原發(fā)性乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞的組織病理學(xué)指標(biāo)及其與預(yù)后的關(guān)系*

劉英霞

廣東省惠州市第一人民醫(yī)院病理科 516000

乳腺癌是臨床最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，好發(fā)于女性群體中，極少部分男性也可能發(fā)病。隨著人們生活方式的改變，以及工作、生存壓力的不斷增加，乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重威脅到了人們的健康乃至生命安全[1]。原發(fā)性乳腺癌是指發(fā)生于乳腺本身，而不是繼發(fā)于其他組織器官轉(zhuǎn)移而形成的惡性腫瘤，占到了乳腺癌的95%以上[2]。至今，原發(fā)性乳腺癌的病因并未明確。近年來(lái)，在原發(fā)性乳腺癌發(fā)病率不斷上升的背景下，學(xué)界對(duì)其發(fā)病機(jī)制既病因的研究不斷深入，取得了理想的成績(jī)。研究表明[3]，外周血循環(huán)細(xì)胞的存在，可能與原發(fā)性乳腺癌的發(fā)病、發(fā)展以及預(yù)后密切相關(guān)，腫瘤干細(xì)胞可能影響著早期腫瘤微轉(zhuǎn)移?；谂R床相關(guān)研究報(bào)道，為進(jìn)一步了解原發(fā)性乳腺癌的發(fā)病機(jī)制及原因，本研究針對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并與健康體檢者進(jìn)行對(duì)比分析，旨在為臨床防治提供更為科學(xué)、先進(jìn)的理論基礎(chǔ)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年1月—2020年6月收治的80例原發(fā)性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，將其視為疾病組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)細(xì)胞學(xué)、組織病理學(xué)等檢查確診為原發(fā)性乳腺癌[4]；(2)均為女性，精神和認(rèn)知正常，可配合完成基本交流溝通；(3)臨床資料完整、齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤者；(2)伴有全身感染性疾病者；(3)存在嚴(yán)重心腦血管疾病者；(4)妊娠期或哺乳期者。另納入同期50例體檢健康者作為對(duì)比，將其視為對(duì)照組，排除原發(fā)性乳腺癌者，自愿參與，簽署知情同意書(shū)。疾病組：年齡26～65歲，平均年齡(43.12±2.58)歲；婚姻狀況，已婚67例，未婚13例；臨床分期，Ⅰ期26例，Ⅱ期34例，Ⅲ期20例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：N0 49例，N1～3 31例。對(duì)照組：年齡24～63歲，平均年齡(42.94±2.55)歲；婚姻狀況，已婚41例，未婚9例。兩組各主要基本資料具有均衡性(P>0.05)，有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 (1)標(biāo)本采集：于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取兩組外周血10ml作為標(biāo)本。樣本采集后，進(jìn)行離心處理，收集血漿層和淋巴細(xì)胞分離液交界面的白膜層(即環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層)，吸出單個(gè)核細(xì)胞，將磷酸緩沖鹽溶液(PBS)5ml加入其中，經(jīng)離心管反復(fù)洗2次，將上層血清予以去除。(2)細(xì)胞角蛋白19(CK19)陽(yáng)性標(biāo)記：取CK19-FITC和抗FITC各10μl，將其加入洗后的離心管中標(biāo)記細(xì)胞，加入PBS將體積補(bǔ)足，在溫度4～8℃避光環(huán)境下，進(jìn)行孵育(約10min)，同時(shí)將10～20倍標(biāo)記體積的PBS進(jìn)行細(xì)胞洗滌，隨后進(jìn)行10min的離心處理，將上層血清去除后，再次洗滌。加入1ml PBS所得的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行離心處理(5min)，之后一并去除上層清液，使用10μl PBS進(jìn)行混勻，再次離心處理2min，2ml涂片，在熒光顯微鏡下，通過(guò)臨床組織病理學(xué)觀察方法進(jìn)行細(xì)胞涂片視野完整掃描，陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，選取視野采集圖片保存。(3)CD44+/CD24-/low檢測(cè)：將CD44-FITC抗體滴加于涂片，保持37℃溫度環(huán)境，使用PBS(0.1mol)反復(fù)洗滌3次，時(shí)間控制在15min左右。利用熒光顯微鏡，進(jìn)行掃描和檢測(cè)(同CK19陽(yáng)性標(biāo)記)。

