• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    PDGF-BB 基因多態(tài)性與新疆地區(qū)不同民族人群骨關(guān)節(jié)炎易感相關(guān)性研究

    2021-06-22 01:17:20王夢(mèng)雨朱洲均邱貞宇史晨輝王維山
    關(guān)鍵詞:維吾爾族漢族骨關(guān)節(jié)炎

    王夢(mèng)雨,王 超,朱洲均,石 沖,向 偉,王 堆,邱貞宇,史晨輝,王維山*

    1.石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院 骨科中心,新疆 石河子 832000;2.石河子大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,新疆 石河子832000

    骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種受生物力學(xué)與生物化學(xué)共同影響的慢性退行性關(guān)節(jié)疾病,是成年人常見的肌肉骨骼疾病。據(jù)估計(jì),到2040 年將有7 800萬(wàn)人患骨關(guān)節(jié)炎[1],導(dǎo)致殘疾和生活質(zhì)量下降。關(guān)節(jié)疼痛是骨性關(guān)節(jié)炎的明確癥狀,但其病因尚不清楚[2]。OA 的發(fā)生與遺傳、年齡、性別、體重、關(guān)節(jié)創(chuàng)傷和異常機(jī)械負(fù)荷等因素有關(guān)[3]。OA 病變主要包括關(guān)節(jié)軟骨退變鈣化、滑膜炎癥、骨贅形成、軟骨下囊腫、軟骨下骨重塑、硬化、血管侵襲以及骨軟骨界面滲透性增加[4-5]。OA 與民族、性別、體重、年齡、遺傳、飲食、生活方式及生活環(huán)境等密切相關(guān),不同國(guó)家、地區(qū)、民族其患病率及影響因素均不相同。軟骨下骨血管生成增多,血管突破基底進(jìn)入無(wú)血管軟骨,是骨關(guān)節(jié)炎的診斷特征。Xu 等[6]研究證明來(lái)源于破骨細(xì)胞的PDGF-BB 是骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展過程中病理軟骨下骨血管生成的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。

    本研究分析新疆地區(qū)人群原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎(primary knee osteoarthritis,PKOA)的PDGF-BB 基因型,旨在探討新疆地區(qū)漢族、維吾爾族人群基因型頻率分布,為其與原發(fā)性O(shè)A 等相關(guān)的研究提供依據(jù),從基因角度探討原發(fā)性O(shè)A 發(fā)病的遺傳易感因素。

    1 材料與方法

    1.1 研究對(duì)象

    隨機(jī)選取2019 年1 月至2020 年11 月石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院、農(nóng)三師醫(yī)院、圖木舒克市人民醫(yī)院PKOA 漢族患者80 例,其中男性28 例,女性52例(年齡48~81 a,平均年齡56.66 a),正常對(duì)照組186 例(年齡41~74 a,平均年齡55.61 a),男性78例,女性108 例;維吾爾族PKOA 患者91 例,其中男性42 例,女性49 例(年齡41~72 a,平均年齡56.82 a),正常對(duì)照組162 例,男性63 例,女性99例(年齡40~78 a,平均年齡54.30 a)。所選取的研究對(duì)象均為長(zhǎng)期生活在新疆地區(qū)的人群。

    1.2 主要儀器與試劑

    PCR 熱循環(huán)儀(Eppendorf Master-cycle gradient,Germany),低溫高速離心機(jī)(HerauesD-37520,Germany),F(xiàn)-90 型多功能暗箱紫外透射儀,DNA 試劑提取盒(北京天根生化公司),瓊脂糖,rs1800817、rs2285094 Pcr 上下游引物。

    1.3 方法

    1.3.1 樣本采集

    住院或在門診取病人的外周血2 ml,存放于EDTA 管中;農(nóng)三師和圖木舒克的樣本根據(jù)病人信息在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院檢驗(yàn)科中收集。將所收集的樣本放置于-80 ℃冰箱中儲(chǔ)存。

