整合素因子（DC-SIGN）”，合并作為COVID-19相關(guān)靶點。UniProt數(shù)據(jù)庫標(biāo)化靶點基因名，取中藥單體化合物靶點與疾病靶點的交集。運行Cytoscape軟件構(gòu)建中藥單體化合物-交集靶點網(wǎng)絡(luò)，用交集靶點通過STRING數(shù)據(jù)庫及Cytoscape軟件構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò);借DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO功能富集、KEGG通路富集，而預(yù)測中藥單體化合物治療COVID-19的作用機制。然后將所有中藥單體化合物與CCL2、新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）3CL水解酶和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Ⅱ（ACE2）進(jìn)行分子對接。結(jié)果：中藥單體成分-靶點網(wǎng)絡(luò)中包含單體成分2個，交集靶點153個，PPI網(wǎng)絡(luò)分析顯示關(guān)鍵靶點涉及AKT1、IL6、VEGFA等。GO功能富集所得GO條目115個，其中涉及CCL2條目有10個，KEGG通路富集所得信號通路97條，其中涉及CCL2有9條。分子對接結(jié)果顯示槲皮素、漢黃芩素與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2的親和力與推薦化藥相近。結(jié)論：槲皮素、漢黃芩素可與CCL2結(jié)合作用于腫瘤壞死因子信號通路、查加斯?。绹F蟲?。?、甲型流感信號通路，從而可能發(fā)揮抗COVID-19的作用。

關(guān)鍵詞 C-C基序趨化因子配體2（CCL2）;新型冠狀病毒肺炎;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子對接;槲皮素;漢黃芩素;中藥單體化合物;靶點

Investigation of Potential Monomeric Compounds of Traditional Chinese Medicine in the Treatment of Coronavirus Disease Pneumonia（COVID-19） Based on C-C Motif Chemokine 2（CCL2） Receptor

LI Qiansheng1，CAO Can2，LI Lingling2，F(xiàn)ENG Jing2，WU Xiaohui2，CUI Ying2，3

（1 Zhengzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450007，China; 2 Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China; 3 Co Construction Collaborative Innovation Center，Henan University of Traditional Chinese Medicine Respiratory Disease Prevention and Treatment Province Ministry，Zhengzhou 450000，China）

Abstract Objective：To investigate the mechanism and traditional Chinese medicine monomer compounds in the treatment of COVID-19 with C-C motif chemokine 2（CCL2） as a receptor.Methods：TCMSP was used to search for the compounds of Chinese medicine monomers acting on CCL2 receptor and for collecting their targets.In GeneCards and OMIM databases，the corresponding targets were collected with the key words of “fever”，“cough”，“pneumonia” and “coronavirus”，and “papain like protease（PLP）” and “dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3 binding non integrin factor（DC-SIGN）” were added as COVID-19 related targets.UniProt database corrected the gene name of the targets，and took the intersection of monomer compounds and disease targets.In order to predict the interaction mechanism of the targets，we used the STRING database and the Cytoscape 3.7.2 to construct the protein interaction（PPI） network，and the DAVID database to analyze the function enrichment of GO and the enrichment of KEGG pathway.Then all traditional Chinese medicine monomer compounds were linked to CCL2，SARS-CoV-2 3CL hydrolase and angiotensin-converting enzyme Ⅱ（ACE2） for molecular docking.Results：There are 2 monomer components and 153 intersection targets in the network of monomer targets and traditional Chinese medicine.PPI network analysis showed that the key targets were AKT1，IL6，VEGFA，etc.There were 115 GO entries，10 CCL2 entries in GO functional enrichment analysis，97 signal pathways and 9 CCL2 signal pathways in KEGG pathway enrichment analysis.The results of molecular docking showed that the affinity of the recommended Chinese medicine monomers with CCL2，SARS-CoV-2 3CL hydrolase and ACE2 was similar to that of the recommended drugs.Conclusion：Quercetin and wogonin can combine with CCL2 to act on TNF signaling pathway，Chagas disease（American trypanosomiasis） and Influenza A signaling pathway，which may play an anti-COVID-19 role.

Keywords C-C motif chemokine 2（CCL2）; COVID-19; Network pharmacology; Molecular docking; Quercetin; Wogonin; Monomer compounds of traditional Chinese medicine; Target