2 結(jié)果

2.1 兩組CK19和CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率比較 疾病組CK19、CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表1所示。

表1 兩組CK19陽(yáng)性率的比較[n(%)]

2.2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與CK19陽(yáng)性率的關(guān)系 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0患者CK19陽(yáng)性率明顯低于N1～3患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。臨床分期Ⅰ期患者CK19陽(yáng)性率明顯低于Ⅱ期、Ⅲ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表2所示。

表2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與CK19陽(yáng)性率的關(guān)系[n(%)]

2.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率的關(guān)系 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0患者CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率略低于N1-3患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。臨床分期Ⅰ期患者CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率略低于Ⅱ期、Ⅲ期患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。如表3所示。

表3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率的關(guān)系[n(%)]

3 討論

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，是因乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生增殖失控，進(jìn)而出現(xiàn)惡性病變所致。根據(jù)2018年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)調(diào)查的最新數(shù)據(jù)顯示，原發(fā)性乳腺癌在全球女性癌癥中的發(fā)病率為24.2%，而這其中接近53.0%的患者發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[5]。盡管隨著乳腺癌早期篩查及治療策略和方法的普及，全球乳腺癌的死亡率有一定的下降趨勢(shì)，但是在我國(guó)廣大的農(nóng)村地區(qū)，死亡率的下降趨勢(shì)并非十分明顯，原發(fā)性乳腺癌的防治形勢(shì)仍不容樂(lè)觀[6]。因此，有必要加強(qiáng)對(duì)原發(fā)性乳腺癌發(fā)病機(jī)制及原因的探究。乳腺癌轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素，其轉(zhuǎn)移途徑較多，其中血行散播是重要途徑之一，而外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞是這一途徑的必要條件，若能夠在外周血中檢測(cè)出循環(huán)腫瘤細(xì)胞，則可以為腫瘤發(fā)生微轉(zhuǎn)移提供有力證據(jù)[7]。對(duì)于這一觀點(diǎn)，有學(xué)者對(duì)其原因進(jìn)行了分析，認(rèn)為外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分化增殖能力有限，甚至不具備分化增殖能力，只有部分腫瘤干細(xì)胞對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮作用，也只有腫瘤干細(xì)胞有腫瘤形成能力，且可達(dá)到遠(yuǎn)處組織器官，并形成轉(zhuǎn)移灶[8]。由此不難看出，針對(duì)乳腺癌患者外周血中的腫瘤干細(xì)胞檢測(cè)，其重要性不言而喻。為此，本研究針對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)納入80例原發(fā)性乳腺癌和50例健康體檢者進(jìn)行對(duì)比分析，在CK19陽(yáng)性、CD44+/CD24-/low標(biāo)記后發(fā)現(xiàn)，疾病組CK19、CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明了原發(fā)性乳腺癌患者存在CK19高陽(yáng)性表達(dá)的現(xiàn)象。進(jìn)一步對(duì)不同臨床特征的原發(fā)性乳腺癌患者CK19陽(yáng)性率進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N1～3和臨床分期Ⅱ期、Ⅲ期患者的CK19陽(yáng)性率要顯著高于N0和Ⅰ期患者(P<0.05)，提示原發(fā)性乳腺癌外周血中可檢測(cè)到外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)。在不同臨床特征原發(fā)性乳腺癌患者CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率分析方面，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不同、臨床分期不同的患者相比較，盡管存在一定的差異，但是并不顯著(P>0.05)，說(shuō)明了腫瘤干細(xì)胞的陽(yáng)性率受到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期的影響不大，但是從數(shù)據(jù)上看，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度和臨床分期增加，CD44+/CD24-/low陽(yáng)性率不斷上升，因此可能仍舊會(huì)受到一定的影響，但是影響并不顯著。

綜上所述，外周循環(huán)腫瘤細(xì)胞在原發(fā)性乳腺癌患者中存在高表達(dá)現(xiàn)象，陽(yáng)性率受到臨床分析和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，但腫瘤干細(xì)胞所受影響不大。