    1.3.2 DNA 的提取

    采用全血DNA 基因提取盒,按照操作步驟提取DNA,將提取出的DNA 至于1.5 ml 凍存管中,并在紫外線分度儀下測(cè)出提取的DNA 濃度,將濃度合格的DNA 樣本至于-20 ℃冰箱中保存。

    1.3.3 引物設(shè)計(jì)

    使用上海生工生物有限公司的軟件設(shè)計(jì)PDGFBB 的rs1800817 位點(diǎn)上游引物CGC TCT TCC TGT CTC TCT GC;下游引物GTT CTC GGG TTC CCA AAG GG。rs2285094 位點(diǎn)的上游引物CCA TGT GCT GAC CAC TTC AT;下游引物GCC ACA TAA CAG GTC TGG CT。

    1.3.4 PCR 擴(kuò)增

    使用移液槍將解凍好的DNA 吸出3 μl、rs2285094 位點(diǎn)上及下游引物各1 μl、PCR mix10μl、無(wú)酶水5 μl 至離心管中組成共20 μl 的反應(yīng)體系(見表1);將PCR 管放入96 孔的梯度PCR 儀里之后再設(shè)定PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件:①預(yù)變性94 ℃5 min②變性94 ℃30 min ③退火62 ℃30 min ④延伸72 ℃27 min ⑤重復(fù)延伸72 ℃5 min ⑥取出反應(yīng)體系標(biāo)記并放入-20 ℃冰箱中備用。用相同的方法進(jìn)行rs1800817 位點(diǎn)DNA 擴(kuò)增。

    表1 PCR 反應(yīng)體系

    1.3.5 凝膠電泳及成像

    用微量加樣槍吸出6 μl DNA maker 加入凝膠的第一個(gè)孔中,再取4 μl DNA 與DNA 上樣緩沖液(loading buffer1 μl)的混合液加入其他凝膠孔內(nèi)并做好記錄。將完成加樣的凝膠平放在水平電泳儀的電泳板上,向電泳板內(nèi)加入TBE 溶液進(jìn)行電泳。電泳參數(shù):電壓100~120 V;電泳時(shí)間:35 min。在電泳結(jié)束后,將電泳凝膠取出放在成像儀內(nèi),通過調(diào)整凝膠塊位置合適后進(jìn)行曝光,將曝光后的圖像保存并記錄。

    1.3.6 DNA 測(cè)序

    將經(jīng)過凝膠電泳過并通過凝膠成像系統(tǒng)確認(rèn)PCR 成功后的DNA 樣本標(biāo)號(hào)記錄,送至博邁德(北京)基因技術(shù)有限責(zé)任公司進(jìn)行DNA 雙向測(cè)序。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    本研究利用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)樣本人群的年齡、身高、體重等計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),符合正態(tài)分布的資料采用ˉx±s 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述,對(duì)分類資料如性別、是否吸煙、是否飲酒等采用n(%)表示;采用哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium)方法對(duì)基因位點(diǎn)的基因型分布進(jìn)行檢驗(yàn);對(duì)兩組間計(jì)量資料的比較采用t 檢驗(yàn),對(duì)計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn);應(yīng)用 二分類logistic回歸模型對(duì)患PKOA 的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行分析。其中以P<0.05 作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

    2 結(jié)果

    2.1 研究對(duì)象的基線資料比較

    分別對(duì)新疆地區(qū)的漢族與維吾爾族膝骨性關(guān)節(jié)炎組與非膝骨性關(guān)節(jié)炎組的年齡、身高、體重、BMI、性別、是否抽煙、是否喝酒(見表2)進(jìn)行比較,各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。性別、是否吸煙、是否飲酒、是否從事重體力勞動(dòng)進(jìn)行比較,各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