中圖分類號：R285;R242文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.010

2019年新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）疫情爆發(fā)，全球累計確診病例和死亡病例不斷攀升[1]。研究發(fā)現(xiàn)，新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）通過其表達(dá)的S-蛋白與人體的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Ⅱ（ACE2）結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞[2]，而ACE2可激活與纖維化相關(guān)的趨化因子配體2（CCL2）的表達(dá)[3]，研究也表明COVID-19的發(fā)病機制與CCL2釋放過多密切相關(guān)[4]，因此可考慮以CCL2為受體進(jìn)行下一步研究。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以成分與疾病為研究對象，預(yù)測其中的作用機制與活性成分[5]。分子對接方法可在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的進(jìn)一步驗證分子機制，并進(jìn)行藥物的篩選[6]。因此，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接法常結(jié)合用于分子機制的研究與活性成分的篩選[7]。研究表明，SARS-CoV-2 3CL水解酶與ACE2與均與SARS-CoV-2的復(fù)制十分有關(guān)，現(xiàn)已作為SARS-CoV-2的藥物發(fā)現(xiàn)靶點[8-9]。

CCL2屬于趨化因子，可介導(dǎo)全身性炎性反應(yīng)[10]，其由免疫細(xì)胞、多種類型的惡性和基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)[11]，有研究表明COVID-19患者存在嚴(yán)重的炎性反應(yīng)，其炎性反應(yīng)的發(fā)生與CCL2有關(guān)[12]。中國在疫情防控上取得階段性進(jìn)展，中醫(yī)藥為疫情防控貢獻(xiàn)了重要力量[13]。因此本研究立足科學(xué)前沿，以CCL2為受體（3D結(jié)構(gòu)見圖1），利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接方法篩選具有抗COVID-19作用的中藥單體化合物。

1 材料與方法

1.1 材料 本研究所使用的在線分析平臺、數(shù)據(jù)庫及軟件相關(guān)信息見表1。

1.2 中藥單體化合物及其靶點的獲取 以“C-C motif chemokine 2”為關(guān)鍵詞于TCMSP數(shù)據(jù)庫“Target name”項下，檢索作用于CCL2的中藥單體化合物，取“口服生物利用度（OB）≥30%”∩“類藥性（DL）≥0.18”[14]部分，作為潛在中藥單體活性化合物，并收集其作用靶點，于Pubchem庫中下載二維結(jié)構(gòu)備用。

1.3 COVID-19疾病靶點篩選 由于COVID-19以發(fā)熱、干咳為主要表現(xiàn)[15]，因此分別以“fever”“cough”“pneumonia”“coronavirus”為檢索詞，在GeneCards及OMIM數(shù)據(jù)庫中檢索相應(yīng)靶點，檢索文獻(xiàn)，添加最近新發(fā)現(xiàn)的“木瓜樣蛋白酶（PLP）”“樹突狀細(xì)胞特異性細(xì)胞間黏附分子-3結(jié)合非整合素因子（DC-SIGN）”靶點，剔重后作為COVID-19的靶點。

1.4 靶點基因名的標(biāo)準(zhǔn)化及中藥單體化合物-COVID-19交集靶點獲取 將“1.2”項獲得的中藥單體化合物相關(guān)作用靶點、“1.3”項獲得的疾病相關(guān)靶點，錄入Uniprot數(shù)據(jù)庫獲得標(biāo)準(zhǔn)化基因名，繼而利用Venny2.1獲取兩部分的交集靶點。

1.5 中藥單體化合物-交集靶點網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 以“1.2”項篩選所得中藥單體化合物、“1.4”項下獲取的交集靶點運用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建中藥單體化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)。

1.6 蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 復(fù)制“1.4”項篩選所得交集靶點，粘貼入STRING在線數(shù)據(jù)庫的“Mul-tiple Proteins by Names”項目下，“Organism”項目處選擇“Homo sapiens”，導(dǎo)出相關(guān)*TSV格式文件，借助Cytoscape 3.7.2軟件特有的“Network Analyzer”功能，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，以Degree值為篩選條件，Degree值越高，則該成分相關(guān)靶點越多，該靶點也就越大，方便分析核心作用靶點。

1.7 交集基因的GO功能富集分析與KEGG通路富集分析 進(jìn)入DAVID數(shù)據(jù)庫，復(fù)制“1.4”項篩選所得交集靶點，粘貼入“Paste a list”空白處，Select Identifier項下選擇“official gene symbol”，“species”處設(shè)為“Homo sapiens”，點擊“Functional Annotation Summary Results”進(jìn)入結(jié)果分析界面，選擇“Gene ontology”項下的“GOTERM_BP_DIRECT”“GOTERM_CC_DIRECT”“GOTERM_MF_DIRECT”（此三項用于GO功能富集分析），及“Pathways”項下的“KEGG_PATHWAY”（此一項結(jié)果用于KEGG通路富集分析），以P<0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)，將GO功能富集分析結(jié)果用Graphpad Prism軟件繪制柱狀圖，KEGG通路富集分析結(jié)果中含有CCL2靶點的用Omicshare繪制氣泡圖，進(jìn)行可視化。

