單細(xì)胞水平檢測(cè)前列腺液CD64與NIH-CPSI評(píng)分聯(lián)合應(yīng)用在診療慢性前列腺炎患者中的價(jià)值

劉小林，馬麗萍，周 彥

(連云港市第二人民醫(yī)院，江蘇 連云港 222023)

慢性前列腺炎(chronic prostatitis，CP)是男性常見的疾病之一，美國國立衛(wèi)生院報(bào)道其在美國的發(fā)病率最高達(dá)到16%,2009年的流行病調(diào)查報(bào)告顯示目前國內(nèi)慢性前列腺炎患病率約為4.5%。CP患病率高、治愈率低、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，對(duì)患者生活質(zhì)量產(chǎn)生較大的影響。盡管近年來，國內(nèi)外的醫(yī)學(xué)專家進(jìn)行了大量的研究，并制定了新的分類標(biāo)準(zhǔn)，但是對(duì)其發(fā)病原因、診療規(guī)范仍未給出明確的答案[1-4]。NIH-CPSI評(píng)分指數(shù)表是一種實(shí)用的前列腺炎癥狀自測(cè)表，其操作方便，可以較有效、準(zhǔn)確地反映患病程度。但是這種根據(jù)問答的評(píng)分表，受到患者自身對(duì)疾病的感知程度，文化背景以及接診醫(yī)生工作經(jīng)驗(yàn)的影響，對(duì)病情的正確判斷有一定影響且不能為病情提供定量指標(biāo)[5]。筆者希望在NIH-CPSI基礎(chǔ)上結(jié)合一個(gè)比前列腺炎常規(guī)檢測(cè)更準(zhǔn)確的定量結(jié)果，便于臨床診療。相關(guān)研究表明：健康體檢者外周血中中性粒細(xì)胞中CD64低表達(dá)，但是當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，其CD64表達(dá)迅速升高[4]?；谶@種原理，現(xiàn)將CD64與CPSI在慢性前列腺炎中的關(guān)系進(jìn)行初步的研究，并將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集我院門診前列腺炎癥狀患者資料，根據(jù)共識(shí)指南推薦的標(biāo)準(zhǔn)[5]經(jīng)本院泌尿科專業(yè)主任醫(yī)師結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)確診為慢性細(xì)菌性前列腺炎的患者中，隨機(jī)選取50例患者EPS作為試驗(yàn)組，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)前列腺液中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)，患者年齡20～60歲，平均為40歲。另外選擇20例健康體檢者作為對(duì)照組，平均年齡33歲，為了不耽誤患者治療，在檢測(cè)前列腺液常規(guī)及細(xì)菌培養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行中性細(xì)胞CD64表達(dá)檢測(cè)。分別檢測(cè)其在治療1周后、治療4周后的前列腺液中性粒細(xì)胞CD64，同期進(jìn)行CPSI評(píng)分測(cè)算。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2標(biāo)本采集：按摩受試者前列腺，前列腺液均用有蓋的尖底無菌管收集，立即送檢。所有標(biāo)本均按“二杯法”留取標(biāo)本，前列腺按摩液用有蓋的尖底無菌管收集,立即送檢做細(xì)菌培養(yǎng)和流式細(xì)胞儀法定量計(jì)數(shù)CD64。樣本量要求最小不少于70 μl。

1.3方法：BD公司ABC(antibodies bound per cell)單個(gè)細(xì)胞抗原結(jié)合數(shù)量檢測(cè)法，應(yīng)用QuantiBRITE PE標(biāo)準(zhǔn)微球在流式細(xì)胞儀上用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞抗原結(jié)合數(shù)量(ABC)。用無菌的吸頭無菌操作吸取前列腺液50 μl加入TRU-COUNT管與20 μl CD64PE/CD45PerCP抗體(美國BD公司)混勻，避光室溫放置20 min后加1×PBS 0.43 ml，避光室溫放置0.5 h，上流式細(xì)胞儀(BD公司FACS Calibur)檢測(cè)，應(yīng)用Cellquest軟件，進(jìn)行CD64定量檢測(cè)。同期取全血血漿，采用速率散射比濁法進(jìn)行CRP定量分析，分別于就診時(shí)、治療1周和4周3次留取標(biāo)本。

1.4CPSI評(píng)分：對(duì)50例慢性前列腺炎患者，在治療前、治療1周后、治療4周后按照NIH-CPSI嚴(yán)格評(píng)分，記錄下每個(gè)患者分值和評(píng)分時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1慢性前列腺炎患者在抗生素治療過程中CD64與CPSI總評(píng)分的比較：健康對(duì)照組的前列腺液中性粒細(xì)胞CD64值為966.214±106.263，50例患者(僅分析治療前)的前列腺液中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)值1 876.305±134.284，顯著高于對(duì)照組。慢性前列腺炎患者在對(duì)癥治療過程中，在首次治療前、治療1周后、治療4周后進(jìn)行前列腺液中性粒細(xì)胞CD64檢測(cè)，同期進(jìn)行CPSI評(píng)分。見表1。

表1 慢性前列腺炎患者在對(duì)癥治療過程中CD64與CPSI評(píng)分的比較

2.2前列腺液單個(gè)核細(xì)胞CD64與CPSI總評(píng)分表達(dá)情況分析：慢性前列腺炎患者治療過程中，CD64與CPSI總評(píng)分平均分為增高和減低，CD64表達(dá)水平和CPSI按照表達(dá)平均分成增高和降低兩組，其中二者都高表達(dá)組有15例患者，而二者低表達(dá)組3例。見表2。

