喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性研究

文 娟

湖南省湘潭市中心醫(yī)院病理科 411100

喉癌是指發(fā)生于喉部上皮的惡性腫瘤，主要臨床癥狀為聲音沙啞、咽喉異常感、疼痛、血痰、吞咽困難、呼吸困難等，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1]。并且大量研究表明[2-3]，早期發(fā)現(xiàn)喉癌能夠通過(guò)放射或鐳射局部切除進(jìn)行治療，且術(shù)后能夠發(fā)聲，對(duì)于后期患者需接受范圍更大之手術(shù)或全喉切除，需借助人工發(fā)聲器說(shuō)話。非染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白凝縮蛋白復(fù)合體Ⅰ亞單位H(NCAPH)是一種蛋白復(fù)合體，在細(xì)胞分裂過(guò)程中對(duì)染色體的組裝和分裂起著重要的作用；Survivin是凋亡抑制蛋白家族成員，能夠抑制細(xì)胞凋亡，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展；p53是一種腫瘤抑制基因，可使細(xì)胞分裂終止于復(fù)制前期與合成期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[4]。三者均在早期診斷其他癌癥中起到重要的作用。鑒于此，本文為了研究喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性，選取2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者組織標(biāo)本和同期在我院治療的43例聲帶息肉患者組織標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者組織標(biāo)本，定為觀察組；選擇同期在我院治療的43例聲帶息肉患者組織標(biāo)本，定為對(duì)照組。觀察組中男25例，女18例；年齡38～65歲，平均年齡為(51.62±10.27)歲。對(duì)照組中男24例，女19例；年齡38～66歲，平均年齡為(51.65±10.30)歲。兩組的性別、年齡等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本次研究獲得我院倫理委員會(huì)的認(rèn)證。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)觀察組經(jīng)術(shù)前活檢確診為喉鱗狀細(xì)胞癌者，對(duì)照組經(jīng)頻閃喉鏡確診為聲帶息肉者；(2)近1個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行其他方式進(jìn)行治療者；(3)知情本次研究，簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)精神障礙者；(2)伴有心、肝、腎等功能不全者；(3)接受過(guò)專(zhuān)業(yè)發(fā)聲或歌唱學(xué)習(xí)者。

1.2 試劑及藥品 從武漢三鷹生物有限公司購(gòu)買(mǎi)多克隆兔NCAPH抗體，稀釋濃度為1∶100；從北京中山生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)單克隆鼠Survivin、p53抗體。北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)從免疫組染色(SP)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DBA)顯色試劑盒。

1.3 方法 先用10%甲醛固定喉癌組織標(biāo)本和聲帶息肉組織標(biāo)本，然后用石蠟包埋進(jìn)行切片(厚度為4μm)，并用免疫組織化學(xué)SP染色處理(先脫蠟水化，用10%H2O2封閉10min，在pH=6.0的檸檬酸鹽緩沖液中行高溫高壓抗原修復(fù)并加血清封閉；然后加一抗孵育，用DAB染色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明封片)。選取自制磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設(shè)定為陰性對(duì)照，以陽(yáng)性組織切片設(shè)定為陽(yáng)性對(duì)照，按照購(gòu)買(mǎi)試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行操作。涉及儀器包括石蠟切片機(jī)、顯微鏡、電熱恒溫干燥箱等。喉癌組織標(biāo)本和聲帶息肉組織標(biāo)本NCAPH、Survivin、p53表達(dá)情況：喉癌組織標(biāo)本中細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒判定為NCAPH陽(yáng)性細(xì)胞；喉癌組織標(biāo)本中細(xì)胞質(zhì)或/和細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃至棕黃色顆粒判定為Survivin陽(yáng)性細(xì)胞；喉癌組織標(biāo)本中細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃至褐色顆粒判定為p53陽(yáng)性細(xì)胞。其中在400倍鏡下隨機(jī)發(fā)現(xiàn)500個(gè)細(xì)胞中NCAPH陽(yáng)性細(xì)胞>10%判定為陽(yáng)性，≤10%判定為陰性。在400倍鏡下隨機(jī)發(fā)現(xiàn)500個(gè)細(xì)胞中Survivin陽(yáng)性細(xì)胞>5%判定為陽(yáng)性，≤5%判定為陰性。在400倍鏡下隨機(jī)發(fā)現(xiàn)500個(gè)細(xì)胞中p53陽(yáng)性細(xì)胞>5%判定為陽(yáng)性，≤5%判定為陰性。統(tǒng)計(jì)喉癌患者的性別、年齡、淋巴有無(wú)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分型、病理分級(jí)、臨床分期等，分析喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織標(biāo)本中NCAPH、Survivin、p53表達(dá)情況比較 相比于對(duì)照組，觀察組組織標(biāo)本中NCAPH、Survivin、p53陽(yáng)性率明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組組織標(biāo)本中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)情況比較[n(%)]

2.2 喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 喉癌患者性別、年齡、臨床分型與喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。喉癌患者淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、病理分級(jí)和臨床分期隨喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53陽(yáng)性率顯著增高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析[n(%)]

3 討論

喉癌在頭頸腫瘤家族中比較常見(jiàn)，發(fā)病率占全身癌癥的1%～5%。大量研究表明[5-6]，早期發(fā)現(xiàn)、早期診療對(duì)于減輕喉癌的危害非常重要，及時(shí)治療能夠降低并發(fā)癥，提高術(shù)后生存率，保留喉的發(fā)音功能。并且臨床影像診斷喉癌往往處于晚期，術(shù)后影響患者發(fā)音功能，增加并發(fā)癥。同時(shí)在惡性腫瘤的診斷、侵襲與預(yù)后的預(yù)測(cè)中分子與基因標(biāo)志物日益受到重視[7]。

NCAPH、Survivin、p53均為惡性腫瘤分子與基因標(biāo)志物，且相關(guān)研究報(bào)道[8]，其在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，喉癌患者組織標(biāo)本中NCAPH、Survivin、p53陽(yáng)性率明顯高于聲帶息肉組織標(biāo)本。分析其原因，首先NCAPH在癌細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中能夠促進(jìn)染色體的組裝和分離，參與調(diào)節(jié)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的活性，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的分裂；另外，Survivin因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，能夠較強(qiáng)抑制異常突變細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)癌細(xì)胞的存活時(shí)間，促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖等；并且p53蛋白的生物活性較高，與DNA的復(fù)制和修復(fù)有密切的關(guān)系，對(duì)促進(jìn)細(xì)胞分裂增生具有重要的作用，在惡性腫瘤中較常見(jiàn)。故喉癌患者組織標(biāo)本中NCAPH、Survivin、p53的陽(yáng)性表達(dá)率較高。

另外本文發(fā)現(xiàn)，喉癌患者性別、年齡、臨床分型與喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)相關(guān)性。喉癌患者淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、病理分級(jí)和臨床分期隨喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53陽(yáng)性率顯著增高。進(jìn)一步說(shuō)明NCAPH、Survivin、p53與喉癌發(fā)展密切相關(guān)，均有望成為腫瘤診斷的分子標(biāo)記物及治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，NCAPH、Survivin、p53在喉癌組織中均有不同程度的陽(yáng)性表達(dá)，且喉癌患者淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、病理分級(jí)和臨床分期隨NCAPH、Survivin、p53陽(yáng)性率顯著增高。