1.8 中藥單體化合物與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2的分子對接 運行hemOffice16.0軟件，將自Pubchem數(shù)據(jù)庫下載的中藥單體化合物二維結(jié)構(gòu)構(gòu)建三維結(jié)構(gòu)保存為*mol2格式。自PDB蛋白數(shù)據(jù)庫下載CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶及ACE2與其原始配體的蛋白質(zhì)3D構(gòu)型，保存為*pdb格式，ID分別為CCL2（PDB ID：2LIQ）、SARS-CoV-2 3CL水解酶（PDB ID：6LU7）和ACE2（PDB ID：1R42）。運行PyMOL軟件剔除3個蛋白原始配體，且去水、加氫后，作為對接靶蛋白，用Auto Dock 1.5.6軟件將中藥單體化合物、靶蛋白均轉(zhuǎn)換為*pdbqt格式，以原始配體與蛋白的原結(jié)合位點作為結(jié)合位點，運行Auto Dock vina軟件將中藥單體化合物與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2進(jìn)行分子對接。同法將公認(rèn)具有抗SARS-CoV-2作用的化學(xué)藥（瑞德西韋、利巴韋林、利托那韋、硝唑尼特、洛匹那韋、法匹拉韋、氯喹）與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2進(jìn)行分子對接。

1.9 含有篩選中藥單體化合物的中藥收集 在TCMSP數(shù)據(jù)庫中檢索含有篩選所得中藥單體化合物的中藥，統(tǒng)計在國家衛(wèi)生健康委員會官網(wǎng)發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）[15-18]中出現(xiàn)的中藥（包含出現(xiàn)在中成藥中），并進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 篩選所得中藥單體化合物及部分信息 經(jīng)檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫，得作用于CCL2的中藥單體化合物共有13個，OB、DL篩選后得2個中藥單體化合物，其CAS號、OB、DL、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式、靶點數(shù)等信息見表2。

2.2 篩選所得中藥單體化合物靶點與COVID-19疾病靶點交集結(jié)果 槲皮素、漢黃芩素的對應(yīng)靶點合并剔重后有166個，按“1.3”項方法篩選到與COVID-19相關(guān)的靶點9 041個，153個交集靶點，二者交集韋恩圖見圖2。

2.3 中藥單體化合物-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)中包含漢黃芩素和槲皮素2個中藥單體化合物，13個漢黃芩素單獨作用靶點，28個漢黃芩素與槲皮素共同作用靶點，112個槲皮素單獨作用靶點。網(wǎng)絡(luò)中包含漢黃芩素和槲皮素2個中藥單體化合物，13個漢黃芩素單獨作用靶點，28個漢黃芩素與槲皮素共同作用靶點，112個槲皮素單獨作用靶點。見圖3，圖中黃色六邊形代表中藥單體化合物，粉色長方形代表漢黃芩素單獨作用靶點，淺藍(lán)色菱形代表共同靶點，淺綠色橢圓形代表槲皮素單獨作用靶點。

2.4 交集靶點PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?經(jīng)Network Analyzer分析網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)屬性發(fā)現(xiàn)，其包含153個節(jié)點，2 658條邊，每個靶點平均連接34.7條邊，圓越大，表明該靶點的Degree值越大;每條邊表示中藥單體與蛋白之間的相互作用關(guān)系，連線越多則表明關(guān)聯(lián)度越強，關(guān)聯(lián)度較大的包括AKT1、IL6、VEGFA、GASR3、JUN、MYC、MAPK1、EGFR、PTGS2、EGF等，其中CCL2在位于第18位，關(guān)聯(lián)度也很強。見圖4。

2.5 交集靶點的GO功能富集、KEGG通路富集結(jié)果分析

1）交集靶點GO功能富集分析結(jié)果顯示：共得GO功能條目115個（P<0.05），其中生物過程（BP）條目共有87個，占比75.65%，細(xì)胞組成（CC）條目7個，占比6.09%，分子功能（MF）條目21個，占比18.26%，涉及CCL2的功能有條目有10個。以BP、MF中Count數(shù)最大的前20個條目與CC的所有條目作圖（由于CC條目只有7條，因此全部展示）。見圖5。2）KEGG通路富集分析共得97條信號通路（P<0.05），涉及CCL2的通路9條。見圖6。

2.6 中藥單體化合物與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶及ACE2的分子對接結(jié)果分析 分子對接結(jié)果的結(jié)合能越低，則配體與受體結(jié)合的構(gòu)象便越穩(wěn)定，發(fā)生作用的可能性便也越大[19]。中藥單體化合物作用于CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2靶蛋白的分子對接結(jié)果如表3所示。分子對接結(jié)果顯示中藥單體化合物與SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2及CCL2靶蛋白的分子對接親和力均小于-20 kJ/mol，比文獻(xiàn)的篩選標(biāo)準(zhǔn)-5 kJ/mol更低[20]，由此表明槲皮素、漢黃芩素與SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2及CCL2有較好的結(jié)合活性。見圖7。