    表2 一般資料

    2.2 PCR 和基因測(cè)序結(jié)果

    將所提取的漢族PKOA 組和對(duì)照組、維吾爾族PKOA 組和對(duì)照組的DNA 分別加入PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)引物、rs2285094 位點(diǎn)的引物在PCR儀中擴(kuò)增,將擴(kuò)增后的DNA 行2%瓊脂糖凝膠電泳。將擴(kuò)增結(jié)果滿意的DNA 送至北京博邁德基因公司進(jìn)行雙向測(cè)序,分析受試者的 PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)、rs2285094 位點(diǎn)基因型。比較SNP中的rs1800817 位點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)中的rs1800817 位點(diǎn),有GT、GG 兩種基因型;比較SNP 中的rs2285094 位點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)中的rs2285094 位點(diǎn),有CT、CC 兩種基因型。

    2.3 PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)、rs2285094 位點(diǎn)基因多態(tài)性與維吾爾族PKOA 的相關(guān)性

    維吾爾族PKOA 組PDGF-BB 的rs2285094 位點(diǎn)的CC型、CT型分布不同(χ2=17.9,P<0.001),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,PKOA 組PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)的GT 型、GG 型分布不同(χ2=5.08,P<0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表3。說(shuō)明維吾爾族攜帶rs2285094和rs1800817 位點(diǎn)的CC 型、CT 型的個(gè)體患原發(fā)性PKOA 有相關(guān)性。

    表3 維吾爾族PKOA 與對(duì)照組的基因型分布

    2.4 PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)、rs2285094 位點(diǎn)基因多態(tài)性與漢族PKOA 的相關(guān)性

    漢族PKOA 組PDGF-BB 的rs2285094 位點(diǎn)的CC型、CT 型分布(χ2=0.001,P=0.98)與非PKOA 組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,PKOA 組PDGF-BB 的rs1800817 位點(diǎn)的GT型、GG 型分布(χ2=4.61,P=0.032)與非PKOA 組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表4。說(shuō)明漢族攜帶rs1800817 位點(diǎn)的CC 型、CT 型的個(gè)體患PKOA 有相關(guān)性;而與攜帶rs2285094 無(wú)相關(guān)性。

    表4 漢族PKOA 與對(duì)照組的基因型分布

    2.5 影響OA 患病率的多因素Logistic 回歸分析

    經(jīng)多因素Logistic 回歸分析,年齡、民族、rs1800817位點(diǎn)、rs2285094 位點(diǎn)基因多態(tài)性是OA 的危險(xiǎn)因素;其中民族是PKOA 的危險(xiǎn)因素,這可能與不同民族間的生活方式及飲食不同有關(guān),性別、BMI、抽煙、飲酒、從事重體力勞動(dòng)不是OA 的危險(xiǎn)因素。見表5。

    表5 影響OA 患病率的多因素Logistic 回歸分析

    3 討論

    OA 是全球最常見的關(guān)節(jié)疾病,60 a 以上的男性約有10%,女性約有18%[5-6]。較大的體重、反復(fù)外傷或手術(shù)聯(lián)合結(jié)構(gòu)、出生時(shí)關(guān)節(jié)異常、痛風(fēng)、糖尿病以及與荷爾蒙相關(guān)的疾病等,已經(jīng)被證明為OA[7-8]的風(fēng)險(xiǎn)增加,其特征是進(jìn)行性退化的關(guān)節(jié)軟骨,軟骨下骨的結(jié)構(gòu)改變,骨贅形成和滑膜炎癥[9-11]。此外,血管生成在組織修復(fù)和骨性關(guān)節(jié)炎的病理生理中起著重要作用[12]。但目前治療骨關(guān)節(jié)炎尚未有有效的疾病調(diào)節(jié)劑,Walsh 和Mapp 等研究表明骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)內(nèi)的血管生成,即從已有的血管中生成新血管,是已知的促進(jìn)OA 進(jìn)展的因素[13-14]。特別是軟骨下異常的骨血管生成導(dǎo)致血管系統(tǒng)入侵骨軟骨連接是人類骨關(guān)節(jié)炎的一個(gè)標(biāo)志[15]。有研究表明PDGF-BB 的基因多樣性與金屬裸支架術(shù)后再狹窄有一定的關(guān)系[16]。Arora-Singh和Gourh 在研究中發(fā)現(xiàn)PDGF-BB 中的rs2285094位點(diǎn)基因多樣性與硬皮病的發(fā)生有一定的相關(guān)性。[17-18]近年來(lái)Su 等[19]在實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)PDGFBB 異常增加,誘導(dǎo)軟骨下骨血管生成,促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。