表2 前列腺液單個(gè)核細(xì)胞CD64與CPSI總評(píng)分表達(dá)統(tǒng)計(jì)

3 討論

CD64主要分布在巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等細(xì)胞表面。CD64表達(dá)被細(xì)胞因子所控制，在功能上起連接體液免疫和細(xì)胞免疫的作用，其為免疫球蛋白IgG的Fc段受體1(IgG、FcγR I)。當(dāng)機(jī)體被感染，中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)快速增加，與其補(bǔ)體或抗體結(jié)合后，引發(fā)免疫反應(yīng)，包括吞噬作用、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用和細(xì)胞因子的釋放。研究表明在慢性前列腺炎疾病中，中性粒細(xì)胞CD64的檢測(cè)具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值[6-7]。

本試驗(yàn)為了嚴(yán)格控制結(jié)果準(zhǔn)確性，采取排除標(biāo)準(zhǔn)控制實(shí)驗(yàn)前的篩選：具備以下情況之一者從統(tǒng)計(jì)中排除：①因試驗(yàn)分散而漏做或標(biāo)本量<70 μl無法做全項(xiàng)目，造成報(bào)告數(shù)據(jù)不完整的病例；②近1個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過檢查治療，有可肯能影響本試驗(yàn)結(jié)果的患者；③淋病、非淋菌性尿道炎現(xiàn)癥患者；④年齡上限定為≤55歲，消除前列腺增生帶來的影響。本文章所有標(biāo)本，均細(xì)菌培養(yǎng)陽性。臨床主任醫(yī)師確診為細(xì)菌性前列腺炎。

慢性前列腺炎治療的首選藥物是喹諾酮類抗生素，療程一般為4周，藥物治療為主的過程配合對(duì)癥治療[8]。本試驗(yàn)按照抗生素治療療程1周和4周檢測(cè)結(jié)果，觀察治療后患者的臨床表現(xiàn)與CPSI評(píng)分是否一致，與CD64表達(dá)是否一致，并進(jìn)一步比較CD64和CPSI的相關(guān)性，研究[6-7]結(jié)果表明：對(duì)癥治療前列腺液中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)量較治療1周組下降，CPSI的分?jǐn)?shù)也降到7.0±10.5和18.0±10.5，證明對(duì)癥治療有效果，也間接證明了CD64作為感染指標(biāo)的準(zhǔn)確性，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)癥治療4周后CD64表達(dá)與對(duì)照和治療后1周組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明CD64表達(dá)量不僅與前列腺液感染有一定關(guān)系，其表達(dá)水平與感染的嚴(yán)重程度相關(guān)。感染的程度越重，表達(dá)水平越高。反過來說，前列腺液中性粒細(xì)胞CD64隨著療程過程表達(dá)率較未治療前下降，表明：對(duì)癥治療后，隨著感染控制、病情的穩(wěn)定好轉(zhuǎn)，同時(shí)患者疾病疼痛不適、排尿不盡等癥狀有一定緩解，CPSI評(píng)分降低。定量檢測(cè)CD64動(dòng)態(tài)改變有助于慢性細(xì)菌性前列腺炎感染程度和用藥療效的監(jiān)測(cè)研究表明隨著治療時(shí)間的增加CD64表達(dá)值逐漸變小。與CPSI評(píng)分隨之治療時(shí)間呈相同的下降趨勢(shì)。并且在第4周之后的檢測(cè)中有部分CD64接近健康對(duì)照組值。但也有1例患者，在治療前CPSI-1評(píng)分很高，疼痛的感覺很明顯，也是就診原因，另有2例患者CD64表達(dá)量很高，但CPSI總分得分很低，不排除個(gè)人感受和患者對(duì)疾病產(chǎn)生一定程度的耐受。4周后結(jié)果與治療1周略相同。

試驗(yàn)中，筆者試圖通過CD64表達(dá)高低分析NIH-CPSI評(píng)分，發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，數(shù)據(jù)相差不大，這可能與CPSI個(gè)體差異有關(guān)，故分為增高和降低兩組分析表達(dá)，發(fā)現(xiàn)僅按照NIH-CPSI評(píng)分，會(huì)忽略癥狀很輕或者癥狀不明顯但是已經(jīng)感染程度較深的患者。測(cè)量前列腺液中性粒細(xì)胞CD64值雖然也存在陰性的概率，但是其測(cè)定方法相對(duì)簡單，靈敏度高，可以快速檢測(cè)出結(jié)果，是一種比較可靠的診斷方法。本試驗(yàn)在治療過程中對(duì)前列腺液中性粒細(xì)胞CD64進(jìn)行定量檢測(cè)，可以進(jìn)行療效觀察和可能能夠預(yù)示預(yù)后情況，同期結(jié)合NIH-CPSI 評(píng)分，二者聯(lián)合應(yīng)用，為CP治療提供有利的客觀指標(biāo)，既能檢測(cè)實(shí)際感染的程度又能發(fā)現(xiàn)該病累積和對(duì)泌尿系統(tǒng)影響的程度。由于本研究樣本數(shù)目少，且該病并未被患者清楚認(rèn)識(shí)，使有部分患者未能全程跟蹤監(jiān)測(cè)。僅能部分解釋慢性前列腺炎的臨床問題，需要擴(kuò)大樣本量，有待進(jìn)一步研究。

總之，前列腺液中性粒細(xì)胞CD64定量檢測(cè)可為細(xì)菌性前列腺炎的診療提供依據(jù)，且聯(lián)合NIH-CPSI評(píng)分，有助于判斷感染的程度和評(píng)價(jià)預(yù)后。