2.7 含有篩選中藥單體化合物的中藥 含有篩選中藥單體化合物的中藥情況如表4所示，含有槲皮素的中藥有188味，含有漢黃芩素的中藥有10味。含有槲皮素的中藥中，23味出現(xiàn)在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中，這23味中藥中歸肺經(jīng)的藥物有甘草、金銀花、麻黃、連翹、魚腥草、虎杖、柴胡、紫菀、款冬花、廣藿香、葶藶子、黃芪、梔子、丁香、北沙參、桑葉16味，含有漢黃芩素的中藥有黃芩、連翹、蒼術(shù)3味出現(xiàn)在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中，而這3味中藥中歸肺經(jīng)的中藥有黃芩和連翹2味。連翹既含有槲皮素，又含有漢黃芩素，且出現(xiàn)在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中。

3 討論

本研究以CCL2為受體，結(jié)合OB和DL篩選到槲皮素和漢黃芩素2個重要成分，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)得出槲皮素作用于154個靶點、漢黃芩素作用于45個靶點，2個成分的靶點與COVID-19相關(guān)靶點有153個，其中重要靶點涉及AKT1、IL6、VEGFA、GASR3、JUN等，GO功能富集分析結(jié)果顯示涉及CCL2的功能有條目有10個，包括炎性反應(yīng)、脂多糖介導(dǎo)的信號通路、趨化因子介導(dǎo)的信號通路、神經(jīng)元凋亡過程的負(fù)調(diào)控、MAPK梯級、ERK1和ERK2級聯(lián)的正調(diào)節(jié)、對傷害的反應(yīng)、單核細(xì)胞趨化性的陽性調(diào)節(jié)、細(xì)胞外空間和趨化因子活性，KEGG通路富集分析顯示涉及CCL2的通路有9條，包括腫瘤壞死因子信號通路、查加斯?。绹F蟲?。⒓仔土鞲?、瘧疾、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、趨化因子信號途徑、NOD樣受體信號通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子-受體相互作用、單純皰疹感染等通路，這些基因、功能、通路對與COVID-19的關(guān)系密切，在進(jìn)一步研究中應(yīng)加以重視，槲皮素和漢黃芩素極有可能通過與CCL2等靶點結(jié)合作用于腫瘤壞死因子信號通路、查加斯?。绹F蟲?。?、甲型流感瘧疾、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、趨化因子信號途徑、NOD樣受體信號通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子-受體相互作用、單純皰疹感染等通路發(fā)揮治療COVID-19的作用。分子對接結(jié)果顯示，槲皮素、漢黃芩素與CCL2的結(jié)合能分別為-26.33、-24.65 kJ/mol，槲皮素、漢黃芩素與SARS-CoV-2 3CL水解酶的結(jié)合能分別為-28.83、-27.99 kJ/mol，槲皮素、漢黃芩素與ACE2的結(jié)合能分別為-22.56、-21.32 kJ/mol;而推薦化學(xué)藥瑞德西韋、利巴韋林、利托那韋、硝唑尼特、洛匹那韋、法匹拉韋、氯喹與CCL2的結(jié)合能分別為-27.16、-21.30、-21.30、-24.65、-29.25、-18.80、-22.56 kJ/mol，與SARS-CoV-2 3CL水解酶的結(jié)合能分別為-33.85、-25.07、-25.91、-24.65、-27.99、-20.06、-22.98 kJ/mol，與ACE2結(jié)合能分別為-22.56、-17.55、-17.55、-19.22、-24.23、-16.71、-17.55 kJ/mol，可見槲皮素、漢黃芩素與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶及ACE2的結(jié)合能多小于推薦化學(xué)藥，可見槲皮素與漢黃芩素與CCL2、SARS-CoV-2 3CL水解酶及ACE2的結(jié)合構(gòu)象多較推薦化學(xué)藥穩(wěn)定。

槲皮素和漢黃芩素具有多種藥理作用，尤其是在抗炎、抗病毒方面。研究發(fā)現(xiàn)槲皮素在體外和體內(nèi)均具有良好的抗炎活性[21]，且具有抗多種病毒的活性，如槲皮素可抵抗鼠冠狀病毒和登革熱病毒[22]，槲皮素還可作為甲型流感病毒的抗病毒劑抑制其進(jìn)入細(xì)胞[23]，另有研究表明槲皮素可能是破壞1型人類免疫缺陷病毒（HIV-1）潛伏期的有效藥物，可能具有根除HIV的潛力[24]，且槲皮素對腸道病毒71復(fù)制和病毒3C蛋白酶具有抑制作用[25]，而槲皮素又可預(yù)防鼻病毒誘發(fā)的慢性阻塞性肺疾病（COPD）表型小鼠肺部疾病。漢黃芩素可誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡并減輕過敏性氣道炎癥[26]，并可減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷和炎性反應(yīng)[27]，且可在血管炎性反應(yīng)中介導(dǎo)炎性反應(yīng)[28]，且有研究表明漢黃芩素預(yù)處理可減輕順鉑引起的大鼠腎毒性[29];抗病毒方面，漢黃芩素可發(fā)揮抗甲型和乙型流感病毒的作用[30]，且具有體內(nèi)抗急性肺損傷的作用[31]，且其在體內(nèi)體外均可發(fā)揮抗乙肝病毒的作用[32]?？梢婇纹に?、漢黃芩素與肺部炎性反應(yīng)及肺部疾病相關(guān)性非常高，且能夠治療COVID-19的相關(guān)并發(fā)癥。因此槲皮素、漢黃芩素可對于COVID-19的炎性反應(yīng)、病毒進(jìn)行針對性治療，且對于《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）所載的肺臟、心臟、血管、肝臟等病變可發(fā)揮防治作用。