    綜上所述,PDGF-BB 與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。PDGF-BB 基因多樣性與許多疾病都有著密切關(guān)系,但PDGF-BB 基因多樣性與骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)系以往無(wú)相關(guān)的研究。本實(shí)驗(yàn)通過病例對(duì)照研究,使用卡方檢驗(yàn)、多因素logistic 回歸等方法,分析了PDGFBB的rs1800817位點(diǎn)、rs2285094位點(diǎn)多樣性與新疆地區(qū)漢族和維吾爾族膝骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果表示,rs1800817 位點(diǎn)基因型分布在漢族和維吾爾族中均有差異(χ2=5.08,P=0.024;χ2=4.61,P=0.032);rs228509 位點(diǎn)基因型分布在漢族中無(wú)差異(χ2=0.01,P=0.98);rs2285094 位點(diǎn)基因型分布在維吾爾族中有明顯差異(χ2=17.79,P=0.00)。通過多因素logistic 回歸分析,年齡是骨性關(guān)節(jié)炎的危險(xiǎn)因素(OR=1.007),民族是骨性關(guān)節(jié)炎的保護(hù)因素,這可能是維吾爾族與漢族的生活習(xí)慣不同所造成的,這與沈明球等人的流行病學(xué)研究所一致[20]。rs2285094 位點(diǎn)中的CC型和CT 型是骨性關(guān)節(jié)炎的保護(hù)因素(OR=0.011),這提示rs2285094 位點(diǎn)中的CC 型和CT 型攜帶者可能會(huì)減低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),但該位點(diǎn)的基因型分布在漢族人群中的分布無(wú)差異(χ2=0.01,P=0.98);rs1800817 位點(diǎn)中的GT 型和GG 型是骨性關(guān)節(jié)炎的危險(xiǎn)因素,這提示rs1800817 位點(diǎn)中的GT 型和GG 型攜帶者可能會(huì)增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。這可能與本研究樣本量較小有關(guān),限制了相關(guān)性的統(tǒng)計(jì)功效,存在一定局限性。此外,PDGF-BB基因多態(tài)性對(duì)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎易感性可能為原發(fā)性膝骨性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療提供依據(jù),因此有關(guān)結(jié)論尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

    猜你喜歡
    維吾爾族漢族骨關(guān)節(jié)炎
    國(guó)清榮
    抗抑郁藥帕羅西汀或可用于治療骨關(guān)節(jié)炎
    中老年保健(2021年5期)2021-12-02 15:48:21
    膝骨關(guān)節(jié)炎如何防護(hù)?
    維吾爾族手藝人
    Study on Local Financial Supervision Right and Regulation Countermeasures
    改成漢族的滿族人
    國(guó)家視野中的河湟漢族
    Ad36感染對(duì)維吾爾族肥胖患者progranulin表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
    原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)治療研究進(jìn)展
    推拿結(jié)合功能鍛煉治療膝骨關(guān)節(jié)炎24例
    欧美精品啪啪一区二区三区| 国产男女超爽视频在线观看| 999久久久国产精品视频| 国产精品1区2区在线观看. | 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲中文av在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美黑人欧美精品刺激| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 极品教师在线免费播放| 成人国语在线视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 无遮挡黄片免费观看| 免费高清在线观看日韩| 国产成人免费观看mmmm| 色播在线永久视频| 丝袜在线中文字幕| 深夜精品福利| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 女同久久另类99精品国产91| 天堂动漫精品| 99精品久久久久人妻精品| 天堂8中文在线网| a级毛片黄视频| 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品国产区一区二| 99re6热这里在线精品视频| 午夜福利在线观看吧| www.精华液| 国产精品久久久久久精品电影小说| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 香蕉丝袜av| aaaaa片日本免费| 亚洲成人手机| 亚洲美女黄片视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久久视频综合| 在线观看舔阴道视频| 亚洲伊人色综图| 国产午夜精品久久久久久| 久9热在线精品视频| 人人澡人人妻人| 亚洲成人免费电影在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久热在线av| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人精品在线电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产91精品成人一区二区三区 | 97人妻天天添夜夜摸| av欧美777| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久久国产一区二区| a级毛片黄视频| av欧美777| 亚洲av日韩在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久人妻熟女aⅴ| 国产97色在线日韩免费| 老司机亚洲免费影院| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲精品国产色婷婷电影| av免费在线观看网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文欧美无线码| 久久热在线av| 久久久久久久国产电影| 亚洲久久久国产精品| 91国产中文字幕| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 18禁观看日本| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一本综合久久免费| 男人舔女人的私密视频| 视频区欧美日本亚洲| 午夜老司机福利片| 91老司机精品| 午夜视频精品福利| 色94色欧美一区二区| 极品人妻少妇av视频| netflix在线观看网站| 亚洲少妇的诱惑av| av网站免费在线观看视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 成年版毛片免费区| 一个人免费看片子| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 咕卡用的链子| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黄片大片在线免费观看| 精品高清国产在线一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 老司机在亚洲福利影院| 欧美激情 高清一区二区三区| 超色免费av| 制服人妻中文乱码| 动漫黄色视频在线观看| 岛国毛片在线播放| 国产av又大| 成年女人毛片免费观看观看9 | 香蕉丝袜av| 午夜福利在线观看吧| 人人妻人人澡人人看| 久久午夜综合久久蜜桃| 黑人操中国人逼视频| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 在线观看免费高清a一片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 99九九在线精品视频| 午夜激情av网站| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲专区国产一区二区| 成年版毛片免费区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 少妇 在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲精品一二三| 一级,二级,三级黄色视频| 一级片'在线观看视频| 日韩免费高清中文字幕av| 中文字幕制服av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产有黄有色有爽视频| 黄片大片在线免费观看| 日韩有码中文字幕| 2018国产大陆天天弄谢| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲熟女毛片儿| 97在线人人人人妻| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人系列免费观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费看a级黄色片| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 成人黄色视频免费在线看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 18禁观看日本| 日韩欧美免费精品| 一级毛片电影观看| 老熟女久久久| 亚洲精品自拍成人| 色播在线永久视频| 宅男免费午夜| 最黄视频免费看| 热re99久久国产66热| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲精华国产精华精| 制服人妻中文乱码| 男女午夜视频在线观看| 久久九九热精品免费| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一本久久精品| 另类亚洲欧美激情| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲国产欧美网| 搡老岳熟女国产| 丝袜人妻中文字幕| 91九色精品人成在线观看| 一区福利在线观看| 视频区图区小说| 一本久久精品| www.999成人在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久热爱精品视频在线9| 亚洲中文av在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久久久久人人人人人| 91av网站免费观看| 