出現(xiàn)于《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中的中藥中，含有槲皮素的藥材有23味，含有漢黃芩素的中藥有3味，可見槲皮素、漢黃芩素在COVID-19的治療中具有重要意義。連翹既含有槲皮素，又含有漢黃芩素，是金花清感顆粒、疏風(fēng)解毒膠囊、連花清瘟膠囊等被《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）收錄中成藥的重要組成，且在新型冠狀病毒肺炎輕型“濕熱蘊肺證”和重型“氣血兩燔證”的推薦方中均用連翹15 g;而金花清感顆粒、連花清瘟顆粒又在新冠肺炎治療中有名的“三藥三方”中，在新冠肺炎的治療中發(fā)揮了重要作用。且張伯禮[33]團(tuán)隊研究發(fā)現(xiàn)金花清感顆粒能顯著減輕新型冠狀病毒肺炎輕型患者的發(fā)熱、咳嗽、乏力、咳痰臨床癥狀，并緩解患者心理焦慮，瞿香坤等[34]進(jìn)行臨床回顧性分析發(fā)現(xiàn)疏風(fēng)解毒膠囊可顯著改善新冠肺炎患者干咳、鼻塞、流涕、咽痛、乏力、腹瀉等癥狀。

連翹具有抗角叉菜膠、雞蛋清所致炎性反應(yīng)、甲型流感病毒[35]、乙肝病毒[36]、人巨細(xì)胞病毒[37]等藥理作用，可針對COVID-19相關(guān)的炎性反應(yīng)和病毒奏效。且含有槲皮素出現(xiàn)在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中的23味中藥中，歸肺經(jīng)的中藥有甘草、金銀花、麻黃、連翹、魚腥草、虎杖、柴胡、紫菀、款冬花、廣藿香、葶藶子、黃芪、梔子、丁香、北沙參、桑葉，共16味，占比為69.57%，含有漢黃芩素且出現(xiàn)在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》（試行第四～七版）中的3味中藥中，歸肺經(jīng)的有黃芩及連翹2味，占比為66.67%，可見含有槲皮素和漢黃芩素的藥物對肺經(jīng)具有特殊作用，治療針對性強，因此可針對此次新冠肺炎發(fā)揮良好作用。且曹燦等[19]發(fā)現(xiàn)含有槲皮素的甘草、連翹、虎杖、敗醬草、馬鞭草、柴胡等6味中藥同為疏風(fēng)解毒膠囊組成，可見中藥復(fù)方存在多個中藥含有同一單體化合物的現(xiàn)象，預(yù)測這是中藥復(fù)方發(fā)揮“1+1>2”作用的機制之一;且含有漢黃芩素的黃芩和連翹，同為新型冠狀病毒肺炎輕型“濕熱蘊肺證”方得組成。新冠肺炎的基本病機特點包括“濕、熱、毒、瘀”，含有槲皮素的中藥中，黃連可清熱燥濕、廣藿香芳香化濕、葶藶子利水而能祛濕、青蒿清虛熱、虎杖清熱解毒，散瘀止痛、紅花活血化瘀……可見含有槲皮素的中藥這能夠或針對“濕”、或針對“熱”、或針對“毒”、或針對“瘀”起效，可見含有槲皮素的中藥可從多方面發(fā)揮治療新型冠狀病毒肺炎的作用。含有漢黃芩素的中藥中，黃芩清熱燥濕、連翹清熱解毒、蒼術(shù)燥濕，可針對新冠肺炎“濕”“熱”“毒”發(fā)揮作用。

研究表明CCL2-CCR2軸與COPD的慢性炎性反應(yīng)和支氣管重塑有關(guān)[38]，且CCL2是誘導(dǎo)癌癥肺轉(zhuǎn)移過程中重要的血管滲透因子[39]，又有實驗證實阻斷CCL2可增強抗PD1在肺癌中的免疫治療作用[40]，可見CCL2與肺部疾患、炎性反應(yīng)十分相關(guān)。CCL2是單核細(xì)胞浸入脂肪組織的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，在肥胖相關(guān)炎性反應(yīng)病理生理中起著核心作用[41]，且在血管周圍脂肪組織炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，又有研究表明人類巨細(xì)胞病毒在病毒復(fù)制過程中直接調(diào)節(jié)趨化因子CCL2的表達(dá)[42]，腎小管上皮細(xì)胞的外體CCL2對白蛋白誘導(dǎo)的腎小管間質(zhì)炎性反應(yīng)至關(guān)重要[43]，這些證據(jù)說明CCL2在COVID-19相關(guān)的炎性反應(yīng)和并發(fā)癥的發(fā)生中也發(fā)揮著重要的作用。Kempuraj D等[44]發(fā)現(xiàn)COVID-19發(fā)病機制的標(biāo)志是細(xì)胞因子風(fēng)暴，與白細(xì)胞介素-6（IL-6），白細(xì)胞介素-1β（IL-1β），腫瘤壞死因子-α（TNF-α），CCL2水平升高，以及粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等有十分密切的關(guān)系。Ruan X等[45]運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接法研究達(dá)原飲治療新冠肺炎的作用機制與成分，得出核心靶基因包括IL6，IL1β，CCL2，說明CCL2在新冠肺炎的發(fā)生和治療中起到重要作用，而核心成分包括山柰酚，槲皮素，7-甲氧基-2-甲基異黃酮，柚皮素，芒柄花黃素，進(jìn)而說明槲皮素在新冠肺炎的治療中起到重要作用。Tang X等[46]研究了68個中國經(jīng)典處方，并借助TCMATCOV平臺對其進(jìn)行評分，得出交互置信度評分前三位的是甘露消毒丹，冷哮丸和麻杏石甘湯，且其團(tuán)隊發(fā)現(xiàn)了COVID-19疾病的幾個特異性因子：CCL2，IL10，IL6，這些特異性因子也正是這條幾個處方的集中作用的靶點，甘露消毒丹含有連翹、廣藿香和黃芩，而連翹和廣藿香均含有槲皮素，黃芩含有漢黃芩素，由圖3槲皮素、漢黃芩素與靶點的網(wǎng)絡(luò)圖和圖4槲皮素、漢黃芩素的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖可以看出CCL2、IL-10、IL-6也均是槲皮素、漢黃芩素的重要作用靶點，可見槲皮素、漢黃芩素對于甘露消毒丹治療新冠肺炎可能有突出貢獻(xiàn);冷哮丸含有麻黃、甘草、紫菀和款冬花，而麻黃、甘草、紫菀和款冬花這四味藥均含有槲皮素;同樣，麻杏石甘湯含有麻黃和甘草，這兩味藥也含有槲皮素?；瘽駭《痉街委熜鹿诜窝椎年P(guān)鍵靶點涉及MAPK3、MAPK8、TP53、CASP3、IL-6、TNF、MAPK1、CCL2、PTGS2[47]，也包括CCL2。Mamber SW等[48]從免疫病理學(xué)的角度分析，冠狀病毒（例如SARS-CoV-2）會誘導(dǎo)各種T輔助因子1（Th1）、炎性細(xì)胞因子和趨化因子（包括IL-1，IL-6，CCL2，和CXCL10，從免疫學(xué)角度說明了CCL2與COVID-19的發(fā)生密切相關(guān)。Xiong Y等[49]通過檢測COVID-19患者的肺泡灌洗液（BALF）樣品，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子IL10，CCL2/MCP-1，CXCL10/IP-10，CCL3/MIP-1A和CCL4/MIP1B高度表達(dá)。綜上可見，CCL2與COVID-19具有十分密切的關(guān)系。也說明了本研究以“CCL2”為受體挖掘治療COVID-19中藥單體化合物的必要性。

參考文獻(xiàn)

[1]人民日報海外網(wǎng).數(shù)讀4月30日全球疫情：中國以外新確診近6.4萬例 累計逾317萬例死亡病例逾22.8萬例.[EB/OL][2020-05-01].http：//news.haiwainet.cn/n/2020/0501/c3541093-31781409.html.

[2]Hoffmann M，Kleine-Weber H，Schroeder S，et al.SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor[J].Cell，2020，181（2）：271-280.

[3]Chen IY，Chang SC，Wu HY，et al.Upregulation of the chemokine（C-C motif）ligand 2 via a severe acute respiratory syndrome coronavirus spike-ACE2 signaling pathway[J].J Virol，2010，84（15）：7703-7712.

[4]Xiong Y，Liu Y，Cao L，et al.Transcriptomic characteristics of bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood mononuclear cells in COVID-19 patients[J].Emerg Microbes Infect，2020，9（1）：761-770.

[5]向凈勻，吳杰，王琰，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的黃芩素、京尼平抗腦缺血作用機制研究[J].中草藥，2019，50（23）：5802-5811.