欧美精品av麻豆av| 自线自在国产av| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产日韩欧美视频二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 一级片'在线观看视频| 亚洲熟女毛片儿| 精品久久久久久久毛片微露脸| 大片电影免费在线观看免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 中文字幕av电影在线播放| 韩国精品一区二区三区| 久久99一区二区三区| 国产男女内射视频| 婷婷成人精品国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 午夜免费鲁丝| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲成国产人片在线观看| 在线观看66精品国产| 露出奶头的视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 成人特级黄色片久久久久久久 | 精品少妇久久久久久888优播| 十八禁高潮呻吟视频| 一级片免费观看大全| 国产av国产精品国产| 国产不卡一卡二| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品国产高清国产av | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 美国免费a级毛片| 久久中文看片网| 色婷婷av一区二区三区视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黑丝袜美女国产一区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品国产乱码久久久久久小说| 一边摸一边抽搐一进一出视频| www.999成人在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 丝瓜视频免费看黄片| 母亲3免费完整高清在线观看| 91精品国产国语对白视频| av在线播放免费不卡| 日韩有码中文字幕| 亚洲精品在线美女| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品久久久久成人av| 黄片小视频在线播放| 成人国语在线视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 又大又爽又粗| 国产精品国产高清国产av | 性少妇av在线| 在线观看www视频免费| 国产男女超爽视频在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品亚洲成国产av| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品1区2区在线观看. | 欧美精品一区二区免费开放| 下体分泌物呈黄色| 久久人妻熟女aⅴ| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 老司机深夜福利视频在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 久久久久视频综合| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| www日本在线高清视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久这里只有精品19| 国产精品免费视频内射| 一夜夜www| 色视频在线一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 麻豆国产av国片精品| 在线 av 中文字幕| 亚洲人成77777在线视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 一区福利在线观看| 91麻豆av在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美日韩一级在线毛片| 精品国产亚洲在线| 亚洲精华国产精华精| 一本久久精品| videosex国产| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲视频免费观看视频| 夫妻午夜视频| 国产真人三级小视频在线观看| 日本wwww免费看| 久久国产精品影院| cao死你这个sao货| 欧美国产精品va在线观看不卡| 黄色视频不卡| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲成a人片在线一区二区| 热re99久久精品国产66热6| 满18在线观看网站| 高清欧美精品videossex| 黄色视频不卡| 我的亚洲天堂| 国产精品国产av在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 好男人电影高清在线观看| 超色免费av| a级毛片黄视频| 黑丝袜美女国产一区| 午夜免费鲁丝| 亚洲,欧美精品.| 欧美成人免费av一区二区三区 | 一区福利在线观看| 久久久国产一区二区| 97在线人人人人妻| 亚洲伊人久久精品综合| 大型黄色视频在线免费观看| 黄片大片在线免费观看| 热99国产精品久久久久久7| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99热国产这里只有精品6| 亚洲专区字幕在线| 国产免费现黄频在线看| 免费在线观看日本一区| kizo精华| 国产成人啪精品午夜网站| 新久久久久国产一级毛片| 99香蕉大伊视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 色94色欧美一区二区| xxxhd国产人妻xxx| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久热在线av| 亚洲男人天堂网一区| 欧美精品av麻豆av| 欧美午夜高清在线| 久久久精品94久久精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 欧美激情久久久久久爽电影 | 无限看片的www在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 一区二区三区国产精品乱码| 视频区欧美日本亚洲| 精品国内亚洲2022精品成人 | 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 看免费av毛片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品一区二区在线不卡| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产亚洲精品第一综合不卡| 性少妇av在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产麻豆69| 好男人电影高清在线观看| 99香蕉大伊视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久性视频一级片| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲精华国产精华精| 岛国在线观看网站| 在线看a的网站| 免费日韩欧美在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品美女久久av网站| 我的亚洲天堂| 国产欧美亚洲国产| 丰满迷人的少妇在线观看| 一个人免费看片子| 又大又爽又粗| 精品一品国产午夜福利视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 91大片在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久ye,这里只有精品| 国产成人欧美| 亚洲人成电影免费在线| 韩国精品一区二区三区| 亚洲精品乱久久久久久| 国产真人三级小视频在线观看| 777米奇影视久久| 欧美在线黄色| 成人影院久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产免费视频播放在线视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| www日本在线高清视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美日韩精品网址| 