[6]浦強，徐巍龍，李楠，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)芪葵顆粒治療糖尿病腎病的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究[J].中草藥，2019，50（23）：5767-5777.

[7]劉錢，賀楨翔，楊慧，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接法探索肺毒清治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的潛在活性成分[J].中草藥，2020，51（7）：1713-1722.

[8]Chen Y W，Yiu CB，Wong K Y.Prediction of the SARS-CoV-2（2019-nCoV）3C-like protease（3CL pro）structure：virtual screening reveals velpatasvir，ledipasvir，and other drug repurposing candidates[J].F1000 Res，2020，9：129.

[9]Zhang H，Penninger JM，Li Y，et al.Angiotensin-converting enzyme 2（ACE2）as a SARS-CoV-2 receptor：molecular mechanisms and potential therapeutic target[J].Intensive Care Med，2020，46（4）：586-590.

[10]Cerri C，Genovesi S，Allegra M，et al.The Chemokine CCL2 Mediates the Seizure-enhancing Effects of Systemic Inflammation[J].J Neurosci，2016，36（13）：3777-3788.

[11]Li M，Knight DA，A Snyder L，et al.A role for CCL2 in both tumor progression and immunosurveillance[J].Oncoimmunology，2013，2（7）：25474.

[12]Conti P，Ronconi G，Caraffa A，et al.Induction of pro-inflammatory cytokines（IL-1 and IL-6）and lung inflammation by Coronavirus-19（COVI-19 or SARS-CoV-2）：anti-inflammatory strategies[J].J Biol Regul Homeost Agents，2020，34（2）：1.

[13]中華人民共和國中央人民政府.中醫(yī)藥為疫情防控貢獻(xiàn)重要力量.[EB/OL][2020-03-24].http：//www.gov.cn/xinwen/2020-03/24/content_5494759.htm.

[14]宗陽，丁美林，馬世堂，等.以血管緊張素轉(zhuǎn)換酶Ⅱ（ACE2）為受體挖掘治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）潛在中藥及單體成分[J].中草藥，2020，51（5）：1123-1129.

[15]國家衛(wèi)生健康委員會.關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）的通知[EB/OL][2020-03-04].http：//www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202003/46c9294a7dfe4cef80dc7f5912-eb1989.shtml.

[16]國家衛(wèi)生健康委員會.關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第四版）的通知[EB/OL][2020-01-27].http：//www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202001/4294563ed35b43209b31739bd-0785e67.shtml.

[17]國家衛(wèi)生健康委員會.關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）的通知[EB/OL][2020-02-05].http：//www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202002/3b09b894ac9b4204a79db5b89-12d4440.shtml.

[18]國家衛(wèi)生健康委員會.關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第六版）的通知[EB/OL][2020-02-19].http：//www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202002/8334a8326dd94d329df351d7-da8aefc2.shtml.

[19]曹燦，崔瑛，楚玉璽，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接方法的疏風(fēng)解毒膠囊治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的作用機制與活性成分研究[J].中草藥，2020，51（9）：2283-2296.

[20]宗陽，丁美林，賈可可，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接法探尋達(dá)原飲治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）活性化合物的研究[J].中草藥，2020，51（4）：836-844.

[21]Li Y，Yao J，Han C，et al.Quercetin，Inflammation and Immunity[J].Nutrients，2016，8（3）：167.

[22]Chiow KH，Phoon MC，Putti T，et al.Evaluation of antiviral activities of Houttuynia cordata Thunb.extract，quercetin，quercetrin and cinanserin on murine coronavirus and dengue virus infection[J].Asian Pac J Trop Med，2016，9（1）：1-7.

[23]Wu W，Li R，Li X，et al.Quercetin as an Antiviral Agent Inhibits Influenza A Virus（IAV）Entry[J].Viruses，2015，8（1）：6.

[24]Yang X，Zhu X，Ji H，et al.Quercetin synergistically reactivates human immunodeficiency virus type 1 latency by activating nuclear factor-κB[J].Mol Med Rep，2018，17（2）：2501-2508.

[25]Yao C，Xi C，Hu K，et al.Inhibition of enterovirus 71 replication and viral 3C protease by quercetin[J].Virol J，2018，15（1）：116.

[26]Lucas CD，Dorward DA，Sharma S，et al.Wogonin induces eosinophil apoptosis and attenuates allergic airway inflammation[J].Am J Respir Crit Care Med，2015，191（6）：626-636.

[27]Yao J，Pan D，Zhao Y，et al.Wogonin prevents lipopolysaccharide-induced acute lung injury and inflammation in mice via peroxisome proliferator-activated receptor gamma-mediated attenuation of the nuclear factor-kappaB pathway[J].Immunology，2014，143（2）：241-257.

[28]Wang J，Li K，Li Y，et al.Mediating macrophage immunity with wogonin in mice with vascular inflammation[J].Mol Med Rep，2017，16（6）：8434-8440.

[29]Badawy AM，El-Naga RN，Gad AM，et al.Wogonin pre-treatment attenuates cisplatin-induced nephrotoxicity in rats：Impact on PPAR-γ，inflammation，apoptosis and Wnt/β-catenin pathway[J].Chem Biol Interact，2019，308：137-146.

[30]Seong RK，Kim JA，Shin OS.Wogonin，a flavonoid isolated from Scutellaria baicalensis，has anti-viral activities against influenza infection via modulation of AMPK pathways[J].Acta Virol，2018，62（1）：78-85.

[31]Zhi HJ，Zhu HY，Zhang YY，et al.In vivo effect of quantified flavonoids-enriched extract of Scutellaria baicalensis root on acute lung injury induced by influenza A virus[J].Phytomedicine，2019，57：105-116.

[32]Guo Q，Zhao L，You Q，et al.Anti-hepatitis B virus activity of wogonin in vitro and in vivo[J].Antiviral Res，2007，74（1）：16-24.

[33]段璨，夏文廣，鄭嬋娟，等.金花清感顆粒治療新型冠狀病毒感染肺炎的臨床觀察[J/OL].中醫(yī)雜志：1-5[2020-07-31].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/11.2166.R.20200323.0853.002.html.

[34]瞿香坤，郝樹立，馬景賀，等.疏風(fēng)解毒膠囊聯(lián)合阿比多爾治療新型冠狀病毒肺炎的回顧性研究[J].中草藥，2020，51（5）：1167-1170.

[35]潘曌曌，王雪峰.連翹體外、體內(nèi)抗甲型流感病毒的實驗研究[J].西部中醫(yī)藥，2016，29（12）：5-8.

[36]肖會敏，何悅，王四旺，等.連翹揮發(fā)油的成分分析及抗病毒活性的考察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，8（8）：31-33.

[37]張丹丹，方建國，陳娟娟，等.連翹及其主要有效成分槲皮素體外抗人巨細(xì)胞病毒的實驗研究[J].中國中藥雜志，2010，35（8）：1055-1059.

[38]Henrot P，Prevel R，Berger P，et al.Chemokines in COPD：From Implication to Therapeutic Use[J].Int J Mol Sci，2019，20（11）：2785.

[39]Roblek M，Protsyuk D，Becker PF，et al.CCL2 Is a Vascular Permeability Factor Inducing CCR2-Dependent Endothelial Retraction during Lung Metastasis[J].Mol Cancer Res，2019，17（3）：783-793.

[40]Wang Y，Zhang X，Yang L，et al.Blockade of CCL2 enhances immunotherapeutic effect of anti-PD1 in lung cancer[J].J Bone Oncol，2018，11：27-32.

[41]Ahmad R，Al-Roub A，Kochumon S，et al.The Synergy between Palmitate and TNF-α for CCL2 Production Is Dependent on the TRIF/IRF3 Pathway：Implications for Metabolic Inflammation[J].J Immunol，2018，200（10）：3599-3611.

[42]Hamilton ST，Scott GM，Naing Z，et al.Human cytomegalovirus directly modulates expression of chemokine CCL2（MCP-1）during viral replication[J].J Gen Virol，2013，94（11）：2495-2503.

[43]Lv LL，F(xiàn)eng Y，Wen Y，et al.Exosomal CCL2 from Tubular Epithelial Cells Is Critical for Albumin-Induced Tubulointerstitial Inflammation[J].J Am Soc Nephrol，2018，29（3）：919-935.

[44]Kempuraj D，Selvakumar GP，Ahmed ME，et al.COVID-19，Mast Cells，Cytokine Storm，Psychological Stress，and Neuroinflammation[J].Neuroscientist，2020，1073858420941476.

[45]Ruan X，Du P，Zhao K，et al.Mechanism of Dayuanyin in the treatment of coronavirus disease 2019 based on network pharmacology and molecular docking[J].Chin Med，2020，15：62.

[46]Tang X，Tong L，Guo FF，et al[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi.2020，45（13）：3028-3034.

[47]Tao Q，Du J，Li X，et al.Network pharmacology and molecular docking analysis on molecular targets and mechanisms of Huashi Baidu formula in the treatment of COVID-19[J].Drug Dev Ind Pharm，2020，46（8）：1345-1353.

[48]Mamber SW，Krakowka S，Osborn J，et al.Can Unconventional Immunomodulatory Agents Help Alleviate COVID-19 Symptoms and Severity[J].mSphere，2020，5（3）：e00288-20.

[49]Xiong Y，Liu Y，Cao L，et al.Transcriptomic characteristics of bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood mononuclear cells in COVID-19 patients[J].Emerg Microbes Infect，2020，9（1）：761-770.

（2020-07-10收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）