高清毛片免费观看视频网站 | 日本wwww免费看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 在线av久久热| 精品人妻在线不人妻| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 看免费av毛片| 天天添夜夜摸| 精品久久久精品久久久| 亚洲七黄色美女视频| 色老头精品视频在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲伊人久久精品综合| 精品国产一区二区三区四区第35| 高清在线国产一区| 高清视频免费观看一区二区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 女人久久www免费人成看片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲av电影在线进入| 中文字幕高清在线视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 九色亚洲精品在线播放| 大香蕉久久成人网| 久久久久久免费高清国产稀缺| 麻豆国产av国片精品| 91字幕亚洲| 亚洲伊人久久精品综合| 在线观看一区二区三区激情| 高清在线国产一区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 丁香六月欧美| 性高湖久久久久久久久免费观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 美女主播在线视频| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产xxxxx性猛交| 欧美国产精品一级二级三级| 99re6热这里在线精品视频| 丁香六月欧美| 大陆偷拍与自拍| 无限看片的www在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 黄色成人免费大全| 欧美乱妇无乱码| 午夜精品国产一区二区电影| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久久国产一区二区| 亚洲视频免费观看视频| 丁香六月欧美| 美女高潮到喷水免费观看| 91大片在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 一进一出抽搐动态| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 涩涩av久久男人的天堂| 高清av免费在线| 热99久久久久精品小说推荐| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产精品.久久久| 在线观看舔阴道视频| www.999成人在线观看| www.熟女人妻精品国产| 手机成人av网站| 精品亚洲成国产av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲av美国av| 久久ye,这里只有精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久香蕉激情| www.自偷自拍.com| 男人操女人黄网站| 在线观看66精品国产| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 中文字幕精品免费在线观看视频| 天天添夜夜摸| 一区二区三区乱码不卡18| 成在线人永久免费视频| 91精品国产国语对白视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 美女福利国产在线| 亚洲男人天堂网一区| 国产在线精品亚洲第一网站| 黄片小视频在线播放| 精品第一国产精品| 黄片小视频在线播放| 黄色a级毛片大全视频| 天堂动漫精品| 久久青草综合色| 十八禁网站免费在线| 日日爽夜夜爽网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 无人区码免费观看不卡 | a在线观看视频网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 夜夜爽天天搞| 国产精品1区2区在线观看. | 考比视频在线观看| 午夜久久久在线观看| 国产高清激情床上av| 美女扒开内裤让男人捅视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 黄频高清免费视频| 国产在视频线精品| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 我要看黄色一级片免费的| 久久亚洲精品不卡| 免费观看a级毛片全部| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美日韩黄片免| 最黄视频免费看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 桃花免费在线播放| 涩涩av久久男人的天堂| 成年女人毛片免费观看观看9 | 99国产极品粉嫩在线观看| 国产区一区二久久| 搡老岳熟女国产| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 精品国产乱码久久久久久男人| 色视频在线一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99精品久久久久人妻精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一区二区三区精品91| 国产成人欧美| 国产国语露脸激情在线看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产麻豆69| 日韩免费av在线播放| 香蕉国产在线看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 亚洲专区国产一区二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲一区中文字幕在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一本久久精品| 国产av精品麻豆| 一本久久精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 怎么达到女性高潮| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 欧美黑人精品巨大| 精品欧美一区二区三区在线| 天天影视国产精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品视频人人做人人爽| 国产成人啪精品午夜网站| 久热这里只有精品99| 欧美国产精品一级二级三级| 国产av一区二区精品久久| 成人影院久久| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品免费一区二区三区在线 | 最新的欧美精品一区二区| 亚洲专区国产一区二区| 十八禁人妻一区二区| 精品国产亚洲在线| tocl精华| 丝袜在线中文字幕| 欧美日韩一级在线毛片| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品 欧美亚洲| 99在线人妻在线中文字幕 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜福利在线观看吧| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品久久久久久电影网| 国产又爽黄色视频| 搡老乐熟女国产| 高清视频免费观看一区二区| 国产免费视频播放在线视频| 免费高清在线观看日韩| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品影院久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| kizo精华| 我的亚洲天堂| 国产有黄有色有爽视频| 97人妻天天添夜夜摸| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 91字幕亚洲| 十分钟在线观看高清视频www| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一区二区三区精品91|